專利名稱：一種抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)作物蟲害生物防治領(lǐng)域，涉及一種抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自從1932年首次報(bào)道我國南方番茄發(fā)生根結(jié)線蟲病以來，全國十余個(gè)省區(qū)都有根結(jié)線蟲病的發(fā)生和危害。近年來，我國保護(hù)地蔬菜發(fā)展迅速，溫室連年種植同種蔬菜作物，致使許多老齡溫室根結(jié)線蟲病害日趨嚴(yán)重，已造成了蔬菜的大幅度減產(chǎn)，給菜農(nóng)們帶來了巨大地經(jīng)濟(jì)損失。一般每年造成20% — 25%的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重的損失50% — 60%，甚至絕產(chǎn)。因此，對(duì)根結(jié)線蟲的危害治理已成為一項(xiàng)非常重要的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)任務(wù)。目前市場(chǎng)上殺線蟲的主要方法為化學(xué)殺線劑，如利用溴甲烷、有機(jī)磷化合物及抗生素等進(jìn)行土壤消毒。傳統(tǒng)的化學(xué)殺線劑不僅使用成本高，而且環(huán)境相容性差，破壞了土壤的結(jié)構(gòu)。隨著綠色消費(fèi)觀念的形成和迅速普及，迫切需要開發(fā)出安全、高效、低毒的新型生物合理殺線劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑。本發(fā)明的目的還在于提供該抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑的制備方法。本發(fā)明的目的還在于提供該抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑在蔬菜、瓜果及煙草等農(nóng)業(yè)種植方面的抑制根結(jié)線蟲的應(yīng)用效果。本發(fā)明的目的還在于使用該抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑能夠提高化肥利用率，減少重茬病害和農(nóng)藥用量，提高農(nóng)作物產(chǎn)品的安全性。本發(fā)明提供了一種抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑，由除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉、厚垣輪枝菌和球形芽孢桿菌菌液混合甘油而成，四株菌互不拮抗，保存時(shí)間長。其中，所述各菌菌液的分量按體積百分比優(yōu)選為除蟲鏈霉菌菌液30—40%，淡紫擬青霉菌液10 — 20%，厚垣輪枝菌20— 30%，球形芽孢桿菌10 — 30%，甘油20% ;各菌液混合后的有效總活菌數(shù)大于25億/毫升。本發(fā)明還提供了所述抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑的制備方法。該制備方法包括下述步驟
(I)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌、球形芽孢桿菌的原始菌種活化待
搖瓶培養(yǎng)。(2)分別將除蟲鏈霉菌、 淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的活化菌種搖瓶培養(yǎng)，獲得搖瓶種子。(3)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的搖瓶種子分別在發(fā)酵罐二級(jí)放大培養(yǎng)成待混合的菌液。(4)將滅菌后的甘油及發(fā)酵后待混合的除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌和球形芽孢桿菌菌液按比例混合即得。
所述步驟(I)中除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌的活化都在培養(yǎng)皿中進(jìn)行，培養(yǎng)溫度分別為32攝氏度，35攝氏度和32攝氏度，培養(yǎng)基按照標(biāo)準(zhǔn)的真菌培養(yǎng)基配料，培養(yǎng)時(shí)間為I天；球形芽孢桿菌的活化在試管斜面上進(jìn)行，培養(yǎng)溫度為35攝氏度，培養(yǎng)基成分為標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)時(shí)間為I天。所述步驟(2)中各菌種的搖瓶種子的培養(yǎng)參數(shù)和步驟(I)中的培養(yǎng)參數(shù)相同，只是將培養(yǎng)基改為液體培養(yǎng)基，置于在500mL的搖瓶中200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為2天。所述步驟(3)中除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的搖瓶種子在發(fā)酵罐二級(jí)放大培養(yǎng)，指將搖瓶中的除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的搖瓶種子分別接種在500L的發(fā)酵罐中培養(yǎng)，四株菌的培養(yǎng)基成分都為含10%的土豆泥、3%的豆柏粉的水溶液。