植物組織培養(yǎng)時的新類型外植體及其滅菌方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種植物組織培養(yǎng)時的新類型外植體，以植物生長季的嫩梢為外植體。所述嫩梢為植物生長季自植物莖頂偏下5～10cm長的一段新梢或枝條。本發(fā)明還公開了一種嫩梢外植體的滅菌方法，先利用大蒜配置的滅菌水溶液；再將嫩梢浸入溶液中滅菌。本發(fā)明以生長季的嫩梢作為外植體進行組織培養(yǎng)，拓展了植物組織培養(yǎng)外植體的使用范圍；拓展了自然條件下外植體的接種時間；與傳統(tǒng)的葉芽和莖段組織培養(yǎng)相比，生長季的嫩梢結(jié)合大蒜水溶液滅菌，縮短了組織培養(yǎng)的時間，降低了組織培養(yǎng)的成本，操作更加簡單。
【專利說明】植物組織培養(yǎng)時的新類型外植體及其滅菌方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體地說，涉及植物組織培養(yǎng)過程中外植體的選擇。
【背景技術(shù)】
[0002]能被誘發(fā)產(chǎn)生無性增殖系的器官或組織切段稱作外植體。目前科學(xué)研究和生產(chǎn)實踐中所使用的外植體有葉芽、著生葉芽的莖段、根段、葉片、原生質(zhì)體、胚、胚乳、花藥、子房等。
[0003]植物外植體的選擇，需要根據(jù)生長季、植物恰當(dāng)局部位置的選擇進行。現(xiàn)有技術(shù)中，本領(lǐng)域技術(shù)人員大多選用休眠期的枝條作為外植體，而不選用生長季的新梢。因為現(xiàn)有技術(shù)的滅菌溶劑對植物嫩梢損害較大，嫩梢無法存活。因此本領(lǐng)域技術(shù)人員不會選用嫩梢做外植體。此處，所述嫩梢為植物生長季自植物莖頂偏下5~IOcm長的一段新梢或枝條，因此作為新梢前端的部分的嫩梢，如果需要用作外植體，需要選擇溫和的滅菌溶劑。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明以生長季的嫩梢為外植體，經(jīng)過適宜的滅菌劑處理，用于植物的組織培養(yǎng)。為此本發(fā)明提供了一種適合本發(fā)明的外植體——植物嫩梢滅菌的溶液,植物嫩梢經(jīng)過適宜的滅菌劑的處理后，可以正常地生長發(fā)育，實現(xiàn)持續(xù)繁殖，能夠滿足植物組織培養(yǎng)的需要，實現(xiàn)植物組織培養(yǎng)的目的。本發(fā)明擴大外植體的使用范圍，增加外植體的種類；延長自然條件下外植體的接種時間，提高植物組織培養(yǎng)的效率和成功率；降低植物組織培養(yǎng)的成本；使植物組織培養(yǎng)的操作進一步簡化。
[0005]為了達到上述目的，本發(fā)明提供一種植物組織培養(yǎng)時的新類型外植體，以植物生長季的嫩梢為外植體。
[0006]此處，所述嫩梢為植物生長季自植物莖頂偏下5~IOcm長的一段新梢或枝條；優(yōu)選為2~3cm長的一段新梢或枝條。
[0007]植物嫩梢，由于抗外界環(huán)境干擾的能力較差，現(xiàn)有技術(shù)的滅菌溶液對其傷害較大，因此限制了嫩梢作為外植體使用的可能。為此，本發(fā)明提供了一種新型的滅菌溶液，并提供了一種滅菌方法，包括如下步驟:
[0008]1、利用大蒜配置的滅菌水溶液；
[0009]2、將嫩梢浸入溶液中滅菌。
[0010]步驟I中的溶液配置方法多樣，如大蒜烘干、粉碎、添水配置的方法，再比如大蒜切碎、水中浸泡的方法。本發(fā)明提供的一種優(yōu)選方式:以去皮大蒜搗成泥，與無菌單蒸水按重量體積比配置成I~9:1的溶液。
[0011]本發(fā)明經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，處于生長期的植物嫩梢經(jīng)過適宜的滅菌劑的處理，也可以作為植物組織培養(yǎng)的外植體。生長季的嫩梢正處于旺盛的生長發(fā)育階段，如果能克服此期取材容易污染的問題，就可以作為外植體進行組織培養(yǎng)。本發(fā)明拓展了植物組織培養(yǎng)外植體的使用范圍；拓展了自然條件下外植體的接種時間；與傳統(tǒng)的葉芽和莖段組織培養(yǎng)相t匕，生長季的嫩梢結(jié)合大蒜水溶液滅菌，縮短了組織培養(yǎng)的時間，降低了組織培養(yǎng)的成本，操作更加簡單。具體優(yōu)點如下:
[0012]1.采用生長季莖上最前端2~3cm長的嫩梢作為外植體，用1:1(W/V)大蒜水溶液(大蒜:無菌單蒸水為1:1，去皮大蒜搗成衆(zhòng)加無菌單蒸水?dāng)嚢?min,然后室溫下放置30min后，備用)浸泡30min進行滅菌處理。
