專利名稱：一種利用葡萄糖母液制備生物肥發酵劑的方法
技術領域：
本發明涉及一種發酵劑的制作方法，特別是一種利用葡萄糖母液制備生物肥發酵劑的方法。
背景技術：
我國是世界污染大國，在我國造成第一污染的產業是農業。近40年來，我國為滿足糧食生產需要，其農用化學品投入已經達到了相當高的比例，使得農業從過去一個無污染的綠色產業變成了今天高耗能、高污染的產業。過量施用化肥，給我國的壞境和食品安全造成了巨大的威脅。大量的化肥使用使得每年每季投入農田的化肥在當季作物收獲后，有相當數量殘留在土壤中，其中氮肥約30%、磷肥約70%、鉀肥約40%。磷肥的利用率少于25%，由于磷酸根化學性質活潑，在土壤中與鋅離子、鎂離子、鈣離子、鐵離子、鋁離子等結合，形成難溶磷酸鹽，造成土壤中全磷量提高，而有效磷卻很低。隨著保產量而長期不計后果地盲目施用化肥，使得土壤結構被破壞，土壤板結，作物根部土壤缺水，并惡化了植物根部的生態環境。植物主要是利用根部在土壤中吸收養分，而這樣的土壤直接導致了作物不良的生長發育，增加生產成本、降低產量和質量，制約了農業的可持續發展。長期大量盲目的施用化肥已成為惡性循環，不僅難以提高作物產量，還破壞了土壤結構，使得地力下降。20世紀70年代，國際上成立了“有機農業聯盟”在世界范圍內提倡不用或少用化肥，并積極研究化肥的替代品。目前，化肥的最好替代品是生物肥，我國自上世紀90年代開始重視這方面的工作，1990年國家科委將微生物肥料的應用列入國家成果重點推廣計劃，進一步推動了我國微生物肥料生產的發展，國家計委、經貿委在《當前國家重點鼓勵的產業、產品和技術目錄》中，將生物肥料作為農業高新技術產品予以大力扶持。專家們將生物肥料作為促進生態農業發展的重要技術之一向全國各地推廣。葡萄糖母液是淀粉糖廠的副產物，這種母液含糖量高，一般來說，還原糖在35%左右，這部分母液若重結晶從成本上計算不可取，許多廠家將母液作為副產品低價賣掉，造成了很大的浪費。由于葡萄糖母液中含有充足的碳源，所以其稀釋后加入少量氮源和部分營養鹽可作為良好的微生物培養基培養微生物菌種，本發明的生物肥發酵劑菌種培養基是以葡萄糖母液為主要原料配制的。

發明內容
本發明的目的在于針對施用傳統化肥危害食品安全、破壞耕地、污染環境的不足而提供的用于生產生物肥的發酵劑的制作方法。本發明的目的是這樣實現的
I、發酵劑菌株培養液的制備①褐球固氮菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入硫酸銨15克、玉米漿20毫升、磷酸氫二鉀O. 8克，磷酸二氫鉀O. 2克，硫酸鎂O. 5克，硫酸鈣O. I克，酵母膏O.5克，攪拌溶解，調節PH至7. O 7. 2，即得褐球固氮菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121 °C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種褐球固氮菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中褐球固氮菌活菌數> 109/ml時，即視為褐球固氮菌培養液制備結束。②巨大芽孢桿菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入玉米漿20毫升，碳酸鈣2. 5克，磷酸氫二鉀I克，硫酸鎂O. 5克，氯化鈉O. 3克，氯化鉀O. 3克，硫酸錳O. 05克，硫酸亞鐵O. 05克，攪拌溶解，調節PH至7.0，即得巨大芽孢桿菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121°C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種巨大芽孢桿菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中巨大芽孢桿菌活菌數> IO9/ml時，即視為巨大芽孢桿菌培養液制備結束。③膠凍樣芽孢桿菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入玉米漿20毫升，碳酸鈣2. 5克，磷酸氫二鉀I克，硫酸鎂O. 5克，氯化鈉O. 3克，氯化鉀O. 3克，硫酸錳
