一種紅翎菜外植體的消毒方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種紅翎菜外植體的消毒方法，包括如下步驟：以紅翎菜的四分孢子體作為外植體，將外植體沖洗干凈后在添加1-5μg/L的環(huán)丙沙星和50-90μg/L土霉素的VS培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，然后用體積濃度為0.1-0.5%的次氯酸鈉溶液消毒2-5min，然后用滅菌海水沖洗數(shù)次。經(jīng)本發(fā)明方法，可以獲得80%的無菌外植體，為紅翎菜組織培養(yǎng)提供充足的無菌外植體。
【專利說明】一種紅翎菜外植體的消毒方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術領域】，具體涉及一種紅翎菜外植體的消毒方法。
【背景技術】
[0002]紅翎菜是紅藻門、杉藻目、紅翎菜科、紅翎菜屬中的一種大型經(jīng)濟海藻，是獲得卡拉膠的主要藻源。卡拉膠廣泛應用于食品工業(yè)、化學工業(yè)及生化、醫(yī)學研究等領域中，卡拉膠具有形成親水膠體、凝膠、增稠、乳化、威膜、穩(wěn)定分散等特性，因而被廣泛應用于乳制品、冰淇淋、果汁飲料、面包、水凝膠(水果凍)、肉食品、調(diào)味品、罐頭食品等方面，可調(diào)配成果凍粉、軟糖粉、布丁粉、愛玉粉、西式火腿調(diào)配粉等，其獨特性能是不能被其它樹脂所代替，使得卡拉膠工業(yè)迅速發(fā)展，現(xiàn)在世界卡拉膠的年總產(chǎn)量已遠遠超過瓊脂的產(chǎn)量。
[0003]而紅翎菜主要以野生資源為主，人工栽培技術即為不成熟，限制人工栽培的主要因素是不能保證充足而穩(wěn)定的種質(zhì)資源。組織培養(yǎng)技術植物組織培養(yǎng)技術可以快速繁殖，周年生產(chǎn)，不受季節(jié)限制；種苗整齊度高，可以進行新品種培育，所需材料較少，繁殖系數(shù)大，可以在一年內(nèi)由一個莖段培養(yǎng)出數(shù)百萬種苗。海洋植物的組織培養(yǎng)技術比較落后，究其主要原因是無法獲得大量無菌且可行的外植體，海藻主要是由細胞組成，雖然大型海藻的結(jié)構相對復雜，但是消毒劑的種類和劑量對外植體的影響非常顯著，劑量高容易殺死外植體，而劑量低又不容易殺死進入到海藻細胞內(nèi)部的細菌或真菌。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種紅翎菜外植體的消毒方法，為組織培養(yǎng)技術提供穩(wěn)定而充足的外植體來源。
[0005]為了達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案:
一種紅翎菜外植體的消毒方法，包括如下步驟:以紅翎菜的四分孢子體作為外植體，將外植體沖洗干凈后在添加1-5 μ g/L的環(huán)丙沙星和50-90 μ g/L 土霉素的VS培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，然后用體積濃度為0.1-0.5%的次氯酸鈉溶液消毒2-5min，然后用滅菌海水沖洗數(shù)次。
[0006]本發(fā)明還提供一種鑒定紅翎菜外植體無菌性的方法，以上述消毒方法獲得的外植體作為實驗對象，在實驗對象的頂端部位切取長度為2-5mm的切段，將切段接種于無菌檢測培養(yǎng)基中培養(yǎng)I周檢測無菌性；所述的無菌檢測培養(yǎng)基的配方為，IL VS培養(yǎng)基中添加4g瓊脂、IOg葡萄糖和IOg細菌培養(yǎng)用蛋白胨。
[0007]優(yōu)選的，所述的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為I μ g/L,50 μ g/L,次氯酸鈉的濃度為0.1%、消毒時間為2min。
[0008]優(yōu)選的，所述的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為5 μ g/L、90 μ g/L,次氯酸鈉的濃度為0.5%,消毒時間為5min。
[0009]優(yōu)選的，所述的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為2 μ g/L、60 μ g/L,次氯酸鈉的濃度為0.2%,消毒時間為3min。
[0010]優(yōu)選的，所述`的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為3 μ g/L,70 μ g/L,次氯酸鈉的濃度為0.3%,消毒時間為4min。
[0011]本發(fā)明的有益效果是:
在培養(yǎng)液中添加環(huán)丙沙星和土霉素，培養(yǎng)外植體的24h，然后次氯酸鈉溶液消毒外植體，既可以殺死外植體細胞表面的細菌和真菌，也可以殺死外植體細胞內(nèi)的細菌和真菌，并且可以維持外植體的可用性，通過本發(fā)明方法，可以獲得高達80%的無菌外植體。
【具體實施方式】
[0012]以下通過實施例進一步闡述本發(fā)明的有益效果:
實施例1:
一種紅翎菜外植體的消毒方法，包括如下步驟:以紅翎菜的四分孢子體作為外植體，將外植體沖洗干凈后在添加I μ g/L的環(huán)丙沙星和50 μ g/L 土霉素的VS培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，然后用體積濃度為0.1%的次氯酸鈉溶液消毒2min，然后用滅菌海水沖洗數(shù)次。在上述消毒方法獲得的外植體的頂端部位切取長度為2-5mm的切段，將切段接種于無菌檢測培養(yǎng)基中培養(yǎng)I周檢測無菌性；所述的無菌檢測培養(yǎng)基的配方為，IL VS培養(yǎng)基中添加4g瓊脂、IOg葡萄糖和IOg細菌培養(yǎng)用蛋白胨。每個切段單獨接種于一個培養(yǎng)皿中，共接種100塊，其中有50塊被污染，可以獲得50%的無菌外植體。
