專利名稱：一種云芝葡聚糖水劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及殺菌劑類，尤其是涉及一種云芝葡聚糖水劑及其制備方法，特別是涉及防治馬鈴薯Y病毒的云芝葡聚糖水劑。
背景技術：
馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y)是感染馬鈴薯的病毒中最為廣泛傳播并造成嚴重經濟損失的病毒之一，馬鈴薯植株被Y病毒侵染后，表現重型花葉、葉脈壞死和垂葉條斑壞死癥狀。特別是條斑壞死，在植株的葉脈、葉柄和莖上都會出現，復葉患病后很容易脫落，到后期植株上只留下接近頂部的一些葉子，嚴重影響馬鈴薯的產量和質量。同時，馬鈴薯Y病毒還可以侵染茄科、莧科、豆科和菊科作物，是危害糧食作物、經濟作物、牧草、藥材、果樹的重要病原，在全世界范圍內造成嚴重經濟損失。馬鈴薯Y病毒主要是靠接觸和蚜蟲傳播，尤其是蚜蟲傳播。目前，還沒有一種專門防治馬鈴薯Y病毒的藥劑，對于防治馬鈴薯Y病毒的措施主要包括以下幾個方面:第一，利用植物莖尖培養，短時高溫處理等細胞工程方法培育無病毒植株；第二，利用基因工程和傳統的雜交等育種方法培育抗病毒植株；第三，通過殺滅蚜蟲等傳播介體來減輕馬鈴薯Y病毒危害等。然而，培育無病毒植株和抗性品種技術要求高、效率低，由于馬鈴薯Y病毒容易產生抗性，所以只能在短時間內發揮作用。通過消滅蚜蟲來防治馬鈴薯病毒病，破壞了農田的生態環境，還容易產生化學農藥殘留，污染土壤。由此可見，目前的田間管理方法都是很被動地減少馬鈴薯Y病毒的危害，不能從本質上防治馬鈴薯Y病毒。

發明內容
本發明為解決上述技術背景中的不足，提供了一種有效防治馬鈴薯Y病毒的云芝葡聚糖水劑及其制備方法，該水劑形式`的云芝葡聚糖殺菌劑不但可以有效地防治馬鈴薯Y病毒引起的病害，而且具有環境相容性好、不易產生抗藥性、物理化學穩定性好、藥效時間長等優點，是一種集預防和保護為一體的新型殺菌劑。為實現上述目的，本發明采用的技術方案包括云芝的發酵、云芝葡聚糖的提取和云芝葡聚糖水劑的加工。本發明采用特定的云芝菌株，其命名為Coriolus versicolor,其保藏登記號為CGMCC N0.6760，保藏機構為:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保持時間為2012年11月07日。該菌株的實驗室編號為云芝菌株HT-6。該菌株已另案申請專利。本發明提供一種云芝葡聚糖水劑，其特征在于:各組分用量按重量計為:云芝葡聚糖粗品1.0-2.0 %、表面活性劑烷基糖苷5.0-8.0%、防止分解劑I，2-丁二醇3.0-5.0%,防凍劑甘油4.0-10.0%，用雙蒸水補足至100%。優選地，云芝葡聚糖粗品1.1%、表面活性劑烷基糖苷5.0-8.0%、防止分解劑1，2- 丁二醇4%、防凍劑甘油4%，用雙蒸水補足至100%。更優選地:云芝葡聚糖粗品1.1 %、表面活性劑烷基糖苷6.0%、防止分解劑1，2- 丁二醇4%、防凍劑甘油4%，用雙蒸水補足至100%。所述的云芝葡聚糖粗品是如下制得的:步驟一:云芝的發酵:(I)搖瓶種子活化:均勻挑取保藏登記號為CGMCC N0.6760的云芝菌株的菌絲塊轉接于裝有80ml種子培養基的250ml三角瓶中，于28°C，120r/min恒溫振蕩培養4d ;所述種子培養基配方為:葡萄糖20g/L，玉米粉10g/L，麩皮5g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余為水；(2)搖瓶種子培養:按50ml/L的接種量將搖瓶種子液接入裝有200ml種子培養基的500ml三角瓶中，于28°C，150r/min恒溫振蕩培養4d ;所述的種子培養基配方為:葡萄糖20g/L，玉米粉 10g/L，麩皮 5g/L，蛋白胨 3g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO40.2g/L，其余為水；(3)600L大發酵罐培養:將經搖瓶發酵的種子液接入600L發酵罐發酵培養；發酵罐裝料系數為0.7，接種量5%，轉速150r/min，通風量0.8v/v/m,發酵溫度26 28°C，罐壓
