專利名稱：一種銀耳菌種繁育方法
技術領域：
本發明屬于食用菌栽培技術領域，涉及一種銀耳菌種繁育方法。
背景技術：
銀耳、又名白木耳、雪耳，是我國久負盛名的山珍菌類。隸屬與擔子菌綱，銀耳目，銀耳科，銀耳屬。銀耳是著名的食用兼藥用菌，營養十分豐富。因而具有較高的藥用價值，還含有多種人體必需氨基酸。隨著食用菌產業的不斷發展壯大，銀耳的生產現已成為某些地區的大部分農民主要經濟來源之一。菌種，好比農作物的種子，是食用菌生產的根本，其優劣直接影響著食用菌的產量和質量。人工培育的菌種有母種、原種和栽培種之分，母種是用孢子分離或組織分離培育而成的菌絲體，把母種擴大到木屑、棉仔殼等為主的培養料上的菌種稱為原種，由原種擴大培養成為生產上使用的菌種稱為栽培種。銀耳生活史較復雜， 銀耳純菌絲的制得與保存日前仍相當困難。將銀耳純菌絲接種在普通PDA培養基上，菌絲生長緩慢，且易向節孢子轉變，菌絲易變黃、膠質化。銀耳純菌絲沒有分解木質纖維素的能 力，只有當銀耳菌絲與耳友菌絲(又稱香灰菌，子囊菌亞門的一種真菌)生活在一起才能發育結耳。為克服傳統銀耳菌種培育方法培育出的菌種容易退化、生長不穩定且銀耳產量不高的缺陷，2009年10月12日，江壽根發明的專利號CN 102037849A公開了一種銀耳菌種培育方法，通過挑選出生長強壯優良的銀耳孢子所萌發的菌絲與生長有力的香灰菌絲進行交合培育，從而培育出抵抗力強、不易退化、生長穩定、產量高的銀耳菌種。然而對進行交合選取的銀耳菌絲和香灰菌絲的菌絲特征以及交合比例缺乏把握，導致培育出的銀耳菌種重復性不高。

發明內容
為了克服現有技術中存在的上述不足之處，本發明的目的在于提供一種銀耳菌種繁育方法，培育出一種重復性高、抵抗力強、不易退化、生長穩定、產量高的銀耳菌種。為了達到上述之目的，本發明采用如下具體技術方案一種銀耳菌種繁育方法，包括如下步驟
(I)銀耳純白菌絲的提取
第一步是分離材料的選取從袋栽銀耳栽培房中，選取子實體形態為牡丹花形、耳片肥厚、色澤鮮白、無病蟲害感染的理想耳朵，置于顯微鏡下觀察并認真鑒定后，選為分離材料；
第二步是將分離材料用無菌水多次漂洗后吸干水分；
第三步是培養將分離材料接種至木屑培養基上，塞好棉塞，在25°c下培養7 10天，直至培養基上出現白色粒狀菌絲團，將菌絲團勾出，接入PDA培養基上，置于23 25°C的恒溫箱內培養10天；
第四步是對優良的銀耳純白菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲顏色為白色、淡黃色或黃色；氣生菌絲直立或斜立平貼于培養基表面，基內菌絲生于培養基里面，其菌絲直徑為I. 5 3微米，有橫膈膜，部分菌絲體有明顯的鎖狀連合；
第五步是銀耳純白菌絲的提取通過觀察，依據第四步的判斷標準，選擇菌絲走勢良好，爬壁力強，舒展雄壯的菌絲作為銀耳純白菌絲；
(2)香灰菌絲的提取
第一步是分離材料的選取在袋栽培養基深層，取一小點含有菌絲體的木屑；
第二步是培養將分離材料接種至PDA培養基上，在23 26°C條件下培養3 4天，接種塊邊緣長出白色粗狀的菌絲，菌絲體顏色由白色轉為黃綠色，隨著菌絲的生長，分泌出黑色素，促使培養基顏色逐漸變黑并不斷加深；
第三步是對優良的香灰菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲白色、羽毛狀，氣生菌絲呈灰白色、細絨狀，有時有碳質的黑疤；分生孢子梗呈掃帚狀，分生孢子為黃綠色至草綠色，近橢圓形，直徑3 5微米；
第四步是香灰菌絲的提取通過觀察，依據第三步的判斷標準，選擇長勢旺、爬壁力強的羽毛狀菌絲，采取先端分離法，將菌絲體挑出來，并經過數次移植，獲得羽毛狀香灰菌絲；
