專利名稱：一種大鼠亞低溫動物模型的制備方法
技術領域：
本發明涉及動物模型領域，具體地說，是一種快速有效大鼠亞低溫動物模型的制備方法。
背景技術：
亞低溫作為一種神經保護療法已有一個半多世紀的歷史。國際上將低溫劃分為輕度低溫(mild hypothermia) : 33 36°C ;中度低溫(moderate hypothermia) : 28 32°C ;深度低溫(deep hypothermia) : 20 27°C ;超深低溫(profound hypothermia) : 19°C以下；極深度低溫(ultra profound hypothermia) :〈5°C。前二者被稱為亞低溫。應用嚙齒類動物研究亞低溫療法的動物實驗很多，總結分析該類實驗中亞低溫實 施、維持、溫度檢測的方法如下
I)將動物置于4攝氏度低溫環境下。單獨利用4攝氏度低溫環境可以誘導大鼠亞低溫，但所需時間長，動物在緩慢降溫過程更易產生寒戰等副作用，影響降溫效果的同時削弱了亞低溫的神經保護作用。2)動物冷水浸浴。動物冷水(29攝氏度)浸浴，實施方便，但不利于持續溫度檢測及保持手術大鼠干燥。3 )冰袋直接接觸降溫、噴灑酒精、風扇輔助降溫。冰袋直接接觸降溫雖然可以較快降低動物體溫，但容易造成動物皮膚凍傷，且溫度不易控制。噴灑酒精、風扇輔助降溫溫度也較難控制。4)輸注冷的自體動脈血。輸注冷的自體動脈血需要特殊設備、有創操作，并發癥多、價格昂貴，不利于動物實驗開展。5)麻醉藥物協助降溫。麻醉藥物本身是否對腦梗死大鼠有保護作用上存在爭議，因此麻醉藥物協助降溫對動物實驗結果產生干擾，且影響神經行為學評估的進行。

發明內容
本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種大鼠亞低溫動物模型的制備方法。本發明的再一的目的是，提供一種大鼠亞低溫動物模型。本發明的另一的目的是，提供一種大鼠亞低溫動物模型的應用。為實現上述目的，本發明采取的技術方案是一種大鼠亞低溫動物模型的制備方法，包括以下步驟將大鼠放入通風鼠籠，置于4°C低溫環境中，冰袋置于鼠籠外輔助降溫，目標溫度33±0. 5°C，持續監測大鼠肛溫的變化；當肛溫低于最低限32. 5°C時將冰袋移走或將大鼠連同鼠籠放回室溫，當肛溫高于最高限33.5°C時再將鼠籠移到4°C低溫環境中，冰袋輔助降溫。所述的制備方法中持續監測血糖，大鼠禁食禁水，灌胃液灌胃維持血糖。所述的大鼠術前24小時禁食,不禁水,術前12小時給予灌胃3mlX I次；術后6h、12h、18h、24h、30h 分別灌胃 3ml-4ml X I 次。所述的灌胃液分為A液和B液，所述的A液每1000ml含有葡萄糖222g和IOml 10%濃NaCl，所述的B液為A液用ddH20以I :2的比例稀釋。如果大鼠在未來6h內是常溫狀態下則用2mlA +ImlB ;如果大鼠在未來6h內是在低溫狀態下則用ImlA +2mlB，并根據血糖情況濃度加減。為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是一種大鼠亞低溫動物模型，所述的動物模型采用以上所述的方法制備得到。為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是所述的動物模型在亞低溫動物實驗中的應用。本發明優點在于
1、迅速達到目標溫度(33±0.5 °C);
2、體溫波動?。?br> 3、大鼠皮膚凍傷減少；
4、血糖控制在正常范圍內。


圖I.四組大鼠體溫檢測結果。
具體實施例方式下面結合附圖對本發明提供的具體實施方式
作詳細說明。實施例I
一、實驗方法
35只試驗大鼠分為亞低溫組與常溫組，前者根據亞低溫給與時間點不同分為2h亞低溫組、6h亞低溫組。所有大鼠在給予低溫或者常溫干預前均行手術(動物試驗需要)。I、亞低溫實施
將待實施亞低溫的大鼠置于4°C的通風環境中，冰袋輔助降溫。自制通風鼠籠可以避免大鼠皮膚與冰袋的直接接觸，避免凍傷。在規定時間點2h或6h將亞低溫組大鼠放入鼠籠，置于4°C低溫環境中，冰袋置于鼠籠外輔助降溫，目標溫度33±0.5°C，持續觀測大鼠肛溫的變化。當肛溫低于設定的最低限32. 5°C時可將冰袋移走或將大鼠連同鼠籠放回室溫(25-26°C),當肛溫高于設定的最高限33. 5°C時再將鼠籠移到4°C低溫環境中，冰袋輔助降溫。所有大鼠均在30min內達到目標溫度。2、體溫監測
采用恒方牌電子溫度計(ST-2)監測大鼠直腸溫度，在電子溫度計的探頭上涂抹石蠟油，然后將探頭插入大鼠肛內，深度約5cm。持續監測大鼠體溫約36小時。3、大鼠能量補充
