專利名稱：線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種毒理試驗直觀觀測培養基及其制備方法。
背景技術：
線蟲屬于線形動物門(Nematoda)，種類繁多，數量豐富，是態系統重要的生態因子，被廣泛用作生態環境健康評價的敏感性指示生物。線蟲能夠較靈敏地感受周圍環境變化，其生活史周期短，可在短時間內對環境變化產生指示作用。一些易于培養、保存的線蟲種屬如秀麗隱桿線蟲Caenorhabditis elegans,已被廣泛用作模式生物,在毒理學等實驗科學中進行環境科學、生命科學等領域的研究。由于線蟲生活周期短和壽命短的特點，線蟲更多的用于24h或更短時間的急性毒理試驗中。進行毒理學試驗的線蟲載體一般是瓊脂培養基或者是受試液體。線蟲身體透明，體長一般在Imm左右，在顯微鏡下可見。經典毒理學指標包括死亡率、行為變化等，這些指標都要求對試驗線蟲進行死亡判定、計數以及行為觀測等。其中線蟲死亡的判定，需要借助工具，若碰觸無反應則界定為死亡，奄奄一息的線蟲往往對這種碰觸無反應，使得死亡蟲數虛高；而碰觸后的蟲體受損，無法進行后繼的生理生化分析。在傳統的培養基中，線蟲與瓊脂、水液等培養基質顏色相近，不利計數和觀測；線蟲常常會有鉆入瓊脂膠中的情況，出現丟蟲現象，這增加了計數和行為判斷的難度；顯微鏡下觀測水液中線蟲往往有波動水紋，出現漏查，這會影響對線蟲計數的準確，特別是蟲體隨水晃動，而無法判斷線蟲是否死亡。一般對毒理試驗中常用的一個脅迫下10條蟲子的死亡鑒定，至少需要5min，蟲子由 于鉆入瓊脂膠中無法發現，使得總數往往低于10條。而對其進行行為測量，更是可能高達O. 5h。因此傳統培養基使得毒理試驗中線蟲觀測費力誤時，效率極低，也使得試驗結果的準確度和精確度有所下降。

發明內容
本發明是要解決傳統的線蟲毒理試驗培養基底計數不準確、死亡判斷誤差大、觀測時間長、行為觀測不精準的問題，提供線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基及其制備方法。本發明線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由45% 60%的石膏、5% 10%的活性炭和余量的蒸餾水制成。上述線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，按以下步驟進行一、按質量百分比稱取45% 60%的石膏、5% 10%的活性炭和余量的蒸餾水；二、將步驟一稱取的石膏和活性炭混合均勻，然后倒入蒸餾水中，攪拌均勻，得混合物；三、將混合物倒于12孔細胞培養板中，厚度為O.1 O. 2cm ;四、靜置于水平臺上至凝固，即得到線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基。本發明的有益效果1、本發明的培養基具有由活性炭顯色的黑色培養基底，與現有的瓊脂、水液等與線蟲體色近似的培養基底相比，線蟲顯而易見，觀測更為方便；
2、活線蟲在石膏和活性炭混合基底上表現為垂直站立和劇烈擺尾行為，而死亡線蟲無站立和擺動，這使得對線蟲計數和死亡判定直觀可見，不會出現丟蟲、漏蟲現象，觀測時間縮短為Imin以內，效率明顯提高，試驗結果的準確度和精確度也獲得提升；3、與瓊脂、水液培養基相比，使用本發明的培養基進行急性毒理試驗，線蟲的存活和行為等沒有差異，即本發明的培養基沒有對線蟲的存活和行為產生影響。本發明解決了傳統的線蟲毒理試驗培養基底計數不準確、死亡判斷誤差大、觀測時間長、行為觀測不精準等問題。利用本發明的培養基進行線蟲毒理試驗，易于計數，死蟲判定顯見，易于進行行為觀測，試驗結果準確度和精確度都有所提高；由于對蟲體無觸碰傷損，便可對這些進行常規毒理試驗的線蟲，進行進一步的生理生化分析。本發明的線蟲毒理直觀高效觀測培養基，使得利用線蟲進行快速的生物監測加以評價生態風險和環境健康成為可能。
具體實施例方式本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。

具體實施方式
一本實施方式線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由45% 60%的石膏、5% 10%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由50 % 55 %的石膏、7 % 8 %的活性炭和余量的蒸餾水制成。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一不同的是線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由50%的石膏、8%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一不同的是線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由55%的石膏、9%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一不同的是線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由60%的石膏、10%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
具體實施方式
六具體實施方式
一所述線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，按以下步驟進行一、按質量百分比稱取45% 60%的石膏、5% 10%的活性炭和余量的蒸餾水；
二、將步驟一稱取的石膏和活性炭混合均勻，然后倒入蒸餾水中，攪拌均勻，得混合物；三、將混合物倒于12孔細胞培養板中，厚度為O.1 O. 2cm ;四、靜置于水平臺上至凝固，即得到線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
六不同的是步驟三所述12孔細胞培養板的孔直徑為22. 1mm，孔高度為O. 5cm。其它與具體實施方式
六相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
六不同的是步驟八中厚度為
O.15cm。其它與具體實施方式
六相同。
具體實施方式
