專利名稱：虎乳靈芝的段木栽培方法
技術領域：
本發明涉及一種食藥用菌的人工栽培方法，屬于食藥用菌人工栽培領域。
背景技術：
虎乳靈芝rhinocerus (Cooke) Ryvarden,隸屬真菌門 Eumycota,擔子菌亞門 Basidiomycotin,層菌綱 Hymenomycetes,非裙菌目 Aphyllophorales,多孔菌科Polyporaceae,虎乳靈芝屬Lignosus,也稱虎奶，是一種被馬來西亞原住民廣泛使用的食藥用真菌，大約有400年的應用歷史。主要分布于馬來西亞，菲律賓，斯里蘭卡，澳大利亞和東非等，中國分布于海南省。菌核是其藥用部位，有止咳定喘、健脾化濕的功效，民間常用于治療哮喘及咳喘，療效極佳。中醫認為它是一種治療肝炎、肝熱、肝癌、胃病的良藥。西醫出身的馬來西亞前首相馬哈蒂爾在2002年馬來西亞國際生物技術大會上提到虎乳靈芝治愈他久咳之病后更是名聲大振。由于亂采亂挖、資源破壞現象嚴重，目前野生資源逐漸枯竭，市場上虎乳靈芝供應不足，價格昂貴。
目前有關虎乳靈芝人工栽培的報道很少，只檢索到一種代料栽培方法的報道(藥用真菌新品種-虎乳靈芝的人工栽培實驗，中國食用菌，1999，18(3):8-9)。該法存在的不足主要有:形成菌核無固定著點，數量多，個體小，發育差，商品價值較低。究其原因，代料栽培在經過半年的培養后，培養基中養料已耗光，菌核不可能再長大。虎乳靈芝生長周期較長，后期營養跟不上則沒法繼續生長，因此相比而言，野生虎乳靈芝菌核較大。本發明克服現有技術不足，模仿虎乳靈芝的野生生長環境，采用段木栽培方法培養虎乳靈芝，一般新鮮段木兩三年內不會被完全分解，因此可以較長時間滿足虎乳靈芝營養需求，從而形成優質、大個、商品價值高的菌核。發明內容
本發明提供虎乳靈芝的段木栽培方法，所要解決的技術問題是:針對現有的虎乳靈芝人工栽培方法中存在的技術不成熟，產量低，菌核小等缺陷，提供一種新的人工栽培虎乳靈芝的方法。本發明摸索出了最適合于虎乳靈芝菌核形成的培養基成分、濕度、溫度等環境因子，培養出來的菌核具有質量好、商品價值高的優點。
本發明目的是提供虎乳靈芝的段木栽培方法。
所述虎乳靈芝的段木栽培方法，包括如下步驟:購買或分離獲得虎乳靈芝菌種；將虎乳靈芝菌種接到母種培養基上擴大培養，獲得虎乳靈芝母種；將虎乳靈芝母種接種于原種培養基培養獲得原種；原種接種到段木上進行段木培養；培養好的段木埋入沙土進行菌核培養；菌核采收。所述菌種購買自中國科學院微生物研究所或三明市真菌研究所； 所述分離，可從海南或馬來西亞野外采集野生虎乳靈芝菌核，對其進行表面清洗，自來水沖洗數分鐘后，干凈紗布揩干后，進入超凈工作臺，用消毒酒精擦洗菌核外皮，無菌水沖洗幾次，滅菌濾紙片吸干表面水分后，用無菌解剖刀將野生虎乳靈芝菌核切開，接種鏟挖取切取0.4cm左右方塊組織，0.1%升汞消毒3分鐘后用鑷子將菌核組織于培養皿培養基的中央，30°C培養5d后可見由組織塊長出白色絨毛狀菌，轉試管1-2次可獲得純化的虎乳靈芝菌絲； 所述母種培養基，用液體母種培養基，配方為:酵母粉IOg,蛋白胨IOg,葡萄糖20g,磷酸二氫鉀0.3g，七水硫酸鎂0.2g，瓊脂粉15克，蒸餾水IOOOmL, pH6.0,用250ml或500ml三角瓶，裝量為三角瓶容積的40%，121°C滅菌25min，冷卻至室溫后接入虎乳靈芝菌種，在旋轉式搖床上旋轉，培養10-15天，成為虎乳靈芝液體母種； 