一株黃綠木霉菌及其應用的制作方法
【專利摘要】一株產生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichoderma?aureoviride)，其特征在于在緩解黃瓜幼苗鹽脅迫促進幼苗生長的應用，具體表現在能夠提高鹽脅迫下黃瓜幼苗葉綠素、可溶性糖以及可溶性蛋白的含量以及降低MDA的含量，菌株的溶磷能力是其解鹽促生機制之一。
【專利說明】一株黃綠木霉菌及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一株黃綠木霉菌及其應用。
【背景技術】
[0002]木霉屬(Trichoderma spp.)真菌,屬雙核菌門、半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、從梗孢科，是一類分布廣泛的生防益菌。根據Bisset系統，木霉可以分為31個種，最常見的木霉種類有哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康寧木霉(Trichoderma koningii)、綠色木霉(Trichoderma viride)、長枝木霉(Trichoderma 1ngibrachiatum)等。木霉菌在白然界分布廣泛，是土壤微生物的重要組成部分，富含有機質的土壤、腐爛的木材、植物根際等均是其良好的棲息場所。近年來人們發現，木霉不僅對植物病原菌具有拮抗效應，還可在植物根部定殖并成為植物共生體，促進植物根系發育及植株生長，提高植物抗非生物脅迫的能力。磷是植物必需三大營養元素之一，能夠促進植物根系發育，提高光合作用速率，增強植物的耐鹽性，但土壤中缺乏有效磷。
[0003]磷是植物生長發育的必需元素之一，是植物體內核酸及多種酶輔酶、ATP等的重要組成成分，并參與光合作用，呼吸作用等多種生理代謝途徑。磷還可以提高植物的抗性，促進植物在逆境中的生長發育。有研究稱在鹽脅迫條件下施加磷能緩解鹽脅迫對萵苣的傷害，促進植物對礦質元素和水分的吸收。但土壤中可供植物直接利用的有效磷含量很少，土壤中的磷多以不溶性的磷酸鹽的形式存在。利用前文分離的具有很高的溶磷能力的黃綠木霉L進行盆栽實驗，全面測定鹽脅迫下黃綠木霉L對黃瓜表型、生理生化以及光合作用的影響，確定了黃綠木霉L的解鹽促生能力。雖然有研究表明木霉具有解鹽促生作用，但是關于木霉解鹽促生的機制研究還很少。因此，若能深入了解木霉菌可能的解鹽促生機制，并以此有目標地篩選多功能木霉菌，將有利于當今綠色農業生產發展，具有重要的理論及實踐意義。由于篩選的黃綠木霉L有很高的溶磷能力以及解鹽促生作用，所以通過水培實驗表明了黃綠木霉L的溶磷作用在解鹽 促生中的作用。由于溶磷微生物種類繁多，而且不同菌株的溶磷機制也不相同，因此利用高效液相測定黃綠木霉發酵液有機酸的種類以初步探究木霉菌溶解難溶性無機磷的機制，這對進一步確定溶磷作用在黃綠木霉L解鹽促生中的作用具有重要意義。

【發明內容】

[0004]一株產生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichodermaaureoviride),其特征在于在緩解鹽脅迫對黃瓜幼苗生長的影響。
[0005]菌株能夠緩解鹽脅迫對黃瓜幼苗生長的影響，提高鹽脅迫下黃瓜幼苗葉綠素、可溶性糖以及可溶性蛋白的含量、降低MDA的含量。
[0006]利用所述的黃綠木霉菌對鹽脅迫下黃瓜的促生作用，其特征在于，包括以下步驟:對基質土滅菌后進行育苗，待種子萌發并長出兩片子葉后，選取生長狀態一致的黃瓜幼苗按下表進行盆栽試驗，20天后稱取新鮮黃瓜葉片0.5g，測定葉片磷含量、葉綠素、MDA、可溶性糖及可溶性蛋白含量。在有無鹽脅迫下接種黃綠木霉L的黃瓜株高、葉片的葉綠素、MDA、可溶性糖、可溶性蛋白含量均比對照顯著提高，葉片磷含量比未接菌的對照組分別提高了23%和 35.7%o
【權利要求】
1.一株產生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichodermaaureoviride),其特征在于在緩解鹽脅迫對黃瓜幼苗生長的影響。
2.權利要求1所述的一株產生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichoderma aureoviride)其特征在于,菌株能緩解鹽脅迫對黃瓜幼苗生長的影響,提高鹽脅迫下黃瓜幼苗葉綠素、可溶性糖以及可溶性蛋白的含量，并降低MDA的含量，溶磷作用是其解鹽促生機制之一。
3.權利要求1所述的一株產生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichoderma aureoviride)其特征在于，研究黃綠木霉L對黃瓜葉片磷含量的影響時,待種子萌發并長出兩片子葉后，選取生長狀態一致的黃瓜幼苗按下表進行盆栽試驗，20天后稱取新鮮黃瓜葉片0.5g，測定葉片磷含量，在有無鹽脅迫下接種黃綠木霉L的黃瓜葉片磷含量均比未接菌的對照組顯著提高，增幅分別為23%和35.7%。
4.權利要求1所述的一株產生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichoderma aureoviride)其特征在于,研究溶磷作用對緩解鹽脅迫下黃瓜幼苗的生長機制時，是將種子萌發并長出兩片子葉后，選取生長狀態一致的黃瓜幼苗進行水培試驗，設置添加木霉發酵液和磷酸氫鈣(CF+P)、只添加磷酸氫鈣(Non-CF+P)、只添加木霉菌發酵液(CF-P)以及只添加無菌水(Non-CF-P)四個處理，每個處理水培液總體積為80mL，每個處理5個重復4株苗，室溫培養，期間定期添加無菌水以保證水培液總體積恒定，黃瓜培養7d后收獲、拍照，測定幼苗植株莖長、根長、莖與葉鮮重、根鮮重。
5.權利要求1所述的一株產生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichoderma aureoviride)其特征在于,木霉菌的分離包括以下步驟: 1)稱取根際土壤lg，量取90mL無菌水，加入含有玻璃珠無菌錐形瓶中，振蕩混勻30min ； 2)取土壤懸液進行梯度稀釋后，吸取0.2mL于含有抗生素的PDA平板上； 3)28°C培養4~5d。挑取平板上的木霉菌菌落進行劃線分離，直至分離出單菌落，并于PDA斜面保存。
【文檔編號】A01P21/00GK103484379SQ201310358858
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年8月8日 優先權日:2013年8月8日
【發明者】趙蕾, 竺曉平, 張亞慶 申請人:趙蕾