培養(yǎng)溫度為步驟(I)所述各菌種的培養(yǎng)溫度，發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量系數(shù)都為0. 5，培養(yǎng)時(shí)間為27小時(shí)。本發(fā)明還提供了抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑在蔬菜、瓜果及煙草等農(nóng)業(yè)種植方面的抑制根結(jié)線蟲的應(yīng)用方法，其特征在于種植蔬菜、瓜果及煙草前耕地時(shí)均勻潑灑，每次使用量5L/畝。本發(fā)明還提供了抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑在抑制蔬菜、瓜果及煙草根結(jié)線蟲的應(yīng)用效果。其特征在于所述抑制根結(jié)線蟲微生物制劑含有大于25億/毫升數(shù)量的包括除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的活菌，施入土壤后通過活菌的不斷生長繁殖活動(dòng)，分泌適量的阿維菌素、除蟲素、胞外酶及根系促生因子。通過微生物細(xì)胞分泌并通過底物抑制機(jī)制維持 適量濃度的阿維菌素和除蟲素能夠殺死土壤及根系中的線蟲卵，使根結(jié)線蟲的發(fā)病率降低85%以上，避免使用其他農(nóng)藥的過量使用；通過微生物細(xì)胞分泌的胞外酶和根系促生因子能夠改善土壤的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，提高土壤的保水保肥能力同時(shí)促進(jìn)根系的發(fā)達(dá)從而提高作物的肥料營養(yǎng)吸收提高作物的抗性，可以促進(jìn)增產(chǎn)增收30%以上。


圖1 :沒用發(fā)明產(chǎn)品的芹菜根系與使用過發(fā)明產(chǎn)品的芹菜根系對(duì)比，使用過發(fā)明產(chǎn)品的根系發(fā)達(dá)，毛細(xì)根多，明顯沒有根結(jié)線蟲導(dǎo)致的根結(jié)。
具體實(shí)施例方式抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑各微生物菌劑的組分和體積比為除蟲鏈霉菌菌液30—40%,淡紫擬青霉菌液10 — 20%，厚垣輪枝菌20— 30%，球形芽孢桿菌10 — 30%，甘油20% ；
所述抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑按照下列工藝步驟生產(chǎn)
(I)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌、球形芽孢桿菌的原始菌種在微生物實(shí)驗(yàn)室活化待搖瓶培養(yǎng)。其中除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌的活化都在培養(yǎng)皿中進(jìn)行，培養(yǎng)溫度分別為32攝氏度，35攝氏度和32攝氏度，培養(yǎng)基按照標(biāo)準(zhǔn)的真菌培養(yǎng)基配料，培養(yǎng)時(shí)間為I天；球形芽孢桿菌的活化在試管斜面上進(jìn)行，培養(yǎng)溫度為35攝氏度，培養(yǎng)基成分為標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)時(shí)間為I天。(2)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的活化菌種搖瓶培養(yǎng)，獲得搖瓶種子。 各菌種的搖瓶種子的培養(yǎng)參數(shù)和步驟(I)中的培養(yǎng)參數(shù)相同，只是將培養(yǎng)基改為液體培養(yǎng)基，放在500mL的搖瓶中200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為2天。(3)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的搖瓶種子分別在發(fā)酵罐二級(jí)放大培養(yǎng)成待混合的菌液。將搖瓶中的除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的搖瓶種子分別接種在500L的發(fā)酵罐中培養(yǎng)，四株菌的培養(yǎng)基成分都為含10%的土豆泥、3%的豆柏粉的水溶液。培養(yǎng)溫度為步驟(I)所述各菌種的培養(yǎng)溫度，發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量系數(shù)都為0. 5，培養(yǎng)時(shí)間為27小時(shí)。(4)將滅菌后的甘油及發(fā)酵后待混合的除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌和球形芽孢桿菌菌液按比例混合即得。實(shí)施例
