專利名稱：一種黃鱔精子稀釋液及制備方法
技術領域：
本發明涉及黃鱔的精子技術領域，更具體涉及一種黃鱔精子稀釋液，同時還涉及一種黃鱔精子稀釋液的制備方法，適合所有黃鱔品種。
背景技術：
黃鱔(Monopterus albus)為亞熱帶魚類,又名鱔魚、羅魚、田鱔、長魚、黃參、無鱗公子、田參等，隸屬于合鰓目、合鰓科；合鰓目中全世界只有I個種，即黃鱔。廣泛分布于東南亞的日本、泰國、印度尼西亞、菲律賓、馬來西亞、印度、日本、朝鮮和我國等，我國除青藏高原以外均有分布，尤以長江中下游地區，分布密度大，產量高，是一種重要的經濟魚類。
為了能進一步開展黃鱔的新品種選育，以及黃鱔的人工繁殖，為市場提供更優質的黃鱔新品種和苗種，需要進行黃鱔精子超低溫保存和人工繁殖。然而，無論是精子的超低溫保存，還是進行人工繁殖，都需要一種稀釋液對黃鱔精子進行稀釋。這是因為黃鱔精液中所含精子的密度很高，一般可以達到1. Γ1. 8X IO9個/ml。當對黃鱔精子進行超低溫保存時，含高密度精子的精原液是不能直接進行超低溫冷凍保存的。因為在冷凍過程中，當溫度降到0°C 一 20°C區間時，被保存的精液中會形成冰晶，冰晶像鋒利的刀一樣刺向四周的精子，將精子刺破。精液中的精子密度越高，精子被刺破的概率也越高。這種在冷凍過程中冰晶對精子的物理損傷將直接導致精子超低溫冷凍保存的失敗。因此，冷凍前必須要對精子進行稀釋，這就需要有一種適合黃鱔精子的精子稀釋液。而在進行人工繁殖時，由于黃鱔精液中含精子的密度很高，且精液量很少，如果直接用來進行人工授精，不僅對非常寶貴的精液是一種浪費，而且，因為精子密度過高，精液的黏稠度增加，使精子不易與卵子混合均勻， 從而導致授精效果也不好。如果對精液進行稀釋后，再用來進行 人工授精，可大大降低人工授精的成本，同時還能起到很好的授精效果，獲得較高的受精率。因此，黃鱔精子稀釋液的作用就是在不激活精子的前提下，對精子進行稀釋，使精子盡可能的保持其原有的生物學特性。
然而，精子稀釋液是有一定要求的。每種魚類的精子都有自己一定的滲透壓，不同種魚類的滲透壓是不同的。魚類的精子在未遇見水或其它溶液前始終處在休眠狀態，淡水魚類只有在遇見低于自己滲透壓的溶液或淡水時才能被激活，而海水魚類則要遇見高于自己滲透壓的溶液或海水時才能被激活。精子一旦被激活，很快會衰減死亡。精子的壽命一般很短，短的只有幾十秒，長的也就幾十分鐘。要想對精子進行稀釋，首先要保證精子在稀釋液中不會被激活。這就要求每種魚的精子稀釋液必須與這種魚的精液滲透壓盡可能的相等。稀釋液的滲透壓是由稀釋液中的離子濃度總和決定的，不同濃度的稀釋液就有不同的滲透壓，調節稀釋液中的離子濃度就能調節這種稀釋液的滲透壓，從而達到與精液等滲的效果。除此之外，稀釋液中不同的離子成分對精子又有不同的作用。如稀釋液中的Na離子主要是起調節稀釋液滲透壓的作用；K離子起著改變精子膜表面通透性的作用；Ca、Mg離子則起著增加或降低精子運動速度的作用；而CO3離子則起著調節稀釋液pH的作用等。除此之外，有報道顯示葡萄糖等大分子類溶質除了起到調節滲透壓的作用外，還具有提供精子能量的作用。因此，不同的魚不僅稀釋液濃度完全不同，而且，根據精子的生物學特性，其離子成分也會有很大差異。發明內容