[0013]2.拓展了植物組織培養(yǎng)外植體的使用范圍,將生長季的嫩梢作為一種外植體,付諸使用，并獲得成功。
[0014]3.拓展了自然條件下外植體的接種時間，使以往生長季，尤其是夏季難以滅菌的困難得到克服。
[0015]4.與傳統(tǒng)的葉芽和莖段組織培養(yǎng)相比，生長季的嫩梢結(jié)合大蒜水溶液滅菌，縮短了組織培養(yǎng)的時間(因為所取得嫩梢在田間已經(jīng)進行了一段時間的生長)，組織培養(yǎng)的成本降低(縮短了培養(yǎng)時間、滅菌成本降低)，操作更加簡單(可以將準(zhǔn)備滅菌的外植體直接浸泡在大蒜水溶液中，而不需要其它前處理，如用水沖洗、去鱗片等)。
【具體實施方式】
[0016]本發(fā)明在生長季取植物的嫩梢，將其浸入到大蒜水溶液中滅菌，接種到適宜的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，一段時間以后觀察、統(tǒng)計和分析嫩梢的無菌情況、生長發(fā)育情況等。植物嫩梢，由于抗外界環(huán)境干擾的能力較差，現(xiàn)有技術(shù)的滅菌溶液對其傷害較大，因此限制了嫩梢作為外植體使用的可能。為此，本發(fā)明提供了一種新型的滅菌溶液——利用大蒜配置的水溶液。具體以去皮大蒜搗成泥，與無菌單蒸水按重量體積比配置成I~9:1的溶液。該滅菌溶液溫和，適用于植物嫩梢作為外植體的滅菌。此處，所述嫩梢為植物生長季自植物莖頂偏下5~IOcm長的一段新梢或枝條。具體工藝過程如下:
[0017]1.在生長季取甜櫻桃、桃、月季的新梢。
[0018]2.將新梢浸入到1:1 (W/V)大蒜水溶液(大蒜:無菌單蒸水為1:1，去皮大蒜搗成漿加無菌單蒸水?dāng)嚢?min，然后室溫下放置30min后，備用)浸泡30min，取出后用無菌單蒸水沖洗3次,最后用無菌濾紙吸干水分。
[0019]3.接種到適宜的初代培養(yǎng)基(培養(yǎng)基配方為:MS+6-BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+瓊脂7g/L+蔗糖30g/L，pH5.8)上進行培養(yǎng)。
[0020]4.觀察并統(tǒng)計葉芽的萌芽率、嫩梢的平均無菌率(滅菌率可達100%)。
[0021]5.在初代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，繼續(xù)進行繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及馴化移栽等。
[0022]嫩梢作為外植體，由于抗外界環(huán)境干擾的能力較差，因此，現(xiàn)有技術(shù)的滅菌溶液對其傷害較大，因此限制了嫩梢作為外植體使用的可能。為此，本發(fā)明提供了一種新型的滅菌溶液——利用大蒜配置的水溶液，不傷害外植體。具體以去皮大蒜搗成泥，與無菌單蒸水按重量體積比配置成I~9:1的溶液。該滅菌溶液溫和，適用于植物嫩梢作為外植體的滅菌。此處，所述嫩梢為植物生長季自植物莖頂偏下5~IOcm長的一段新梢或枝條。
[0023]以上所述， 僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種植物組織培養(yǎng)時的新類型外植體，其特征在于，以植物生長季的嫩梢為外植體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述植物組織培養(yǎng)時的新類型外植體，其特征在于，所述嫩梢為植物生長季自植物莖頂偏下5~IOcm長的一段新梢或枝條。
3.—種上述權(quán)利要求所述植物組織培養(yǎng)時外植體的滅菌方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、利用大蒜配置的滅菌水溶液； 52、將嫩梢浸入溶液中滅菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述植物組織培養(yǎng)時外植體的滅菌方法，其特征在于，步驟SI的具體方法為:去皮大蒜搗成泥，與無菌單蒸水按重量體積比配置成I~9:1的溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述植物組織培養(yǎng)時外植體的滅菌方法，其特征在于，步驟S2所述嫩梢為植物生長季自植 物莖頂偏下5~IOcm長的一段新梢或枝條。
【文檔編號】A01H4/00GK103907534SQ201410136107
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】侯義龍, 于亞軍, 張立娟, 倪天澤 申請人:大連大學(xué)