低溫環境下大鼠攝食活動減少，為保證大鼠能量供應以及盡量減少除試驗處理因素以外各組內組間個體差異，大鼠禁食、禁水。根據大鼠日需水量，需能量，需電解質量以及低溫環境下大鼠新陳代謝減低的特殊情況，結合正式實驗前的實踐和課題組前期經驗，配置大鼠專用灌胃液。所有能量、水，和電解質的需求經自制灌胃液補充。補液配制方法和補液時間補液量如下所示
補液配置方法
A 液222g 葡萄糖 + IOml 10% 濃 NaCl+800mlddH20 定容至 1000ml，高壓消毒。B液A液用ddH20以I :2的 比例稀釋。補液的時間和用量
試驗大鼠術前術前24小時禁食；不禁水；術前12小時給予灌胃3mlX I次試驗大鼠術后:術后6h ；12h ；18h ；24h ；30h分別灌胃3ml-4ml X I次如果大鼠在未來6h內是常溫狀態下則用2mlA +ImlB ;如果大鼠在未來6h內是在低溫狀態下則用ImlA +2mlB。并根據血糖情況濃度，靈活加減。4、血糖監測方法
大鼠在術前測量尾靜脈血糖一次。術后6h以及灌胃前各測一次，以后每12h測量一次，每次測量血糖均在灌胃之前，共測量4次。在自發性高血壓大鼠接近尾尖處常規酒精消毒，針刺尾靜脈后出血，應用隨手測型(OneTouch Horizon )血糖儀測量血糖，按照操作說明書進行操作。二、實驗結果
1、大鼠體溫
35只大鼠分為四組2h亞低溫組，6h亞低溫組，常溫I組；常溫2組。測量體溫結果如
下
1)亞低溫組大鼠(2h亞低溫組、6h亞低溫組)均在規定的時間點(術后2h、術后6h)給予亞低溫，在30min內肛溫降低至目標值(33±0. 5°C )，并能維持至術后36小時。常溫組大鼠體溫維持在37°C左右。溫度檢測如圖I示
2)整個試驗過程中可見，大鼠體溫波動小，亞低溫控制良好，維持時間足夠長(術后36小時)
2、大鼠血糖
為了保持低溫組與常溫組大鼠可比性，術后灌胃維持血糖。表I是血糖監測結果。四組大鼠各個時間點血糖差別沒有統計學意義。表I各組大鼠血糖測量統計后的結果
權利要求
1.一種大鼠亞低溫動物模型的制備方法，其特征在于，包括以下步驟將大鼠放入通風鼠籠，置于4°c低溫環境中，冰袋置于鼠籠外輔助降溫，目標溫度33±0. 5°C，持續監測大鼠肛溫的變化；當肛溫低于最低限32. 5°C時將冰袋移走或將大鼠連同鼠籠放回室溫，當肛溫高于最高限33. 5°C時再將鼠籠移到4°C低溫環境中，冰袋輔助降溫。
2.根據權利要求I所述的制備方法，其特征在于，所述的制備方法中持續監測血糖，大鼠禁食禁水，灌胃液灌胃維持血糖。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的大鼠術前24小時禁食，不禁水，術前12小時給予灌胃3mlXl次;術后6h、12h、18h、24h、30h分別灌胃3ml_4mlXl次。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的灌胃液分為A液和B液，所述的A液每IOOOml含有葡萄糖222g和IOml 10%濃NaCl，所述的B液為A液用ddH20以I :2的比例稀釋。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，如果大鼠在未來6h內是常溫狀態下則用2mlA +ImlB ;如果大鼠在未來6h內是在低溫狀態下則用ImlA +2mlB，并根據血糖情況濃度加減。
6.一種大鼠亞低溫動物模型，其特征在于，所述的動物模型米用權利要求1-5任一所述的方法制備得到。
7.根據權利要求6所述的動物模型在亞低溫動物實驗中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種大鼠亞低溫動物模型的制備方法，包括以下步驟將大鼠放入通風鼠籠，置于4℃低溫環境中，冰袋置于鼠籠外輔助降溫，目標溫度33±0.5℃，持續監測大鼠肛溫的變化；當肛溫低于最低限32.5℃時將冰袋移走或將大鼠連同鼠籠放回室溫，當肛溫高于最高限33.5℃時再將鼠籠移到4℃低溫環境中，冰袋輔助降溫。本發明還提供一種大鼠亞低溫動物模型及其應用。本發明優點在于迅速達到目標溫度；體溫波動??；大鼠皮膚凍傷減少；血糖控制在正常范圍內。
文檔編號A01K67/02GK102919199SQ20121047289
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月21日 優先權日2012年11月21日
發明者范薇 申請人:復旦大學附屬中山醫院