木霉t11-w對根結線蟲卵的寄生及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了T11-W菌株在農(nóng)業(yè)上的應用，具體的是防治土傳的線蟲病害，特別是蔬菜的根結線蟲病害。本制劑能夠有效防治番茄根結線蟲病，無論是拌土處理還是灌根處理，在每盆有效孢子量為2×107時，防效均在77%以上。而灌根處理，在每盆有效孢子量為2×108時，防效高達90.37%。
【專利說明】木霉Tl 1-W對根結線蟲卵的寄生及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術領域】，涉及木霉Tll-W對根結線蟲卵的寄生及其應用。
【背景技術】
[0002]植物寄生線蟲是一類重要的植物病原物，其危害超過細菌和病毒，僅次于真菌病害。據(jù)估計全球每年由于植物寄生線蟲所造成的損失達1250億美元，這一損失的70%是由根結線蟲spp.)所造成。根結線蟲寄主范圍廣，繁殖力強,侵染作物后可造成作物大幅減產(chǎn)，甚至絕產(chǎn)，已成為制約我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的突出問題之一。因此，根結線蟲的防治日益受到人們的重視。但由于以往多使用高毒化學農(nóng)藥防治植物線蟲，給環(huán)境、人類健康帶來了很多負面影響，致使人們將防治重點轉(zhuǎn)向了生物防治。在植物線蟲生防研究中，由于寄生性線蟲真菌是一類重要的植物線蟲抑制因子，所以成為了許多線蟲生防專家的研究對象。已報道的寄生植物線蟲真菌主要種類有淡紫擬青iPaecilomyces JiJacizw1S)、厚垣抱普可尼亞菌(Pochonia、洛斯里被毛HHirsuto I larhossi limsi s')和明尼蘇達被毛抱(/Z minneso tens is )(李玉中，李本祥，等.寄生線蟲真菌黑葡萄穗霉的分離與鑒定[J].廣東農(nóng)業(yè)科學，2011，16:59-60)。而木霉(Trichoderma spp.)作為線蟲寄生性真菌的報道鮮見。木霉是土壤中常見的生防菌,哈茨木霉菌(Trichoderma harzia/?)是木霉菌中現(xiàn)應用最為廣泛的一種,可防治立枯病、粹倒病、根腐病等真菌性病害。雖然已有報道說哈茨木霉Snef85的次級代謝產(chǎn)物對根結線蟲幼蟲有毒殺做用(段玉璽，靳瑩瑩，王勝君，等.生防菌株Snef85的鑒定及其發(fā)酵液對不同種類線蟲的毒力[J].植物保護學報，2008，35 (2):132-136)，但哈茨木霉對蔬菜根結線蟲卵的寄生作用未見報道。因木霉具有腐生習性，很難區(qū)別其對根結線蟲卵是寄生還是腐生作用，本發(fā)明采用生物測定和染色相結合的方法確定Tll-W對根結線蟲卵具有寄生性。
[0003]根結線蟲卵寄生菌Tll-W是`從黃瓜根結線蟲卵上分離獲得，菌種保藏號CGMCCN0.7938,經(jīng)鑒定是哈茨木霉(rricAoofe/ma harzianum')0 Tll-W是一種具有應用潛力的線蟲生防真菌，不但能夠寄生根結線蟲卵，消解卵殼，還能夠定殖植物根系并能促進植物根系的生長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種對根結線蟲卵有高效寄生率的菌株及其應用。
[0005]本發(fā)明中的根結線蟲卵寄生菌Tll-W的分離及鑒定
(I)菌株采用雙抗PDA平板篩選方法，從黃瓜根結線蟲病根分離所得。
[0006](2)菌株鑒定:采用ITS序列比對的方法將該菌株鑒定為哈茨木霉(斤icAotferaaharzianum),命名為T11-W,該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏，其保藏號為CGMCC N0.7938，保藏時間為2013年7月19日，保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號。
[0007]2 Tll-W對番茄根結線蟲卵寄生研究本發(fā)明采用生物測定和染色相結合的方法研究Tll-W對根結線蟲卵的寄生性。結果見表1、圖1和圖2。
表1木霉菌對南方根結線蟲卵寄生及孵化抑制情況調(diào)查結果
校正寄生率、校正抑制孵化率％