O.05克，硫酸亞鐵O. 05克，攪拌溶解，調節PH至7. 0，即得膠凍樣芽孢桿菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121 °C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種膠凍樣芽孢桿菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中膠凍樣芽孢桿菌活菌數> IOVml時，即視為膠凍樣芽孢桿菌培養液制備結束。④潮濕纖維單孢菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入玉米漿20毫升，碳酸鈣2. 5克，磷酸氫二鉀I克，硫酸鎂O. 5克，氯化鈉O. 3克，氯化鉀O. 3克，硫酸錳
O.05克，硫酸亞鐵O. 05克，攪拌溶解，調節PH至7. 0，即得潮濕纖維單孢菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121°C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種潮濕纖維單孢菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中潮濕纖維單孢菌活菌數> 109/ml時，即視為潮濕纖維單孢菌培養液制備結束。2、生物肥發酵劑的制備
將褐球固氮菌培養液、巨大芽孢桿菌培養液、膠凍樣芽孢桿菌培養液、潮濕纖維單孢菌培養液分別采用冷凍離心機在4°C、轉速6000r/min條件下離心10分鐘，分別得褐球固氮菌菌泥、巨大芽孢桿菌菌泥、膠凍樣芽孢桿菌菌泥和潮濕纖維單孢菌菌泥。配制12%的脫脂乳溶液，加入1%的谷氨酸鈉、1%的海藻糖、2%的甘油在116°C條件下滅菌15分鐘，作為保護劑。按照保護劑與菌泥體積比為10:1的比例分別將保護劑和菌泥混合均勻，分別將上述混合液在_40°C的條件下預凍3小時，放入真空冷凍干燥機中凍干，即分別得褐球固氮菌凍干粉、巨大芽孢桿菌凍干粉、膠凍樣芽孢桿菌凍干粉和潮濕纖維單孢菌凍干粉。按照褐球固氮菌凍干粉、巨大芽孢桿菌凍干粉、膠凍樣芽孢桿菌凍干粉和潮濕纖維單孢菌凍干粉質量比為1:1:1:1的比例將上述物質混合，再按照每克混合凍干粉加入10000單位的比例加入飼用纖維素酶，混合均勻后真空包裝即得成品。本發明的生物肥發酵劑可將各種作物秸桿、瓜藤、畜禽糞便、樹葉雜草、糠醋渣、酒渣、醋渣、醬油渣、植物餅柏、豆腐渣及城鄉生活廢棄物快速變成生物肥料。發酵一噸成品有機肥只需用O. 2 O. 3公斤生物肥發酵劑，5 10天即可將上述廢棄物變成生物有機肥料。
(四)、具體實施方案
本發明采用的4支菌株全部采購于中國工業微生物菌種保藏管理中心，分別是褐球固氮菌CICC10309、巨大芽孢桿菌CICC21446、膠凍樣芽孢桿菌CICC23640、潮濕纖維單孢菌CICC23701。I、發酵劑菌株培養液的制備①褐球固氮菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入硫酸銨15克、玉米漿20毫升、磷酸氫二鉀O. 8克，磷酸二氫鉀O. 2克，硫酸鎂O. 5克，硫酸鈣O. I克，酵母膏
O.5克，攪拌溶解，調節PH至7. O 7. 2，即得褐球固氮菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121 °C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種褐球固氮菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中褐球固氮菌活菌數> 109/ml時，即視為褐球固氮菌培養液制備結束。②巨大芽孢桿菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入玉米漿20毫升，碳酸鈣2. 5克，磷酸氫二鉀I克，硫酸鎂O. 5克，氯化鈉O. 3克，氯化鉀O. 3克，硫酸錳O. 05克，硫酸亞鐵O. 05克，攪拌溶解，調節PH至7.0，即得巨大芽孢桿菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121°C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種巨大芽孢桿菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中巨大芽孢桿菌活菌數> IO9/ml時，即視為巨大芽孢桿菌培養液制備結束。③膠凍樣芽孢桿菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入玉米漿20毫升，碳酸鈣2. 5克，磷酸氫二鉀I克，硫酸鎂O. 5克，氯化鈉O. 3克，氯化鉀O. 3克，硫酸錳