本發明的目的是在于提供了一種黃鱔精子稀釋液，配方合理，使用方便，適合對黃鱔精子的稀釋，是黃鱔精子超低溫保存和進行人工授精所必須的一種溶液。在黃鱔精子超低溫保存過程中，可確保精子不會被激活，并最大限度降低冰晶對精子的損傷。在進行黃鱔人工授精過程中，可有效稀釋精子，降低人工授精成本，提聞受:精率。
本發明的另一個目的是在于提供了一種黃鱔精子稀釋液的制備方法，方法易行， 操作簡便，適合配制各種體積的稀釋液，可確保所配制稀釋液中個組分濃度的準確性。
為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施
一種黃鱔精子稀釋液，它由以下重量份的原料制成

一種黃鱔精子稀釋液，它由以下重量份的原料制成(較好范圍)
權利要求
1.一種黃鱔精子稀釋液，它由以下重量份的原料制成氯化鈉氯化鉀碳酸氫鈉氯化鈣重量份 155. O- 175. Ommol/L磷酸氫二鈉稀釋液滲透壓為326. 6 390. 2m0sM, pH為7. 5-8. 5 ；一種黃鱔精子稀釋液的制備方法，其步驟是A、精子稀釋液母液的配制(1)每毫升含氯化鈉Immol的母液根據母液的濃度、體積和氯化鈉分子量計算出配制母液需要的氯化鈉重量，稱取氯化鈉，將氯化鈉放入燒杯中，加入配制母液體積二分之一的蒸餾水，使氯化鈉充分溶解，將溶解后的氯化鈉溶液倒入配制母液同樣體積的容量瓶中， 用5 10ml蒸餾水洗滌3次燒杯，將洗滌后的蒸餾水也倒入容量瓶，最后用蒸餾水定容至容量瓶刻度處；(2)每毫升含氯化鉀Immol的母液根據母液的濃度、體積和氯化鉀分子量計算出配制母液需要的氯化鉀重量，稱取氯化鉀，將氯化鉀放入燒杯中，加入母液體積二分之一的蒸餾水，使氯化鉀充分溶解，將溶解后的氯化鉀溶液倒入配制母液同樣體積的容量瓶中，用 5^10ml蒸餾水洗滌3次燒杯，將洗滌后的蒸餾水也倒入容量瓶，最后用蒸餾水定容至容量瓶刻度處；(3)每毫升含碳酸氫鈉Immol的母液根據母液的濃度、體積和碳酸氫鈉分子量計算出配制母液的碳酸氫鈉重量，稱取碳酸氫鈉，將碳酸氫鈉放入燒杯中，加入配制母液體積二分之一的蒸餾水，使碳酸氫鈉充分溶解，將溶解后的碳酸氫鈉溶液倒入配制母液同樣體積的容量瓶中，用^lOml蒸餾水洗滌3次燒杯，將洗滌后的蒸餾水也倒入容量瓶，最后用蒸餾水定容至容量瓶刻度處；(4)每毫升含氯化鈣O.5mmol的母液根據母液的濃度、體積和氯化鈣分子量計算出配制母液需要的氯化鈣重量，稱取的氯化鈣，將氯化鈣放入燒杯中，加入配制母液體積二分之一的蒸餾水，使氯化鈣充分溶解，將溶解后的氯化鈣溶液倒入配制母液同樣體積的容量瓶中，用^lOml蒸餾水洗滌3次燒杯，將洗滌后的蒸餾水也倒入容量瓶，最后用蒸餾水定容至容量瓶刻度處；(5)每毫升含磷酸氫二鈉O.5mmol的母液根據母液的濃度、體積和磷酸氫二鈉分子量計算出配制母液的磷酸氫二鈉重量，稱取磷酸氫二鈉，將磷酸氫二鈉放入燒杯中，加入配制母液體積二分之一的蒸餾水，使磷酸氫二鈉充分溶解，將溶解后的磷酸氫二鈉溶液倒入配制母液同樣體積的容量瓶中，用5 10ml蒸餾水洗滌3次燒杯，將洗滌后的蒸餾水也倒入容量瓶，最后用蒸餾水定容至容量瓶刻度處；(6)上述母液均放置4°C冰箱保存；精子稀釋液的配制(I)用微量取樣器從各組分母液中量取配制稀釋液，量取各組分的體積根據稀釋液配方中各組分的濃度、各組分母液的濃度、以及配制的稀釋液體積，按如下公式計算量取體積=配方濃度X稀釋液體積+母液濃度；(2)將氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鈣、磷酸氫二鈉各組分混合均勻，配制的稀釋液體積100ml，在體積的容量瓶中混勻，然后用蒸餾水定容至容量瓶刻度；(3)配制好的稀釋液放置4°C冰箱保存，備用。