丁11-W?哈夜木霉.73.4691A6
IIK-2 哈茨木g.25J13SJ4I
空白對照一i—j
[0008]由表1可知，木霉菌Tll-W處理根結線蟲卵10天后的校正寄生率為73.46%，孵化抑制率為91.16%。表明，Tll-W是根結線蟲卵的高效寄生菌。
[0009]由附圖1和附圖2可知，木霉菌Tll-W對根結線蟲卵有寄生性。因為附圖1中的卵是健康的卵(健康的卵不著色)，Tll-W菌絲剛開始接觸到健康的卵；附圖2中的卵是被Tll-W菌絲寄生并致死的卵。
[0010]3.木霉菌Tll-W分生孢子的培養(yǎng)方法
將木霉菌株Tll-W接種于PDA平板，置于28°C下培養(yǎng)2-3天。轉(zhuǎn)接PDA液體培養(yǎng)基，置于搖床上28°C振蕩培養(yǎng)3-4天，然后將液體種子接入麩皮和稻殼組成的固體基培養(yǎng)5-7天。自然風干，得Tll-W固體培養(yǎng)物。過100目篩收集分生孢子粉。
[0011]4.Tll-W制劑研究與應用
本發(fā)明Tll-W菌株在農(nóng)業(yè)`上的應用是防治土傳的線蟲病害，特別是蔬菜的根結線蟲病害。這決定了該菌劑的施藥方式為澆施、撒施或穴施。綜合考慮多方面因素選擇以Tll-W分生孢子粉為有效成分配制一種可濕性粉劑，組成如下:
哈茨木霉Tll-W分生孢子粉10~20重量份
娃藻土50~69重量份
木質(zhì)素磺酸鈉3~5重量份
吐溫803~5重量份
葉酸0.5~I重量份。
[0012]上述組分中硅藻土為載體，吐溫80為潤濕劑，木質(zhì)素磺酸鈉為分散劑，葉酸為紫外保護劑。
[0013]上述可濕性粉劑的應用效果如下:
(I)Tll-W菌劑對番茄種子萌發(fā)的影響，結果見表2。
表2 Tll-W菌劑對番茄種子蔭發(fā)的影響
孢子重根長cm芽長cm
Tll-W 菌剤:2 億.g.2.54土MSl.2.13土H.水對照01.67 土 CL IOb 100 土
癥藻土對照 + 0 + L54± 0.20b 1J2±.CU2i|
[0014]由表2可知，Tll-W對番茄種子的萌發(fā)有促進作用，對根的促生作用明顯比對照高，且差異顯著。
[0015](2)溫室生物活性測定
分別采用拌土處理和灌根處理法進行溫室盆栽試驗，結果見表3。__表3本制劑對番茄根結線蟲的防治效果—
不同處理施加有效孢處理后60
【權利要求】
1.一種對根結線蟲卵有高效寄生率的菌株，經(jīng)鑒定為哈H霉(Jrichochnmharzianum),命名為T11-W,該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC N0.7938，保藏時間為2013年7月19日，保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號。
2.如權利要求1所述的哈茨木霉Tll-W菌的應用，其特征在于用于防治土傳的線蟲病害，特別是蔬菜的根結線蟲病害。
3.如權利要求2所述的哈茨木霉Tll-W菌的應用，其特征在于所說的用于防治土傳的線蟲病害的哈茨木霉Tll-W菌的劑型為其分生孢子的可濕性粉劑，具體組成如下: 哈茨木霉Tll-W分生孢子粉10~20重量份 娃藻土50~69重量份 木質(zhì)素磺酸鈉3~5重量份吐溫803~5重量份 葉酸0.5~I重量份。
4.如權利要求3所述的哈茨木霉Tll-W菌的應用，其特征在于所說的哈茨木霉Tll-W分生孢子粉的制備方法為:將木霉菌株Tll-W接種于PDA平板，置28°C下培養(yǎng)2-3天；轉(zhuǎn)接PDA液體培養(yǎng)基，置于搖床上28°C下振蕩培養(yǎng)3-4天；然后將液體種子接入麩皮和稻殼組成的固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)5-7天；自然風干，得Tll-W固體培養(yǎng)物；過100目篩收集分生孢子粉。
【文檔編號】A01N63/04GK103484380SQ201310374929
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年8月26日 優(yōu)先權日:2013年8月26日
【發(fā)明者】王貽蓮, 楊合同, 李紀順, 李哲, 陳凱, 魏艷麗, 吳曉青 申請人:山東省科學院中日友好生物技術研究中心