0.5kg/cm2 ;所述發酵培養基配方為:葡萄糖30g/L,玉米粉15g/L,豆餅粉20g/L,蛋白胨Ig/L，麩皮 7.5g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余為水；步驟二:云芝葡聚糖的提取將經步驟一發酵后獲得的發酵液過濾后得到的菌絲體用清水洗滌，洗滌后再過濾，向洗滌后的菌絲體中加人2%的Na2CO3溶液，菌絲體與Na2CO3溶液重量比為1: 20，抽提溫度45°C，pH為8.5，超聲破碎20min，過濾抽提液，將濾液5000r/min離心lOmin，減壓濃縮至原體積的1/10， 向濃縮液中加入活性碳脫色，過濾，向濾液中加入等體積乙醇，沉淀30min后過濾，先后分別用無水乙醇、丙酮、乙醚沖洗沉淀物后真空干燥，得到云芝葡聚糖粗品O本發明的云芝葡聚糖水劑的配制工藝為:向雙蒸水中加入云芝葡聚糖粗品以及表面活性劑烷基糖苷，控制反應溫度不高于60°C，攪拌至原藥完全溶解后加入防止分解劑1，2- 丁二醇和防凍劑甘油，再加入適量的雙蒸水補足至100 %，再次攪拌混合均勻。進一步地，本發明提供上述云芝葡聚糖水劑在防治馬鈴薯Y病毒方面的應用。本發明的云芝葡聚糖水劑500倍液對馬鈴薯Y病毒的平均防效大于78 %，特別是1.1 %的云芝葡聚糖水劑防治馬鈴薯Y病毒的平均防效高達80.4%，優于20%克Y特靈可濕性粉劑300倍液。除非另有說明，本發明的“ ％”為重量百分比。與現有技術相比，本發明具有的優點和效果如下:I)本發明云芝葡聚糖來源于云芝,其有效成分云芝葡聚糖同時也是云芝的藥用成分，對人畜無毒，環境相容性好，不會產生傳統化學農藥的殘留問題。2)本發明云芝葡聚糖水劑中的有效成分是云芝葡聚糖，由于真菌多糖結構多樣，并且具有很高的生物活性，在防治馬鈴薯Y病毒過程中生物活性高，防效好，并且不易產生抗藥性。3)本發明云芝葡聚糖水劑使用時無粉塵飛揚，對作業者安全，與可濕性粉劑和懸浮劑相比，克服了可濕性粉劑生產和使用過程中的粉塵污染問題和懸浮劑儲存容易分層的缺點，本發明水中分散性好，貯存期無低溫結冰現象，在植物病毒病特別是馬鈴薯Y病毒的防治中具有廣闊的應用前景。
具體實施方式
:為使本發明的技術方案便于理解，以下結合具體試驗例對云芝葡聚糖水劑的制備及其在防治馬鈴薯Y病毒方面的應用具體說明。實施例1:云芝葡聚糖水劑的制備:步驟一:云芝的發酵:(I)搖瓶種子活化:均勻挑取保藏登記號為CGMCC N0.6760的云芝菌株的菌絲塊定量轉接于裝有80ml種子培養基的250ml三角瓶中，于28°C，120r/min恒溫振蕩培養4d ；所述的種子培養基配方為:葡萄糖20g/L，玉米粉10g/L，麩皮5g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余為水；(2)搖瓶種子培養:按50ml/L的接種量將搖瓶種子液接入裝有200ml種子培養基的500ml三角瓶中，于28°C，150r/min恒溫振蕩培養4d ;所述的種子培養基配方為:葡萄糖20g/L，玉米粉 10g/L，麩皮 5g/L，蛋白胨 3g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO40.2g/L，其余為水；(3) 600L大發酵罐培養:將搖瓶發酵的種子液接入600L發酵罐發酵培養；發酵罐裝料系數為0.7，接種量5 %，轉速150r/min，通風量0.8v/v/m,發酵溫度26 28V，罐壓