O.05克，硫酸亞鐵O. 05克，攪拌溶解，調節PH至7. 0，即得膠凍樣芽孢桿菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121°C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種膠凍樣芽孢桿菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中膠凍樣芽孢桿菌活菌數> IOVml時，即視為膠凍樣芽孢桿菌培養液制備結束。④潮濕纖維單孢菌培養液的制備
將葡萄糖母液稀釋到5BX，量取5BX的葡萄糖母液稀釋液980毫升，加入玉米漿20毫升，碳酸鈣2. 5克，磷酸氫二鉀I克，硫酸鎂O. 5克，氯化鈉O. 3克，氯化鉀O. 3克，硫酸錳
O.05克，硫酸亞鐵O. 05克，攪拌溶解，調節PH至7. 0，即得潮濕纖維單孢菌液體培養基。取IOOml液體培養基于500ml三角瓶中，121 °C滅菌20分鐘，冷卻至30°C，接種潮濕纖維單孢菌，在旋轉搖床150rpm、30°C的條件下培養32 40小時，檢測培養液中潮濕纖維單孢菌活菌數> 109/ml時，即視為潮濕纖維單孢菌培養液制備結束。2、生物肥發酵劑的制備
將褐球固氮菌培養液、巨大芽孢桿菌培養液、膠凍樣芽孢桿菌培養液、潮濕纖維單孢菌培養液分別采用冷凍離心機在4°C、轉速6000r/min條件下離心10分鐘，分別得褐球固氮菌菌泥、巨大芽孢桿菌菌泥、膠凍樣芽孢桿菌菌泥和潮濕纖維單孢菌菌泥。配制12%的脫脂乳溶液，加入1%的谷氨酸鈉、1%的海藻糖、2%的甘油在116°C條件下滅菌15分鐘，作為保護劑。按照保護劑與菌泥體積比為10:1的比例分別將保護劑和菌泥混合均勻，分別將上述混合液在_40°C的條件下預凍3小時，放入真空冷凍干燥機中凍干，即分別得褐球固氮菌凍干粉、巨大芽孢桿菌凍干粉、膠凍樣芽孢桿菌凍干粉和潮濕纖維單孢菌凍干粉。按照褐球固氮菌凍干粉、巨大芽孢桿菌凍干粉、膠凍樣芽孢桿菌凍干粉和潮濕纖維單孢菌凍干粉質量比為1:1:1:1的比例將上述物質混合，再按照每克混合凍干粉加入10000單位的比例加入飼用纖維素酶，混合均勻后真空包裝即得成品。
權利要求
1.一種利用葡萄糖母液制備生物肥發酵劑的方法，其特征是分別制備褐球固氮菌培養液、巨大芽孢桿菌培養液、膠凍樣芽孢桿菌培養液、潮濕纖維單孢菌培養液，各培養液活菌數> 107ml，然后分別對上述4株菌培養液進行凍干，制得凍干粉，按照褐球固氮菌凍干粉、巨大芽孢桿菌凍干粉、膠凍樣芽孢桿菌凍干粉和潮濕纖維單孢菌凍干粉質量比為1:1:1:1的比例將上述物質混合，再按照每克混合凍干粉加入10000單位的比例加入飼用纖維素酶，混合均勻后真空包 裝即得成品。
全文摘要
一種利用葡萄糖母液制備生物肥發酵劑的方法涉及一種發酵劑的制作方法，特別是一種利用葡萄糖母液制備生物肥發酵劑的方法。先以葡萄糖母液為主要原料配制培養基，分別培養褐球固氮菌、巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和潮濕纖維單孢菌，之后分別收集菌體制得凍干粉，按照褐球固氮菌凍干粉、巨大芽孢桿菌凍干粉、膠凍樣芽孢桿菌凍干粉和潮濕纖維單孢菌凍干粉質量比為1:1:1:1的比例將上述物質混合，再按照每克混合凍干粉加入10000單位的比例加入飼用纖維素酶，混合均勻后真空包裝即得成品。本發明的生物肥發酵劑可將各種作物秸稈、瓜藤、畜禽糞便、樹葉雜草、糠醋渣、酒渣、醋渣、醬油渣、植物餅粕、豆腐渣及城鄉生活廢棄物快速變成生物肥料。發酵一噸成品有機肥只需用0.2～0.3公斤生物肥發酵劑，5～10天即可將上述廢棄物變成生物有機肥料。
文檔編號C05G3/00GK102924167SQ20121043257
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月2日 優先權日2012年11月2日
發明者呂偉民, 劉復軍, 趙云財, 李娜, 佟曉芳, 栗偉, 李振林, 王佐民, 尚維, 趙彤, 張欣, 宋殿峰, 張勁松 申請人:黑龍江省麒麟工貿公司