專利名稱：體表瘺管大鼠動物模型的構建方法
技術領域：
本發明涉及一種動物模型的構建方法，尤其是涉及一種體表瘺管大鼠動物 模型的構建方法。
技術背景瘺管是指連接體表間或體表與臟腔、臟器與臟器之間的一種病理性管道，其 內壁為感染肉芽組織，并有上皮襯里。由外口、內口和兩者間互通管道所組成， 屬于外科較為常見的疾病，可發于人體各處。由于瘺管本身的復雜性，臨床患者的個體差異及臨床研究的醫學倫理問題， 使得瘺管的臨床研究可檢性一直較差。研究痿管的形成機制和探索有效的治療方法需要建立一個合適的實驗動物 模型。目前國內外有成熟的豚鼠上半規管瘺管模型，鵝胰-十二指腸瘺管模型等 動物模型，但是尚無與體表相通的瘺管動物模型供臨床研究。因此，建立一個 與體表相通的瘺管動物模型，對于體表瘺管的研究將有獨特的價值。發明內容針對現有技術的上述不足，本發明所要解決的技術問題是提供一種體表瘺 管大鼠動物模型的構建方法，建立一種穩定的、與體表相通的瘺管大鼠動物模 型供臨床研究使用。為解決上述技術問題，本發明提出的體表瘺管大鼠動物模型的構建方法， 包括如下步驟(1) 在大鼠頸背部皮下肌層內埋置自制彈簧紗條；(2) 在彈簧紗條內種植入濃度為3X 107 -3X 109Cfu/ml金黃色葡萄球菌標 準菌株和濃度為3X 107 -3X 109cfu/ml大腸桿菌標準菌株；(3)造模后30-60天將彈簧紗條撤除。 作為優選技術方案，本發明上述自制彈簧紗條最好是在消毒彈簧內引入與 該彈簧等長的醫用紗條制成的作為優選技術方案，本發明上述金黃色葡萄球菌和大腸桿菌標準菌株的優選濃 度為3X 108-12X108cfu/ml，更優選的濃度為9X 108cfu/ml;所述的彈簧紗條撤 除時間優選為造模后40-50天，最優選為45天。相對于現有技術，本發明將自制彈簧紗條埋置于大鼠頸背部皮下肌層，種 植入金黃色葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液，得到體表感染性瘺管大鼠動物模型。通過本發明方法構建的體表感染性瘺管大鼠動物模型在外觀和組織結構上 非常類似人類體表瘺管，在彈簧紗條埋置并種植金黃色葡萄球菌和大腸桿菌標 準菌株后表現為體溫上升，兩端創面出現黃白色分泌物。在撤除彈簧紗條后， 兩潰口間可以觸及有一硬索相通，局部X線造影檢査和超聲檢査發現，有一管 道形成，病理檢查發現，模型的組織中有管腔和管壁組織形成，管腔周圍毛細 血管較少，伴大量肉芽組織增生，炎癥反應輕，可見纖維母細胞，內層厚度不 均勻。通過本發明方法構建的體表感染性瘺管大鼠動物模型穩定性好，供臨床研 究使用，對研究體表痿管的形成機制和探索有效的治療方法具有獨特的價值。


圖1為本發明體表瘺管大鼠動物模型的構建方法中撤除的彈簧紗條情況示 意圖(彈簧紗條上有大量黃白色膿性分泌物，質稠厚)。圖2為本發明體表瘺管大鼠動物模型的構建方法中大鼠皮下肌層局部X線 造影檢查情況示意圖(箭頭所示為瘺管管道)。圖3為本發明體表瘺管大鼠動物模型的構建方法中大鼠皮下肌層局部超聲 檢查情況示意圖(箭頭所示為瘺管管道)。圖4為本發明體表痿管大鼠動物模型的構建方法中大鼠皮下肌層局部組織 學檢査情況示意圖(箭頭所示為痿管管腔，周圍為管壁組織)。
具體實施方式