(3)兩種菌絲交合培養成母種采用斜面試管交合培育法，把銀耳純白菌絲接入試管培養基的中央，挑取少許香灰菌絲，接于離銀耳純白菌絲I 2厘米部位，二者交合后，香灰菌絲呈黑色且布滿試管內全部培養基，而銀耳純白菌絲的接種塊上出現黃紅色水珠。所述的步驟(3)中銀耳純白菌和香灰菌交合比例為千分之一。所述的兩種菌絲交合培養成母種也可以在木屑培養基上進行，先把銀耳純白菌絲連同培養基少許從試管中挑取出來，放入木屑培養基上，然后提取少許的香灰菌絲，放入銀耳純白菌絲旁邊或上面，在23 25°C下培養，二者交合時接種塊的白毛團上出現黃紅色水珠。與現有的技術相比，本發明具有以下突出優點和效果本發明通過銀耳純白菌絲與香灰菌絲交合培育銀耳菌種，由于銀耳純白菌絲與香灰菌絲比例適當，有早期發育快的特點，香灰菌絲前期長勢好，能趕在氨味產生前就強壯發育，保證了菌種的高產、高抵抗力以及菌種的穩定性；且結合菌絲體特征的判斷來確定提取的銀耳純白菌絲和香灰菌絲的優良性狀，保證了銀耳菌種制備的高重復性。
具體實施例方式 下列實例進一步說明本發明，但不應當作為本發明的限制。通過培養料制作、裝袋打穴、滅菌、冷卻、接種與菌絲培育獲得袋栽銀耳，然后按以下三個環節完成銀耳菌種的繁育
(I)銀耳純白菌絲的提取
第一步是分離材料的選取從袋栽銀耳栽培房中，選取子實體形態為牡丹花形、耳片肥厚、色澤鮮白、無病蟲害感染的理想耳朵，置于顯微鏡下觀察并認真鑒定后，選為分離材料；
第二步是將分離材料用無菌水多次漂洗后吸干水分；
第三步是培養將分離材料接種至木屑培養基上(木屑培養基由木屑75%、麥片20%、石膏粉5%形成的料，與水按1:1.2配制而成)，塞好棉塞，在25°C下培養7 10天，直至培養基上出現白色粒狀菌絲團，將菌絲團勾出，接入PDA培養基上(PDA培養基由馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂18g/L配制而成)，置于23 25°C的恒溫箱內培養10天；
第四步是對優良的銀耳純白菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲顏色為白色、淡黃色或黃色；氣生菌絲直立或斜立平貼于培養基表面，基內菌絲生于培養基里面，其菌絲直徑為I. 5 3微米，有橫膈膜，部分菌絲體有明顯的鎖狀連合；
第五步是銀耳純白菌絲的提取通過觀察，依據第四步的判斷標準，選擇菌絲走勢良好，爬壁力強，舒展雄壯的菌絲作為銀耳純白菌絲；
(2)香灰菌絲的提取
第一步是分離材料的選取在袋栽培養基深層，取一小點含有菌絲體的木屑；
第二步是培養將分離材料接種至PDA培養基上，在23 26°C條件下培養3 4天，接種塊邊緣長出白色粗狀的菌絲，菌絲體顏色由白色轉為黃綠色，隨著菌絲的生長，分泌出黑色素，促使培養基顏色逐漸變黑并不斷加深；
第三步是對優良的香灰菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲白色、羽毛狀，氣生菌絲呈灰白色、細絨狀，有時有碳質的黑疤；分生孢子梗呈掃帚狀，分生孢子為黃綠色至草綠色，近橢圓形，直徑3 5微米；
第四步是香灰菌絲的提取通過觀察，依據第三步的判斷標準，選擇長勢旺、爬壁力強的羽毛狀菌絲，采取先端分離法，將菌絲體挑出來，并經過數次移植，獲得羽毛狀香灰菌絲；
(3)兩種菌絲交合培養成母種銀耳純白菌和香灰菌交合比例為千分之一，采用斜面試管交合培育法，把銀耳純白菌絲接入試管培養基的中央，挑取少許香灰菌絲，接于離銀耳純白菌絲I 2厘米部位，二者交合后，香灰菌絲呈黑色且布滿試管內全部培養基，而銀耳純白菌絲的接種塊上出現黃紅色水珠。