將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌和厚垣輪枝菌的原始菌種利用真菌培養(yǎng)基平板，球形芽孢桿菌的原始菌種利用細(xì)菌培養(yǎng)基斜面在實(shí)驗(yàn)室活化培養(yǎng)I天，將活化后各菌種分別在與各自的活化培養(yǎng)基成分相同的液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)2天，然后將搖瓶培養(yǎng)好的菌種分別在500L的發(fā)酵罐中以相同都是10%濃度土豆泥和3%豆柏粉的培養(yǎng)基培養(yǎng)27小時(shí)，最后將500L發(fā)酵罐培養(yǎng)好的除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌和厚垣輪枝菌和球形芽孢桿菌以及滅菌好的甘油按30%、15%、25%、10%和20%的比例混合即的。實(shí)驗(yàn)例2012年3月中旬在湖北省通城縣大坪鄉(xiāng)和湖南省懷化市安江鎮(zhèn)分別進(jìn)行了該抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑的試驗(yàn)工作。示范面積130畝，示范過程中土壤條件、水肥及各項(xiàng)管理水平一致。示范田地均為多年種植芹菜大棚，根結(jié)線蟲病害嚴(yán)重。該地塊每年都被精心耕種、精心管護(hù)、投入大量資金購買化肥、農(nóng)藥用于增加土地肥力和滅治病蟲害，但隨著種植時(shí)間的 增長根結(jié)線蟲越來越厲害，近幾年出現(xiàn)大面積減產(chǎn)40%以上。在今年用此發(fā)明后，菜地發(fā)生了驚人的變化相對(duì)沒用發(fā)明產(chǎn)品的地塊根結(jié)線蟲明顯抑制，芹菜毛細(xì)根發(fā)達(dá)，產(chǎn)量在原來基礎(chǔ)上提高了 50%以上。(如圖1左邊為沒用該產(chǎn)品的芹菜根系長滿根結(jié)線蟲，毛細(xì)根少；右邊為使用該發(fā)明的芹菜根系，基本沒有線蟲，根系發(fā)達(dá)，毛細(xì)根多。)
權(quán)利要求
1.一種抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑，其特征在于，由除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌和球形芽孢桿菌菌液和甘油按比例混合而成，四株菌在甘油的配合下互不拮抗，而且保存時(shí)間可超過2年。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑，其特征在于所述除蟲鏈霉菌菌液30— 40%，淡紫擬青霉菌液10 — 20%，厚垣輪枝菌20— 30%，球形芽孢桿菌10 — 30%，甘油 20% ;各菌液混合后的有效總活菌數(shù)大于25億/毫升。
3.—種權(quán)利要求所述抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑的生產(chǎn)方法，該方法包括下述步驟(1)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌、球形芽孢桿菌的原始菌種活化待搖瓶培養(yǎng)；(2)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的活化菌種搖瓶培養(yǎng)，獲得搖瓶種子；(3)分別將除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的搖瓶種子分別在發(fā)酵罐二級(jí)放大培養(yǎng)成待混合的菌液；(4)將滅菌后的甘油及發(fā)酵后待混合的除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌和球形芽孢桿菌菌液按比例混合即得。
4.權(quán)利要求1一3任一所述的抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑在蔬菜、瓜果及煙草的根結(jié)線蟲抑制效果，其特征在于所述抑制根結(jié)線蟲微生物制劑含有大于25億/毫升數(shù)量的包括除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的活菌，施入土壤后通過活菌的不斷生長繁殖活動(dòng)，分泌適量的阿維菌素、除蟲素、胞外酶及根系促生因子；通過微生物細(xì)胞分泌并通過底物抑制機(jī)制維持的適量濃度的阿維菌素和除蟲素能夠殺死土壤及根系中的線蟲卵，使根結(jié)線蟲的發(fā)病率降低85%以上，避免使用其他農(nóng)藥的過量使用；通過微生物細(xì)胞分泌的胞外酶和根系促生因子能夠改善土壤的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，提高土壤的保水保肥能力同時(shí)促進(jìn)根系的發(fā)達(dá)從而提高作物的肥料營養(yǎng)吸收和提高作物的抗性，可以促進(jìn)增產(chǎn)增收30% 以上。
全文摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)作物蟲害生物防治領(lǐng)域，提供了一種抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑，該制劑由除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉、厚垣輪枝菌和球形芽孢桿菌菌液混合甘油而成，本發(fā)明還提供了該抑制根結(jié)線蟲的微生物制劑的生產(chǎn)方法和應(yīng)用效果，該微生物制劑含有大于25億/毫升數(shù)量的包括除蟲鏈霉菌、淡紫擬青霉菌、厚垣輪枝菌及球形芽孢桿菌的活菌，施入土壤后通過活菌不斷生長繁殖活動(dòng)產(chǎn)生的代謝物殺死根結(jié)線蟲卵，改善土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)、提高肥料利用率達(dá)到增產(chǎn)增收的作用。
文檔編號(hào)A01N63/02GK103039534SQ20121058101
公開日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者李峰 申請(qǐng)人:李峰