0.5kg/cm2 ;所述發酵培養基配方為:葡萄糖30g/L,玉米粉15g/L,豆餅粉20g/L,蛋白胨Ig/L，麩皮 7.5g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余為水；步驟二:云芝葡聚糖的提取將發酵 液過濾后得到的菌絲體用清水洗滌，洗滌后再過濾，向洗滌后的菌絲體中加入2%的Na2CO3溶液，菌絲體與Na2CO3溶液重量比為I: 20，抽提溫度45。。，pH為8.5，超聲破碎20min,過濾抽提液,將濾液5000r/min離心IOmin,減壓濃縮至原體積的1/10,向濃縮液中加入活性碳脫色，過濾，向濾液中加入等體積乙醇，沉淀30min后過濾，先后分別用無水乙醇、丙酮、乙醚沖洗沉淀物后真空干燥，得到云芝葡聚糖粗品；步驟三:制備云芝葡聚糖水劑:云芝葡聚糖水劑的各組分用量按重量計為:云芝葡聚糖粗品1.1%、表面活性劑烷基糖苷6.0%、防止分解劑I，2- 丁二醇4 %、防凍劑甘油4 %，用雙蒸水補足至100 %。云芝葡聚糖水劑的配制工藝為:向雙蒸水中加入云芝葡聚糖粗品以及表面活性劑烷基糖苷，控制反應溫度不高于60°C，攪拌至原藥完全溶解后加入防止分解劑1，2_ 丁二醇和防凍劑甘油，再加入適量的水補足至100 %，再次攪拌混合均勻。實施例2:1.1 %云芝葡聚糖水劑對馬鈴薯Y病毒的防效實驗:為驗證實施例1所制得的1.1%云芝葡聚糖水劑對馬鈴薯Y病毒的防效，我們在2009年9月至2010年7月進行大田推廣試驗，實驗結果報告如下:I試驗條件1.1實驗對象、作物和品種實驗對象為馬鈴薯Y病毒Potato virus Y，來源于西北農林科技大學植物保護學院植物病毒實驗室，試驗作物為馬鈴薯，品種為紫花白，購自陜西省咸陽市楊凌區金道種子農資站。1.2環境條件試驗用地選在陜西省咸陽市楊凌區，試驗地面積800m2 (1.21畝)，土質為輕壤土，有機質含量為1.01%，pH值7.7，所有試驗小區栽培條件及管理措施一致。本實驗設1.1%云芝葡聚糖水劑500倍液、20%克Y特靈可濕性粉劑300倍液和不施藥清水共3個處理，每個處理4個重復，共12個小區，各小區隨機排列，每個小區40m2小區間及試驗地周圍設置0.6m寬的隔離帶。2010年4月進行播種，平均株距8cm，播種后分別于2010年5月5日、15日和25日葉面噴霧一次，畝用藥液500kg，噴藥器械為工農-16型噴霧器。1.3氣象條件第一次施藥(5月5日)當日少云,風力3級,最高氣溫25°C,最低氣溫15°C,相對濕度為80%。第二次施藥(5月15日)當日陰，風力3級，最高氣溫23°C，最低氣溫15°C，相對濕度為80%。第一次施藥(5月25日)當日少云，風力5級，最高氣溫25°C，最低氣溫14°C，相對濕度為80%。最后一次施藥后7天進行調查，每小區采用4點取樣法，每點查20株，記錄總株數和各級病株數。分級方法:O級:植株莖基部和主根均無病斑；I級:莖基部和主根上有少量病斑；3級:莖基部或主根上病斑較多，病斑面積占莖和根總面積的四分之一 二分之5級:莖基部及主根上病斑多且較大，病斑面積占莖基部和根總面積的二分之一 四分之三；7級:莖基部或主根上病斑連片，形成燒莖現象，但根系并未死亡；9級:根系壞死，植株地上部萎蔫或死亡。
權利要求
1.一種云芝葡聚糖水劑，其特征在于:各組分用量按重量計為:云芝葡聚糖粗品1.0-2.0 %、表面活性劑烷基糖苷5.0-8.0%、防止分解劑1，2-丁二醇3.0-5.0%、防凍劑甘油4.0-10.0%，用雙蒸水補足至100%。
2.根據權利要求1的云芝葡聚糖水劑，其特征在于:云芝葡聚糖粗品1.1%、表面活性劑烷基糖苷5.0-8.0 %、防止分解劑I，2- 丁二醇4 %、防凍劑甘油4 %，用雙蒸水補足至100%。
