專利名稱：一種中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法
技術領域：
本發明涉及一種培養蛹蟲草菌的方法，具體涉及ー種中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法。
背景技術：
中草藥業是中國的傳統產業之一，近幾年隨著中醫藥事業的發展，中草藥和中成藥的應用日益增多，而隨之帶來的則是大量中藥材經提取后產生的中藥廢渣污染。現有中藥材的提取エ藝較為単一，從而造成中藥廢渣中含有大量的營養物質如粗纖維、粗蛋白、粗脂肪、糖類和氨基酸等，而且中藥廢渣中還會含有許多藥用活性成分。但目前為止對中藥廢渣的利用一般僅限于將其粉碎后添加到動物飼料中，從而對動物的生長起到一定的促進作用。該法應用普遍，但具有一定的局限性，如:一、中藥廢渣原料來源不同，組方復雜，加工エ藝有差異、有效成分差距較大，很難對中藥廢渣做出準確的藥效評定和統一的質量標準；ニ、中藥廢渣一般是通過干燥、粉碎后直接添加于飼料中，但由于中藥廢渣中含有大量動物不易消化吸收的粗纖維，從而造成其營養成分的流失；三、由于中藥廢渣中的藥用活性成分含量較低，其在生產中的添加量偏高，常會影響到飼料的適ロ性；四、生產企業在進行中草藥添加劑組方時，大多根據中醫資料吉澤或中草藥的用途和功能，而不是針對不同動物的特性和生長階段的需要，片面的追求添加的作用和效果，缺乏科學系統的理論佐證；五、目前中藥廢渣的利用價值評估絕大多數僅停留在表觀的生產性能，而生產性能與藥渣活性成分之間的關系不明確，就限制了藥渣更深層次的加工與利用。綜上，現有對中藥廢渣的利用還需得到進ー步的開發。

發明內容
有鑒于此，本發明提供ー種中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，其可以有效而充分地利用中藥廢渣所含有的營養成分以及有效成分，而且其生產成本較低，中藥廢渣得到有效充分利用的同時，其對環境的污染大幅減小。

為解決以上技術問題，本發明的技術方案是采用ー種中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，步驟如下:將中藥五味子提取物廢渣和水按照1:1-2的重量比例混合并滅菌后得培養基，所得培養基表面接種蛹蟲草菌種液，將接種后的培養基于25-27°C下恒溫避光培養10-15天即可。優選的，所述中藥五味子提取物廢渣經粉碎成藥渣粉末后，將所得藥渣粉末與水按照100:10-20的重量比例混合并滅菌得培養基。優選的，所述藥渣粉末經20目以上篩篩選過后，篩下藥渣粉末與水按照100:10-20的重量比例混合并滅菌得培養基。優選的，所述滅菌方式為采用蒸汽滅菌和/或紫外滅菌。優選的，所述蒸汽滅菌時蒸汽的溫度為110-130°C。優選的，所述蒸汽滅菌時蒸汽的溫度為121°C。
本發明與現有技術相比，其詳細說明如下:本發明首先采用將中藥材廢渣制備成微生物培養基的方式；中藥廢渣中一般含有一定量的營養成分，包括粗纖維、粗蛋白、粗脂肪、糖類和氨基酸等；中藥廢渣制備成動物飼料，而動物在對其中包含的營養物質的消化吸收上具有一定的局限性，因此，將中藥廢渣制備成微生物培養基的方式，可以利用微生物包括各種真菌以及細菌等對上述營養物質的酶解作用從而達到對中藥廢渣中營養物質的充分利用，同時，中藥廢渣制備的微生物培養基對于微生物的培養能夠起到一定的促進作用。現有已知的中藥材有近萬種，而且從這些近萬種的中藥材的廢渣中篩選出具有能夠不加入其他營養物質而直接對微生物進行培養的種類，需要進行大量的研究工作。本發明人經過充分的研究發現，在所有已知的近萬種中藥材中，中藥五味子提取物廢渣中含有大量的營養成分以及多種微量元素，因此，將中藥五味子提取物廢渣和水共同制備而成的培養基，其中不加任何的營養物質，所得培養基仍然可以對微生物進行培養。本發明人經過篩選后經中藥五味子提取物廢渣和水制備而成的培養基與現有其他利用中藥廢渣制備的培養基而言，本發明培養基中未加入任何的營養物質，但仍然能夠對微生物進行培養。另外，由于現有對中藥材的提取エ藝較為單一，從而造成中藥五味子提取物廢渣中所含有的藥效成分相對較多，因此，利用中藥五味子提取物廢渣和水制備而成的培養基對于微生物的培養有一定的促進作用。另外，本發明所述培養基僅采用中藥五味子提取物廢渣和水制成，其相對于現有其他利用中藥廢渣制備的培養基而言，同樣可以減少中藥廢渣當做垃圾處理而造成的對環境的污染問題，同時本發明微生物培養基在制作上由于沒有使用外加的營養物質，而是采用藥渣本身所含有的營養物質來對微生物進行培養，因此本發明微生物培養基的制作成本大幅降低。本發明所述蟲草菌是現有已知的ー類寄生于昆蟲、蜘蛛等節肢動物以及某些真菌上的真菌類群，包括有蛹蟲草菌、冬蟲夏草菌、珊瑚蟲草菌、紅座蟲草菌、蟻窩線蟲草菌等。