權利要求
1.一種銀耳菌種繁育方法，其特征在于包括如下步驟 銀耳純白菌絲的提取 第一步是分離材料的選取從袋栽銀耳栽培房中，選取子實體形態為牡丹花形、耳片肥厚、色澤鮮白、無病蟲害感染的理想耳朵，置于顯微鏡下觀察并認真鑒定后，選為分離材料； 第二步是將分離材料用無菌水多次漂洗后吸干水分； 第三步是培養將分離材料接種至木屑培養基上，塞好棉塞，在25°c下培養7 10天，直至培養基上出現白色粒狀菌絲團，將菌絲團勾出，接入PDA培養基上，置于23 25°C的恒溫箱內培養10天； 第四步是對優良的銀耳純白菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲顏色為白色、淡黃色或黃色；氣生菌絲直立或斜立平貼于培養基表面，基內菌絲生于培養基里面，其菌絲直徑為I. 5 3微米，有橫膈膜，部分菌絲體有明顯的鎖狀連合； 第五步是銀耳純白菌絲的提取通過觀察，依據第四步的判斷標準，選擇菌絲走勢良好，爬壁力強，舒展雄壯的菌絲作為銀耳純白菌絲； 香灰菌絲的提取 第一步是分離材料的選取在袋栽培養基深層，取一小點含有菌絲體的木屑； 第二步是培養將分離材料接種至PDA培養基上，在23 26°C條件下培養3 4天，接種塊邊緣長出白色粗狀的菌絲，菌絲體顏色由白色轉為黃綠色，隨著菌絲的生長，分泌出黑色素，促使培養基顏色逐漸變黑并不斷加深； 第三步是對優良的香灰菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲白色、羽毛狀，氣生菌絲呈灰白色、細絨狀，有時有碳質的黑疤；分生孢子梗呈掃帚狀，分生孢子為黃綠色至草綠色，近橢圓形，直徑3 5微米； 第四步是香灰菌絲的提取通過觀察，依據第三步的判斷標準，選擇長勢旺、爬壁力強的羽毛狀菌絲，采取先端分離法，將菌絲體挑出來，并經過數次移植，獲得羽毛狀香灰菌絲； 兩種菌絲交合培養成母種采用斜面試管交合培育法，把銀耳純白菌絲接入試管培養基的中央，挑取少許香灰菌絲，接于離銀耳純白菌絲I 2厘米部位，二者交合后，香灰菌絲呈黑色且布滿試管內全部培養基，而銀耳純白菌絲的接種塊上出現黃紅色水珠。
2.根據權利要求I所述的一種銀耳菌種繁育方法，其特征在于環節(3)中銀耳純白菌和香灰菌交合比例為千分之一。
3.根據權利要求I所述的一種銀耳菌種繁育方法，其特征在于兩種菌絲交合培養成母種也可以在木屑培養基上進行，先把銀耳純白菌絲連同培養基少許從試管中挑取出來，放入木屑培養基上，然后提取少許的香灰菌絲，放入銀耳純白菌絲旁邊或上面，在23 25°C下培養，二者交合時接種塊的白毛團上出現黃紅色水珠。
全文摘要
本發明涉及一種銀耳菌種繁育方法，屬于食用菌栽培技術領域，本方法包括銀耳純白菌絲的提取、香灰菌絲的提取以及兩種菌絲交合培養成母種三個步驟，其中在兩種菌絲的提取過程中結合了菌絲體特征的判定，為選取優良菌絲體的來源劃分了統一標準，本發明由于銀耳純白菌絲與香灰菌絲交合比例適當，有早期發育快的特點，香灰菌絲前期長勢好，能趕在氨味產生前就強壯發育，保證了菌種的高產、高抵抗力以及菌種的穩定性；且結合菌絲體特征的判斷來確定提取的銀耳純白菌絲和香灰菌絲的優良性狀，保證了銀耳菌種制備的高重復性。
文檔編號A01G1/04GK102884945SQ20121042000
公開日2013年1月23日 申請日期2012年10月29日 優先權日2012年10月29日
發明者彭彪, 陳太權, 林永安, 蓋新敏, 林朝暉 申請人:寧德師范學院