2.根據權利要求1所述的一種黃鱔精子稀釋液，其特征在于原料重量份氯化鈉157. 5-172. 5mmol/L氯化鉀5. 75-7. 25mmol/L碳酸氧納4. 25-5. 7Smmol/I,氯化I丐1. 1-1. Qmmol /I,憐酸氫!二納O. 45- O. 7Smmol /I,稀釋液滲透壓為343. 7 383.1mOsM, pH為7. 6-8. 4。
3.根據權利要求1所述的一種黃鱔精子稀釋液，其特征在于原料重量份氯化鈉160. 0-170. Ommol/L氯化鉀6. 0-7. Ommol/L碳酸氫鈉4. 5-5. 5mmol/L氯化I丐1. 2-1. 8mmol/L憐酸氫!二納O. 5-0. 7mmol/L稀釋液滲透壓為349. 9 376. 9m0sM, pH為7. 7-8. 3。
4.根據權利要求1所述的一種黃鱔精子稀釋液，其特征在于原料重量份氯化鈉162. 5-167. 5mmol/L氯化鉀6. 25-7. Ommol/L碳酸氧納4. 75-5. 25 mmol /I,氯化I丐1. 3-1. 7mmol/L憐酸氫!二納O. 55-0. 6Smmol /I,稀釋液滲透壓為356. 6 370. 8m0sM, pH為7. 8-8. 2。
5.根據權利要求1所述的一種黃鱔精子稀釋液，其特征在于原料重量份氯化鈉165. Ommol/L氯化鉀6. 5mmol/L碳酸氫鈉5. O mmol/L氯化|丐1. 5mmol/L磷酸氫二鈉O. 6 mmol/L本配方的稀釋液滲透壓為363. 4m0sM, pH為8. O。
全文摘要
一種黃鱔精子稀釋液及制備方法，它由氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鈣、磷酸氫二鈉比例制成,步驟:A、精子稀釋液母液的配制每毫升含氯化鈉1mmol、含氯化鉀1mmol、含碳酸氫鈉1mmol、含氯化鈣0.5mmol、含磷酸氫二鈉0.5mmol的母液，根據母液的濃度、體積和磷酸氫二鈉分子量計算出配制母液的磷酸氫二鈉重量，稱取磷酸氫二鈉，將磷酸氫二鈉放入燒杯中，母液放置冰箱保存；B、精子稀釋液的配制從各組分母液中量取配制稀釋液，根據稀釋液配方中各組分的濃度、稀釋液體積，計算，將各組分混合均勻，配制的稀釋液在瓶中混勻，用蒸餾水定容，配制的稀釋液放置冰箱保存，備用。配方合理，使用方便，適合對黃鱔精子的稀釋，有效稀釋精子，降低人工授精成本，提高受精率。
文檔編號A01N1/02GK102986650SQ201210553578
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月19日 優先權日2012年12月19日
發明者柳凌, 朱祥云, 張潔明, 郭峰, 張濤 申請人:中國水產科學研究院長江水產研究所