下面結合附圖和實施例對本發明作進一 步詳細描述。 實施例1實驗動物將350克左右SD (Sprague—Dawly)大鼠30只隨機分為三組 金黃色葡萄球菌組，大腸桿菌組，混合菌組，在每只大鼠頸背部肌層內作兩個 相距3cm切口，其間埋置3cm長的消毒醫用紗條，兩端與皮膚縫合固定。1、 金黃色葡萄球菌組用注射器將3X107 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌 0. 2ml種植入大鼠紗條內。2、 大腸桿菌組用注射器將3X107 cfu/ml濃度的大腸桿菌0.2ml種植入 大鼠紗條內。3、 混合菌組用注射器將3X107 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌和大腸桿 菌混合菌0. 2ml種植入大鼠紗條內。各組于接種后每日觀察大鼠體溫變化、局部創面表現及30天后瘺管形成情 況。三組大鼠體溫均無明顯上升，金黃色葡萄球菌組和大腸桿菌組大鼠兩端創 面無分泌物。混合菌組大鼠兩端創面出現少量分泌物，呈黃白色。30天后將埋置的紗條撤除，局部檢査三組大鼠均無明顯管道形成。組織病 理學檢測，結果發現三組大鼠均有有大量急性炎癥細胞浸潤，纖維組織在肉芽 組織的外圍，兩層間無明顯分界線，管腔不明顯。實施例2實驗動物將350克左右SD (Sprague—Dawly)大鼠30只隨機分為三組金黃色葡萄球菌組，大腸桿菌組，混合菌組，在每只大鼠頸背部肌層內作兩個相距3cm切口，其間埋置3cm長的自制彈簧紗條，兩端與皮膚縫合固定。1、 金黃色葡萄球菌組用注射器將3X109 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌 0. 2ml種植入大鼠彈簧紗條內。2、 大腸桿菌組用注射器將3X109 cfu/ml濃度的大腸桿菌0.2ml種植入 大鼠彈簧紗條內。3、 混合菌組用注射器將3X109 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌和大腸桿 菌混合菌0. 2ml種植入大鼠彈簧紗條內。各組于接種后每日觀察大鼠體溫變化；局部創面表現，及30天后瘺管形成 情況。金黃色葡萄球菌組大鼠體溫上升，兩端創面有少量黃色膿性分泌物，大 腸桿菌組大鼠體溫上升，兩端創面有少量白色泌物。混合菌組大鼠體溫明顯上 升，兩端創面出現大量黃白色分泌物。30天后將埋置的紗條撤除，局部檢查三組大鼠均無明顯管道形成。做組織 病理學檢測，結果發現三組大鼠均有有大量急性炎癥細胞浸潤，周圍有大量微 血管增生，纖維組織在肉芽組織的外圍，兩層間可見間斷分界線，管腔不明顯。實施例3實驗動物將350克左右SD (Sprague—Dawly)大鼠30只隨機分為三組 金黃色葡萄球菌組，大腸桿菌組，混合菌組，在每只大鼠頸背部肌層內作兩個 相距3cm切口，其間埋置3cm長的自制彈簧紗條，兩端與皮膚縫合固定。1、 金黃色葡萄球菌組用注射器將9X108 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌 0. 2ml種植入大鼠彈簧紗條內。2、 大腸桿菌組用注射器將9X108 cfu/ml濃度的大腸桿菌0. 2ml種植入 大鼠彈簧紗條內。3、 混合菌組用注射器將9X108 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌混合菌0. 2ml種植入大鼠彈簧紗條內。
各組于接種后每日觀察大鼠體溫變化；局部創面表現，及60天后瘺管形成 情況。金黃色葡萄球菌組大鼠體溫上升，兩端創面有少量黃色膿性分泌物，大 腸桿菌組大鼠體溫上升，兩端創面有少量白色泌物。混合菌組大鼠體溫明顯上 升，兩端創面出現大量黃白色分泌物。