所述母種培養基，用固體母種培養基，其配方為每IOOOml上述液體母種培養基添加15克瓊脂粉，121°C滅菌25min，冷卻至室溫后接入虎乳靈芝菌種，培養15-20天，成為虎乳靈芝固體母種； 所述原種培養基配方:闊葉樹木屑20-50%、棉籽殼28-58%、麥麩20%、蔗糖1%、石膏粉1%，攪拌均勻后加水，最終培養基含水量為50-60%，優選培養基配方為闊葉樹木屑30%、棉籽殼48%、麥麩20%、蔗糖1%、石膏粉1%，攪拌均勻后加水，最終培養基含水量55% ； 所述原種培養基一般可制成500ml-750ml原種瓶； 所述母種、原種均為25°C _38°C恒溫暗室培養，優選培養溫度30°C ； 所述虎乳靈芝段木培養生產工藝流程為: 樹木選擇一切段一裝袋一滅菌一接種一菌絲培養一場地準備一埋沙土一管理、菌核培養一米收 所述樹木選擇，樹種優選闊葉樹，例如橡膠木、櫟樹、栲樹、樺樹、青R木等，砍伐運輸過程中，盡可能保持樹皮完 整； 所述切段為將所選樹木切段，切段長度一般15-30cm，優選切段長度為18-22cm，切面要平，周圍棱角要削平，以免刺破塑料袋； 所述裝袋為將段木捆扎，在段木上下表面放含水量40-55%的棉籽皮后裝袋；若段木過干，則浸水過夜再裝袋，當段木干燥至含水量為35%-45%時，即可切段裝袋；所述袋為聚丙烯袋，適用于高壓滅菌；或聚乙烯袋，適于常壓滅菌； 所述滅菌為常壓滅菌，保持100°C，10-12h或高壓滅菌121°C，保持1_1.5h ； 所述菌絲培養為將接種后的段木菌袋放暗室培養，溫度22°C -38°C，優選30°C ;—般菌絲培養時間35-50d ;通過開門窗換氣增加袋內氧氣，促進菌絲向木質部深層生長； 所述場地準備:栽培場在晴天翻土 15-25cm，開畦，畦高10-15cm，畦寬1.5-1.8m,畦長按地形決定:畦面四周開好排水溝，溝深20-40cm ； 所述埋土:菌木下面放置顆粒較大的粗沙，大小為體積20立方厘米左右，虎乳靈芝為好氣性真菌，容易在阻力較小的空間形成菌核生長點，并以此為中心而擴展菌核；菌木間距4-10cm,行距8-15cm，優選為間距6-8cm，行距10-12cm ;菌木上覆沙土深淺厚薄視栽培場濕度大小酌情處理，以菌木不露為標準，上面鋪一層樹葉，以利保濕或防止曝曬； 所述管理、菌核培養，主要是:(I)溫度虎乳靈芝正常的生長溫度為15°C_38°C，最適范圍為25°C _32°C，夏天氣溫高時要注意搭蔭棚降溫，冬天或者初春、深秋氣溫較低時則需要覆膜保溫。(2)濕度保持菌木及沙土的濕度，既不能澇又不能旱，維持在含水量35-50%左右，較優為40-45%。段木栽培埋土 5個月后可采收菌核，可維持近2年年采收3茬。根據我們幾年的栽培數據統計顯示，以IOOOkg干木材計，第一茬可收獲45-66kg，第二茬收獲32-43kg，第三茬 9-15kg ；本發明方法是申請人對培養基、菌絲培養條件、菌核培養條件等影響因素及各因素之間相互影響關系進行多次優選組合而得到的，該方法簡便易行，投資小、見效快，易于推廣；本發明方法菌核個大、質量好、商品價值高。虎乳靈芝菌核在治療哮喘及咳喘具有極佳療效，又在治療肝炎、肝熱、肝癌方面有顯著效果；同時虎乳靈芝無毒副作用，可以作為膳食纖維補充人體需要。目前市場上野生虎乳靈芝不能滿足市場需求，價格昂貴，菌類學家認為虎乳靈芝是最有開發前途的藥用真菌之一，市場前景廣闊。人工栽培有望產生顯著的經濟效.、Mo具體實施方式
以下實施例對本發明作進一步的說明。