本發明所述蛹蟲草菌(Cordyceps militaris)又叫北冬蟲夏草菌,其為冬蟲夏草菌同屬的真菌；蛹蟲草菌是現已報道的蟲草菌種唯一能大量形成蟲草素的菌種；蟲草素是ー種具有免疫調節、抗腫瘤、降低血糖和降血脂等作用的物質。另外，多糖是ー種在蛹蟲草菌中含量為4-10%的具有提高免疫力作用的物質。本發明人經過研究發現，利用本發明方法中的培養基培養蛹蟲草菌，相較于普通的培養基而言，所得蟲草素的含量得到明顯提高；同時，也能夠達到現有較為優良的培養基的培養效果。因此，本發明培養方法可以促進蟲草素大量產生。本發明方法優選采用所述中藥五味子提取物廢渣經粉碎成藥渣粉末后，將所得藥渣粉末與水按1:1-2的重量比例混合并滅菌得培養基。本發明培養基中未采用加入其它任何的營養物質的方式，而是直接將中藥五味子提取物廢渣粉碎成粉末后，將其與水進行混合并滅菌的方法；本發明還可采用直接將中藥五味子提取物廢渣與水混勻的方式，但本發明優選采用將中藥五味子提取物廢渣先粉碎后與水混合的方式，該方式所得培養基對于微生物的培養有更好的促進作用。本發明培養方法中優選采用所述藥渣粉末經20目以上篩篩選過后，篩下藥渣粉末與水按1:1_2的重量比例混合并滅菌得所述中藥廢渣制備的培養基。本發明優選采用將藥渣粉碎后經過篩的方式來除去一些雜質成分，從而所得培養基對微生物的培養有進一歩的促進作用。本發明中可以采用現有的任ー種方式對培養基進行滅菌處理，本發明優選為采用所述滅菌方式為蒸汽滅菌和/或紫外滅菌；更進一歩的，本發明優選為采用蒸汽滅菌和紫外滅菌相結合的方式，更進一歩的優選為先采用蒸汽滅菌后采用紫外滅菌的方式。本發明蒸汽滅菌的溫度可以采用現有常用的溫度，本發明優選采用所述蒸汽滅菌時蒸汽的溫度為110-130°C。在上述溫度區間內，培養基內的營養物質以及藥效成分不會得到較大的損失，尤其是中藥五味子提取物廢渣中藥效成分。更進ー步優選的，本發明優選采用所述蒸汽滅菌時蒸汽的溫度為121°C ;經過發明人的多次研究發現，由于本發明培養基的主要成分為中藥五味子提取物廢渣和水，若蒸汽滅菌時的溫度為121°C，培養基中五味子的藥效成分能夠得到最大程度的保留。
具體實施例方式為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進ー步的詳細說明。對照例1現有PDA培養基，組成及制備如下:馬鈴薯200.0g (去皮煮后取汁)，葡萄糖20.0g,酵母膏5g,蛋白胨5g, KH2PO4 2g, MgSO4 lg, VBl 一片，蒸懼水1000ml,高壓蒸汽滅菌后制成培養基。對照例2現有大米固態培養基，制備如下，稱取一定量大米，加水浸泡50min，115°C滅菌15min,制成培養基。對照例3現有人參提取物廢渣經粉碎過20目篩，過篩粉末與水按照1:1.5 (W/V，lg:lmL)比例混合，高壓蒸汽滅菌(121°C，30min),制成培養基。對照例4將中藥五味子提取物廢渣和水按照1:1-2的重量比例混合并紫外滅菌后制成培養基。對照例5將中藥五味子提取物廢渣先進行粉碎，所得粉末和水按照1:1-2的重量比例混合并紫外滅菌后制成培養基。對照例6將中藥五味子提取物廢渣先進行粉碎，所得粉末經20目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并采用110-130°C下蒸汽滅菌后制成培養基。對照例7將中藥五味子提取物廢渣先進行粉碎，所得粉末經50目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并采用110-130°C下蒸汽滅菌后制成培養基。對照例8將中藥五味子提取物廢渣先進行粉碎，所得粉末經20目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并先采用在110-130°C下蒸汽滅菌，然后紫外滅菌的方式制成培養基。對照例9將中藥五味子提取物廢渣先進行粉碎，所得粉末經20目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并先采用在121°c下蒸汽滅菌，然后紫外滅菌的方式制成
培養基。下面將分別以實施例1和實施例2兩組實驗來說明本發明五味子藥渣培養基對于蛹蟲草菌的培養促進作用。