九本實施方式線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，按以下步驟進行一、稱取45g石膏、5g活性炭和50mL蒸餾水；二、將步驟一稱取的石膏和活性炭混合均勻，然后倒入蒸餾水中，攪拌均勻，得混合物；三、將混合物倒于12孔細胞培養板中，厚度為O.1cm ;四、靜置于水平臺上至凝固，即得到線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基；其中步驟三中12孔細胞培養板的孔直徑為22. 1mm，孔高度為O. 5cm。利用本實施方式的培養基進行對秀麗隱桿線蟲急性毒理試驗，由于線蟲體色與培養基黑色基底對比明顯，且活線蟲表現為豎直站立和擺動，使得死亡線蟲的判定變的直觀而簡單，計數效率明顯提高。觀測時間縮短為30 50s，無丟蟲、漏蟲現象，提高了驗結果的準確度和精確度。
具體實施方式
十本實施方式線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，按以下步驟進行一、稱取50g石膏、Sg活性炭和42mL蒸餾水；二、將步驟一稱取的石膏和活性炭混合均勻，然后倒入蒸餾水中，攪拌均勻，得混合物；三、將混合物倒于12孔細胞培養板中，厚度為O. 2cm ;四、靜置于水平臺上至凝固，即得到線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基；其中步驟三中12孔細胞培養板 的孔直徑為22. 1mm，孔高度為O. 5cm。利用本實施方式的培養基進行對秀麗隱桿線蟲急性毒理試驗，由于線蟲體色與培養基黑色基底對比明顯，且活線蟲表現為豎直站立和擺動，使得死亡線蟲的判定變的直觀而簡單，計數效率明顯提高。觀測時間縮短為30 50s，無丟蟲、漏蟲現象，提高了驗結果的準確度和精確度。
具體實施方式
^ :本實施方式線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，按以下步驟進行一、稱取60g石膏、IOg活性炭和30mL蒸餾水；二、將步驟一稱取的石膏和活性炭混合均勻，然后倒入蒸餾水中，攪拌均勻，得混合物；三、將混合物倒于12孔細胞培養板中，厚度為O.1cm ;四、靜置于水平臺上至凝固，即得到線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基；其中步驟三中12孔細胞培養板的孔直徑為22. 1mm，孔高度為O. 5cm。利用本實施方式的培養基進行對秀麗隱桿線蟲急性毒理試驗，由于線蟲體色與培養基黑色基底對比明顯，且活線蟲表現為豎直站立和擺動，使得死亡線蟲的判定變的直觀而簡單，計數效率明顯提高。觀測時間縮短為30 50s，無丟蟲、漏蟲現象，提高了驗結果的準確度和精確度。
權利要求
1.線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基，其特征在于線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由45% 60%的石膏、5% 10%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
2.根據權利要求1所述的線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基，其特征在于線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由50% 55%的石膏、7% 8%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
3.根據權利要求1所述的線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基，其特征在于線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由50%的石膏、8%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
4.根據權利要求1所述的線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基，其特征在于線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由55%的石膏、9%的活性炭和余量的蒸餾水制成。
5.根據權利要求1所述的線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基，其特征在于線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基按質量百分比由60 %的石膏、10 %的活性炭和余量的蒸餾水制成。
6.如權利要求1所述的線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進行一、按質量百分比稱取45% 60%的石膏、5% 10%的活性炭和余量的蒸餾水；二、將步驟一稱取的石膏和活性炭混合均勻，然后倒入蒸餾水中，攪拌均勻，得混合物；三、將混合物倒于12孔細胞培養板中，厚度為O.1 O. 2cm ;四、靜置于水平臺上至凝固，即得到線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基。
7.根據權利要求6所述的線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，其特征在于步驟三所述12孔細胞培養板的孔直徑為22. 1mm，孔高度為O. 5cm。
8.根據權利要求6或7所述的線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基的制備方法，其特征在于步驟八中厚度為O. 15cm。
全文摘要
線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基及其制備方法，涉及一種毒理試驗直觀觀測培養基及其制備方法。是要解決傳統的線蟲毒理試驗培養基底計數不準確、死亡判斷誤差大、觀測時間長、行為觀測不精準的問題。培養基按質量百分比由45％～60％的石膏、5％～10％的活性炭和余量的蒸餾水制成。方法將石膏和活性炭混合均勻，然后倒入蒸餾水中，攪拌均勻，得混合物；將混合物倒于12孔細胞培養板中，厚度為0.1～0.2cm；靜置于水平臺上至凝固，即得到線蟲急性毒理試驗直觀觀測培養基。本發明易于計數，死蟲判定顯見，易于進行行為觀測，試驗結果準確度和精確度都有所提高。本發明應用于線蟲毒理試驗。
文檔編號A01K67/033GK103053478SQ20131001213
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月14日 優先權日2013年1月14日
發明者王云彪, 王雪峰, 武海濤, 劉晶, 閆修民, 吳東輝 申請人:中國科學院東北地理與農業生態研究所