實施例1 虎乳靈芝菌種購自三明真菌研究所，將虎乳靈芝菌種擴大培養于固體母種培養基上15d獲得虎乳靈芝母種，再接種于原種培養基培養40d，待菌絲長滿后接種到段木袋上培養; 固體母種培養基配方為:酵母粉1Og,蛋白胨IOg,葡萄糖20g,磷酸二氫鉀0.3g,七水硫酸鎂0.2g，瓊脂粉15g，蒸餾水lOOOmL，pH6.0,121°C滅菌30min。原種培養基:闊葉樹木屑80%、麥麩18%、蔗糖1%、石膏粉1%，攪拌均勻后加水，使培養基含水量達55 60% ;原種培養基用500mL原種瓶，裝量不超過400ml，以保證充足的空氣；將固體母種挑一小塊接入原種培養基中培養。
母種、原種培養條件為30°C恒溫暗室培養；浙江省杭州地區安排生產，母種培養安排在I月中旬；原種安排在2月中上旬；段木菌袋培養開始于3月上旬，下地安排在3月中下旬； 段木培養工藝流程: 樹木選擇一切段一裝袋一滅菌一接種一菌絲培養一場地準備一脫袋、埋土一管理、菌核生長一米收； 所述樹木選擇，樹種優選闊葉樹，例如橡膠木、櫟樹、栲樹、樺樹、懸鈴木等； 所述切段為將所選樹木切段，切段長度一般15-30cm，優選切段長度為18-22cm ;切面要平，周圍棱角要削平； 所述裝袋，在兩個切面放置含水量40-55%的棉籽皮后裝袋，可以避免刺破塑料袋，又有利于原種接入后的菌絲快速吃料滲透；若段木過干，則浸水過夜再裝袋；當段木含水量為35% 45%時，即可切段裝袋；所述袋，聚丙烯袋，適用于高壓滅菌；聚乙烯袋，適用于常壓滅菌； 所述滅菌為常壓滅菌，保持100°C，10h或高壓滅菌121°C，保持1.5h ； 所述接種為將一湯匙左右原種接入到滅菌后的段木袋中； 所述栽培場地準備:栽培場在晴天翻土 15-25cm，開畦，畦高10-15cm，畦寬L 5-1.8m，畦長按地形決定:畦面四周開好排水溝，溝深20-40cm ；所述埋土:菌木下面放置顆粒較大的粗沙，大小為體積20立方厘米左右，虎乳靈芝為好氣性真菌，容易在阻力較小的空間形成菌核生長點，并以此為中心而擴展菌核；菌木間距4-10cm,行距8-15cm，優選為間距6-8cm，行距10-12cm ;菌木上覆沙土深淺厚薄視栽培場濕度大小酌情處理，以菌木不露為標準，上面鋪一層樹葉，以利保濕或防止曝曬； 所述管理、菌核培養，主要是:(I)溫度虎乳靈芝正常的生長溫度為15°C_38°C，最適范圍為25°C _32°C，夏天氣溫高時要注意搭蔭棚降溫，冬天或者初春、深秋氣溫較低時則需要覆膜保溫。(2)濕度保持菌木及沙土的濕度，既不能澇又不能旱，一般維持在含水量35-50%左右，較優為40-45%。段木栽培埋土 5個月后可采收菌核，可維持近2年年采收3茬。根據我們幾年的栽培數據統計顯示，以IOOOkg干木材計，第一茬可收獲55-76kg，第二茬收獲32-43kg，第三茬9-15kg。
實施例2 虎乳靈芝菌種購自中國科學院微生物研究所，將虎乳靈芝菌種在液體培養基上擴大培養10-15d獲得虎乳靈芝母種。
母種培養基選用液體培養基:酵母粉10g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀0.3g,七水硫酸鎂0.2g,蒸餾水IOOOmL, ρΗ6.0,121 °C濕熱滅菌25min。用250ml或500ml三角瓶，裝量IOOml或200ml，121°C滅菌30min，冷卻至室溫后接種虎乳靈芝菌種，在旋轉式搖床上旋轉，培養10-15天，成為虎乳靈芝液體母種。原種培養基采用櫟樹木屑80%、麥麩18%、蔗糖1%、石膏粉1%，攪拌均勻后加水，使培養基含水量達50 55% ;原種培養基裝在750mL原種瓶，裝量不超過450ml，以保證充足的空氣；液體母種接種到原種培養基上，吃料較快，一般25-30d后可以長滿培養基。