[0013]實施例2:
一種紅翎菜外植體的消毒方法，包括如下步驟:以紅翎菜的四分孢子體作為外植體，將外植體沖洗干凈后在添加5 μ g/L的環(huán)丙沙星和90 μ g/L 土霉素的VS培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，然后用體積濃度為0.5%的次氯酸鈉溶液消毒5min，然后用滅菌海水沖洗數(shù)次。在上述消毒方法獲得的外植體的頂端部位切取長度為2-5mm的切段，將切段接種于無菌檢測培養(yǎng)基中培養(yǎng)I周檢測無菌性；所述的無菌檢測培養(yǎng)基的配方為，IL VS培養(yǎng)基中添加4g瓊脂、IOg葡萄糖和IOg細菌培養(yǎng)用蛋白胨。每個切段單獨接種于一個培養(yǎng)皿中，共接種100塊，其中有8塊被污染，22塊變黑死亡，可以獲得70%的無菌外植體。
[0014]實施例3:
一種紅翎菜外植體的消毒方法，包括如下步驟:以紅翎菜的四分孢子體作為外植體，將外植體沖洗干凈后在添加2 μ g/L的環(huán)丙沙星和60 μ g/L 土霉素的VS培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，然后用體積濃度為0.2%的次氯酸鈉溶液消毒3min，然后用滅菌海水沖洗數(shù)次。在上述消毒方法獲得的外植體的頂端部位切取長度為2-5mm的切段，將切段接種于無菌檢測培養(yǎng)基中培養(yǎng)I周檢測無菌性；所述的無菌檢測培養(yǎng)基的配方為，IL VS培養(yǎng)基中添加4g瓊脂、IOg葡萄糖和IOg細菌培養(yǎng)用蛋白胨。每個切段單獨接種于一個培養(yǎng)皿中，共接種100塊，其中有12塊被污染，10塊變黑死亡，可以獲得78%的無菌外植體。
[0015]實施例4:
一種紅翎菜外植體的消毒方法，包括如下步驟:以紅翎菜的四分孢子體作為外植體，將外植體沖洗干凈后在添加3 μ g/L的環(huán)丙沙星和70 μ g/L 土霉素的VS培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，然后用體積濃度為0.3%的次氯酸鈉溶液消毒4min，然后用滅菌海水沖洗數(shù)次。在上述消毒方法獲得的外植體的頂端部位切取長度為2-5mm的切段，將切段接種于無菌檢測培養(yǎng)基中培養(yǎng)I周檢測無菌性；所述的無菌檢測培養(yǎng)基的配方為，IL VS培養(yǎng)基中添加4g瓊脂、IOg葡萄糖和IOg細菌培養(yǎng)用蛋白胨。每個切段單獨接種于一個培養(yǎng)皿中，共接種100塊，其中有8塊被污染，12塊變黑死亡，可以獲得80%的無菌外植體。
[0016]上述實例只是為說明本發(fā)明的技術構思以及技術特點，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應該涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。`
【權利要求】
1.一種紅翎菜外植體的消毒方法，其特征在于，包括如下步驟:以紅翎菜的四分孢子體作為外植體，將外植體沖洗干凈后在添加1-5 μ g/L的環(huán)丙沙星和50-90 μ g/L 土霉素的VS培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h，然后用體積濃度為0.1-0.5%的次氯酸鈉溶液消毒2-5min，然后用滅菌海水沖洗數(shù)次。
2.一種鑒定紅翎菜外植體無菌性的方法，其特征在于，以按照權利要求1所述的消毒方法獲得的外植體作為實驗對象，在實驗對象的頂端部位切取長度為2-5mm的切段，將切段接種于無菌檢測培養(yǎng)基中培養(yǎng)I周檢測無菌性；所述的無菌檢測培養(yǎng)基的配方為，IL VS培養(yǎng)基中添加4g瓊脂、IOg葡萄糖和IOg細菌培養(yǎng)用蛋白胨。
3.根據(jù)權利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為I μ g/L、50l.! g/L，次氯酸鈉的濃度為0.1%、消毒時間為2min。
4.根據(jù)權利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為5 μ g/L、90 μ g/L,次氯酸鈉的濃度為0.5%，消毒時間為5min。
5.根據(jù)權利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為2 μ g/L、60 μ g/L,次氯酸鈉的濃度為0.2%，消毒時間為3min。
6.根據(jù)權利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的環(huán)丙沙星和土霉素的濃度分別為3 μ g/L,70 μ g/L,次氯酸鈉的濃度為0.3%，消毒時間為4min。
【文檔編號】A01H4/00GK103718956SQ201310584765
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權日:2013年11月20日
【發(fā)明者】張明 申請人:青島佰眾化工技術有限公司