60天后將埋置的紗條撤除，局部檢査三組大鼠皮下肌層均可觸及硬索形成。 做組織病理學檢測，結果發現三組大鼠均有有管腔和管壁組織形成，管腔周圍 毛細血管較少，伴大量肉芽組織增生，炎癥反應輕，均可見纖維母細胞，內層 厚度不均勻。
實施例4
實驗動物將350克左右SD (Sprague—Dawly)大鼠30只隨機分為三組 金黃色葡萄球菌組，大腸桿菌組，混合菌組，在每只大鼠頸背部肌層內作兩個 相距3cm切口，其間埋置3cm長的自制彈簧紗條，兩端與皮膚縫合固定。
1、 金黃色葡萄球菌組用注射器將9X108 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌 0. 2ml種植入大鼠彈簧紗條內。
2、 大腸桿菌組用注射器將9X108 cfu/ml濃度的大腸桿菌0. 2ml種植入 大鼠彈簧紗條內。
3、 混合菌組用注射器將9X108 cfu/ml濃度的金黃色葡萄球菌和大腸桿 菌混合菌0. 2ml種植入大鼠彈簧紗條內。
各組于接種后每日觀察大鼠體溫變化；局部創面表現，及45天后瘺管形成 情況。金黃色葡萄球菌組大鼠體溫上升，兩端創面有少量黃色膿性分泌物，大 腸桿菌組大鼠體溫上升，兩端創面有少量白色泌物。混合菌組大鼠體溫明顯上 升，兩端創面出現大量黃白色分泌物，質地稠，撤除的彈簧紗條情況如圖1所 示。45天后將埋置的紗條撤除，局部檢査三組大鼠皮下肌層均可觸及硬索形成。形局部X線造影檢査和局部超聲檢査可見有管道相通，如圖2、圖3所示。做組織病理學檢測，結果發現三組大鼠均有有管腔和管壁組織形成，管腔周圍毛細 血管較少，伴大量肉芽組織增生，炎癥反應輕，可見纖維母細胞，內層厚度不均勻，如圖4所示。
權利要求
1、一種體表瘺管大鼠動物模型的構建方法，其特征是，包括如下步驟(1)在大鼠頸背部皮下肌層內埋置自制彈簧紗條；(2)在彈簧紗條內種植入濃度為3×107-3×109cfu/ml金黃色葡萄球菌標準菌株和濃度為3×107-3×109cfu/ml大腸桿菌標準菌株；(3)造模后30-60天將彈簧紗條撤除。
2、 根據權利要求1所述的體表瘺管大鼠動物模型的構建方法，其特征在于， 自制彈簧紗條是在消毒彈簧內引入與該彈簧等長的醫用紗條制成的。
3、 根據權利要求1所述的體表瘺管大鼠動物模型的構建方法，其特征在于， 金黃色葡萄球菌標準菌株和大腸桿菌標準菌株的濃度為3X 108-12X 108cfu/ml。
4、 根據權利要求3所述的體表瘺管大鼠動物模型的構建方法，其特征在于， 金黃色葡萄球菌標注菌株和大腸桿菌標準菌株的濃度為9X 108cfu/ml。
5、 根據權利要求1或2或3所述的體表瘺管大鼠動物模型的構建方法，其 特征在于，造模后40-50天將彈簧紗條撤除。
6、 根據權利要求5所述的體表瘺管大鼠動物模型的構建方法，其特征在于， 造模后45天將彈簧紗條撤除。
全文摘要
本發明公開了一種體表瘺管大鼠動物模型的構建方法，該模型的構建包括如下步驟(1)在大鼠頸背部皮下肌層內埋置自制彈簧紗條；(2)在彈簧紗條內種植入濃度為3×10⁷-3×10⁹cfu/ml金黃色葡萄球菌標準菌株和濃度為3×10⁷-3×10⁹cfu/ml大腸桿菌標準菌株；(3)造模后30-60天將彈簧紗條撤除。通過本發明方法構建的體表感染性瘺管大鼠動物模型穩定性好，供臨床研究使用，對研究體表瘺管的形成機制和探索有效的治療方法具有獨特的價值。
文檔編號A61K49/00GK101332122SQ20071004264
公開日2008年12月31日 申請日期2007年6月26日 優先權日2007年6月26日
發明者曹永清, 琛 王, 陸金根 申請人:上海中醫藥大學附屬龍華醫院