其他操作方式同實施例1。
實施例3 虎乳靈芝菌種，從海南野生虎乳靈芝菌核分離得到，先對采集的野生虎乳靈芝菌核進行表面清洗，自來水沖洗數分鐘后，干凈紗布揩干后，進入超凈工作臺，用消毒酒精擦洗菌核外皮，無菌水沖洗幾次，滅菌濾紙片吸干表面水分后，用無菌解剖刀將野生虎乳靈芝菌核切開，接種鏟挖取切取0 .4cm左右方塊組織，0.1%升汞消毒3分鐘后用鑷子將菌核組織于培養皿培養基的中央，30°C培養5d后可見由組織塊長出白色絨毛狀菌，轉試管1-2次可獲得純化的虎乳靈芝菌絲。
海南省安排生產，一年四季均可進行。
其他操作方式同實施例1。
權利要求
1.虎乳靈芝的段木栽培方法，其特征在于，包括:將虎乳靈芝菌絲接到母種培養基擴大培養，獲得虎乳靈芝母種；將母種接于原種培養基培養獲得原種；原種接種到段木上培養獲得段木栽培種；將段木栽培種埋沙土，管理，收獲菌核。
2.根據權利要求1所述虎乳靈芝的段木栽培方法，其特征在于，母種培養基配方為:酵母粉10g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀0.3g，七水硫酸鎂0.2g，蒸餾水IOOOmL,pH6.0，為液體母種培養基，若加瓊脂粉15g，則為固體培養基。
3.根據權利要求1所述虎乳靈芝的段木栽培方法，其特征在于，原種培養基的配方:闊葉樹木屑20-50%、棉籽殼28-58%、麥麩20%、蔗糖1%、石膏粉1%，攪拌均勻后加水，最終培養基含水量為50-60%。
4.根據權利要求1所述虎乳靈芝的段木栽培方法，其特征在于，所述母種、原種培養條件均為22°C 38°C恒溫暗室培養。
5.根據權利要求1所述虎乳靈芝的段木栽培方法，其特征在于，所述段木栽培種工藝流程為: 樹木選擇一切段一裝袋一滅菌一接種一菌絲培養一場地準備一脫袋、埋土一管理、菌核培養一米收； 所述滅菌為常壓滅菌，保持100°C，8 12h或高壓滅菌121°C，保持I 1.5h ; 所述菌絲培養為將接種后段木菌袋放暗室培養，溫度25°C 38°C ； 所述栽培場地準備:栽培場應在晴天翻土 15 25cm，開畦，畦高10 15cm，畦寬1.5 ·1.8m,畦長按地形決定；畦面四周開好排水溝，溝深20 40cm ； 所述埋土:菌木下面放置的沙土為顆粒較大的粗沙；菌木間距4-lOcm，行距8-15cm ;覆沙土深淺厚薄應視栽培場濕度大小酌情處理，以菌木不露為標準，上面鋪一層樹葉； 所述管理、菌核培養:(I)溫度虎乳靈芝正常的生長溫度為15°C _38°C，夏天高溫時搭蔭棚降溫，冬天或初春、深秋氣溫較低時覆膜保溫(2)濕度要保持菌木及沙土的濕度，既不能澇又不能旱，維持 在含水量35-50%。
全文摘要
本發明公開了虎乳靈芝的段木栽培方法。該方法包括虎乳靈芝母種、原種和段木栽培種制作，選地整地、段木栽培種埋土、田間管理和采收。本發明克服以前技術不足，模仿虎乳靈芝的野生生長環境，采用段木栽培方法培養虎乳靈芝，滿足虎乳靈芝菌核營養需求，從而形成優質菌核。
文檔編號A01G1/04GK103168617SQ201310012530
公開日2013年6月26日 申請日期2013年1月14日 優先權日2013年1月14日
發明者吳吉安, 陳向東, 鐘耀強, 曾念開 申請人:杭州益禾農業科技有限公司