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實施例1——菌質多糖含量測定將對照例1-9所得培養基分別用于培養蛹蟲草菌和冬蟲夏草菌，每個對照例所得培養基設置五個重復培養蛹蟲草菌和冬蟲夏草菌的實驗，培養方法為采用將蛹蟲草菌種液和冬蟲夏草菌種液分別散布于對照例1-9所得培養基的表面,并將所得培養基于25-27°C下恒溫避光培養10-15天，從第五天開始對各培養基取樣后將所得樣品烘干并進行藥性菌質多糖含量測定，實驗條件如下:采用濃硫酸-苯酚法檢測多糖含量，用分析純葡萄糖繪制標準曲線，得回歸方程為Y=0.0078X-0.061，R2=0.9992 ;每個對照例的五個重復試驗通過上述實驗條件檢測得多糖含量后取平均值，各培養基的檢測結果即多糖含量平均值如表一和表ニ所示。實施例2——菌質蟲草素含量測定將對照例1-9所得培養基分別用于培養蛹蟲草菌，每個對照例所得培養基設置五個重復培養蛹蟲草菌的實驗，培養方法為采用將蛹蟲草菌種液分別散布于對照例1-9所得培養基的表面，并將所得培養基于25_27°C下恒溫避光培養10-15天，從第五天開始對各培養基取樣后將所得樣品烘干并進行藥性菌質蟲草素含量測定實驗，實驗條件如下:采用高效液相色譜法檢測蟲草素含量，色譜條件為Diamonsil C18柱(4.6mm*150mm, 5 u m),以磷酸鹽緩沖液(pH6.5)(取0.01mol/L磷酸ニ氫鈉68.5mL與0.01mol/L磷酸氫ニ鈉31.5mL，混合)-甲醇(17: 3，體積比)為流動相，流速lmL/min，檢測波長260nm，進樣量10 u L，柱溫30°C。首先繪制蟲草素標準曲線，得回歸方程為Y=34473X+34135，R2=0.9988 ;每個對照例的五個重復試驗通過上述實驗條件檢測得蟲草素含量后取平均值，各培養基的檢測結果即蟲草素含量平均值如表三所示。實施例3——本發明培養基對不同菌質的培養程度利用實施例1的實驗條件及實驗方法將對照例4-9分別用于培養蛹蟲草菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌并檢測各培養的微生物的第7天、第9天和第11天的多糖含量，計算平均值，所得結果如表四所示。上述所使用的菌種均可以在市場上購買得到，或者從中國微生物菌種保藏中心得至IJ。表一
權利要求
1.ー種中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，其特征在于步驟如下:將中藥五味子提取物廢渣和水按照1:1-2的重量比例混合并滅菌后得培養基，所得培養基表面接種蛹蟲草菌種液，將接種后的培養基于25-27°C下恒溫避光培養10-15天即可。
2.根據權利要求1所述的中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，其特征在于:所述中藥五味子提取物廢渣經粉碎成藥渣粉末后，將所得藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并滅菌得培養基。
3.根據權利要求2所述的中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，其特征在于:所述藥渣粉末經20目以上篩篩選過后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并滅菌得培養基。
4.根據權利要求1所述的中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，其特征在于:所述滅菌方式為采用蒸汽滅菌和/或紫外滅菌。
5.根據權利要求4所述的中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，其特征在于:所述蒸汽滅菌時蒸汽的溫度為110-130°C。
6.根據權利要求4所述的中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法，其特征在于:所述蒸汽滅菌時蒸汽的溫度為121で。`
全文摘要
本發明公開一種培養蛹蟲草菌的方法，具體涉及一種中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法。所述中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法步驟如下將中藥五味子提取物廢渣和水按照1:1-2的重量比例混合并滅菌后得培養基，所得培養基表面接種蛹蟲草菌種液，將接種后的培養基于25-27℃下恒溫避光培養10-15天即可。本發明中藥廢渣培養蛹蟲草菌的方法可以有效而充分地利用中藥廢渣所含有的營養成分以及有效成分，而且其生產成本較低，中藥廢渣得到有效充分利用的同時，其對環境的污染大幅減小。
文檔編號C05F5/00GK103098650SQ201310064150
公開日2013年5月15日 申請日期2013年2月28日 優先權日2013年2月28日
發明者李英倫, 賀曉玉, 羅杰, 何曉利, 葉剛, 施飛, 房春林 申請人:四川農業大學, 成都乾坤動物藥業有限公司