3.根據權利要求1的云芝葡聚糖水劑，其特征在于:云芝葡聚糖粗品1.1 %、表面活性劑烷基糖苷6.0%、防止分解劑I，2- 丁二醇4 %、防凍劑甘油4 %，用雙蒸水補足至100 %。
4.根據權利要求1-3任一所述的云芝葡聚糖水劑，其特征在于:所述的云芝葡聚糖粗品是如下制得的: 步驟一:云芝的發酵: (1)搖瓶種子活化:均勻挑取保藏登記號為CGMCCN0.6760的云芝菌株的菌絲塊轉接于裝有80ml種子培養基的 250ml三角瓶中，于28°C，120r/min恒溫振蕩培養4d ;所述種子培養基配方為:葡萄糖20g/L，玉米粉10g/L，麩皮5g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO40.2g/L，其余為水； (2)搖瓶種子培養:按50ml/L的接種量將搖瓶種子液接入裝有200ml種子培養基的500ml三角瓶中，于28°C，150r/min恒溫振蕩培養4d ;所述的種子培養基配方為:葡萄糖20g/L，玉米粉 10g/L，麩皮 5g/L，蛋白胨 3g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO40.2g/L，其余為水； (3)600L大發酵罐培養:將經搖瓶發酵的種子液接入600L發酵罐發酵培養；發酵罐裝料系數為0.7，接種量5 %，轉速150r/min，通風量0.8v/v/m,發酵溫度26 28°C，罐壓0.5kg/cm2 ;所述發酵培養基配方為:葡萄糖30g/L,玉米粉15g/L,豆餅粉20g/L,蛋白胨Ig/L，麩皮 7.5g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余為水； 步驟二:云芝葡聚糖的提取 將經步驟一發酵后獲得的發酵液過濾后得到的菌絲體用清水洗滌，洗滌后再過濾，向洗滌后的菌絲體中加入2%的Na2CO3溶液，菌絲體與Na2CO3溶液重量比為1: 20，抽提溫度45°C,pH為8.5,超聲破碎20min,過濾抽提液,將濾液5000r/min離心IOmin,減壓濃縮至原體積的1/10，向濃縮液中加入活性碳脫色，過濾，向濾液中加入等體積乙醇，沉淀30min后過濾，先后分別用無水乙醇、丙酮、乙醚沖洗沉淀物后真空干燥，得到云芝葡聚糖粗品。
5.根據權利要求1-3任一所述的云芝葡聚糖水劑的制備方法,其特征在于:向雙蒸水中加入云芝葡聚糖粗品以及表面活性劑烷基糖苷，控制反應溫度不高于60°C，攪拌至原藥完全溶解后加入防止分解劑1，2-丁二醇和防凍劑甘油，再加入適量的雙蒸水補足至100 %，再次攪拌混合均勻。
6.根據權利要求1-3任一所述的云芝葡聚糖水劑在防治馬鈴薯Y病毒方面的應用。
全文摘要
本發明涉及一種云芝葡聚糖水劑及其制備方法，特別是涉及防治馬鈴薯Y病毒的云芝葡聚糖水劑。所述水劑包含按重量計的云芝葡聚糖粗品1.0-2.0％、表面活性劑烷基糖苷5.0-8.0％、防止分解劑1，2-丁二醇3.0-5.0％、防凍劑甘油4.0-10.0％，用雙蒸水補足至100％。所述云芝葡聚糖粗品采用保藏號為CGMCC No.6760的云芝菌株經菌株發酵和葡聚糖的提取步驟制得。本發明的云芝葡聚糖水劑500倍液對馬鈴薯Y病毒的平均防效大于78％，特別是1.1％的云芝葡聚糖水劑防治馬鈴薯Y病毒的平均防效高達80.4％，優于20％克Y特靈可濕性粉劑300倍液。
文檔編號A01G1/04GK103070172SQ20121057889
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月27日 優先權日2012年12月27日
發明者唐滿倉, 沈小英, 馬玉明, 安德榮 申請人:陜西恒田化工有限公司