一種大黃魚植物乳桿菌飼料配方及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種大黃魚植物乳桿菌飼料配方及其制備方法，配方：植物乳桿菌1×106cfu/kg、菌體0.1g/kg、牛奶9.999g/kg、魚粉540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、蝦殼粉64g/kg、脫脂豆粕94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg組成的喂養飼料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分組成的基礎飼料；按照質量百分比，喂養飼料為25.2％，粗蛋白47.3％、粗脂8.9％、灰分10.2％、水分8.4％。制備方法為：分離培養、收集植物乳桿菌、混合脫脂牛奶、添加基礎飼料、混合配制。本發明促進了大黃魚的體重增長率、攝食率、大黃魚非特異性免疫性能的補體活性、溶菌酶活性、吞噬活性和頭腎白細胞呼吸性，并增強對病菌抵抗力，有利于大黃魚養殖業發展。
【專利說明】一種大黃魚植物乳桿菌飼料配方及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于大黃魚養殖【技術領域】，尤其涉及一種大黃魚植物乳桿菌飼料配方及其制備方法。
【背景技術】
[0002]大黃魚是我國獨有的、經濟價值很高的魚類，是我國海水魚類養殖中最為名貴的品種之一。近年來，大黃魚的養殖規模由于人工育苗的成功而迅速擴大，由于過度捕撈，自然資源日益枯竭。人工育苗取得成功之后，大黃魚的網箱規模迅速擴大。網箱養殖的不合理規劃導致養殖面積和放養密度急劇加大，使得養殖水域的承載能力和水體交換自凈能力遭到嚴重危害，魚類病害的種類也隨之增多，極大地制約著大黃魚養殖業的健康發展。隨著養殖面積和放養密度急劇加大，養殖環境遭到破壞，病害的種類也隨之增多，發病次數日趨頻繁，危害性迅速增大，面臨著許多與營養飼料有關的問題，極大制約著大黃魚養殖業的健康發展。例如，大黃魚養殖常發生與病毒和細菌相關的疫情，造成嚴重的經濟損失。同時由于當前使用的餌料系數不達標，轉化為魚類蛋白的概率低，導致餌料大量流失，對水質造成嚴重污染。尤其是部分養殖戶違規使用禁用魚藥和劣質飼料，造成藥物殘留和水質大面積惡化，導致大黃魚生長速度減緩、疾病頻發，成活率下降，并且大黃魚品質下降，食品安全沒有保障，魚的健康和其免疫力的提高對養殖業而言就尤為重要。益生菌是一類通過改善宿主動物腸道微生態而對其產生有益影響的微生物飼料添加成分，對宿主動物健康存在有益影響的微生物。益生菌類產品對動物大都具有提高動物生產性能，增進健康，改善腸道微生態，提聞免疫力等功效。
[0003]目前，傳統的大黃魚飼料存在生長速度緩慢，生病率高，免疫力和品質差，成活率低，食品安全沒有保障的問題。

【發明內容】

[0004]本發明實施例的目的在于提供一種大黃魚植物乳桿菌飼料配方及其制備方法，旨在解決目前，傳統的大黃魚飼料存在生長速度緩慢，生病率高，免疫力和品質差，成活率低，食品安全沒有保障的問題。
[0005]本發明實施例是這樣實現的，一種大黃魚植物乳桿菌飼料配方，該大黃魚植物乳桿菌飼料配方包括:植物乳桿菌I X 106cfu/kg、菌體0.lg/kg、牛奶9.999g/kg、魚粉540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg組成的喂養飼料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分組成的基礎詞料；
[0006]按照質量百分比，喂養飼料為25.2%，粗蛋白47.3 %、粗脂8.9%、灰分10.2 %、水分 8.4%。
[0007]進一步，該大黃魚植物乳桿菌飼料配方為:植物乳桿菌I X 108cfu/kg、菌體0.1g/kg、牛奶 9.99g/kg、魚粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、魚膏 37g/kg、面筋 20g/kg、魚油 20g/kg、蟲下殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂 8.9%、灰分 10.2%、水分 8.4%。
[0008]進一步，該大黃魚植物乳桿菌飼料配方為:植物乳桿菌lX10lclcfu/kg、菌體IOg/kg、魚粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、魚膏 37g/kg、面筋 20g/kg、魚油 20g/kg、奸殼粉 64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分 8.4%。
[0009]本發明實施例的另一目的在于提供一種大黃魚植物乳桿菌飼料的制備方法，該大黃魚植物乳桿菌飼料的制備方法包括以下步驟:
[0010]從韓國腌白菜分離得到植物乳桿菌，37°C培養于含MRS肉湯的無菌燒瓶中，24小時后，15400Xg離心5分鐘，收集植物乳桿菌混合物；
[0011]按1:4比例與脫脂牛奶混合，冷凍干燥，通過MRS瓊脂平板記數測定植物乳桿菌混合物的生活力；
[0012]按照植物乳桿菌I X 106cfu/kg、菌體 0.001g/kg、牛奶 9.999g/kg、魚粉 540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg配置大黃魚喂養飼料；
[0013]加入成分為47.3%粗蛋白、8.9%粗脂、10.2%灰分和8.4%水分的基礎飼料，混合制成大黃魚植物乳桿菌飼料。
[0014]進一步，該大黃魚植物乳桿菌飼料一天喂養大黃魚兩次。
[0015]本發明提供的大黃魚植物乳桿菌飼料配方及其制備方法，采用含量為Kf-KTcfu/kg植物乳桿菌的配方飼料，促進了大黃魚的體重增長率和攝食率，并增強對病菌Streptococcussp的抵抗力,促進了大黃魚非特異性免疫性能的補體活性、溶菌酶活性、吞噬活性和頭腎白細胞呼吸性。本發明有利于大黃魚的養殖業發展。大黃魚的植物乳桿菌飼料的制備方法簡單，大黃魚生長速度快，免疫力強，生病和死亡率低，食用安全性好。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1是本發明實施例提供的大黃魚植物乳桿菌飼料的制備方法流程圖；
[0017]圖2是本發明實施例提供的大黃魚喂食含O、I X 104、I X IO6,1 X IO8和I X IO10Cfu/kg植物乳桿菌飼料1-4周的體重增長率示意圖；
[0018]圖3是本發明實施例提供的大黃魚喂食含O、I X 104、I X 106、I X IO8和I X IO10Cfu/kg植物乳桿菌飼料1-4周的喂食效率示意圖；
[0019]圖4是本發明實施例提供的大黃魚喂食表一中詞料四周后PCR鑒定不意圖；
[0020]圖5是本發明實施例提供的大黃魚喂食含植物乳桿菌飼料1-4周的補體活性(ACH50)示意圖；
[0021]圖6是本發明實施例提供的大黃魚喂食含植物乳桿菌、飼料1-4周的頭腎白細胞爆發呼吸力示意圖；
[0022]圖7是本發明實施例提供的大黃魚喂食含植物乳桿菌飼料1-4周的頭腎白細胞吞噬活性示意圖；
[0023]圖8是本發明實施例提供的黃魚喂食含植物乳桿菌飼料1-4周的血清溶菌酶活性(ACH50)示意圖。【具體實施方式】
[0024]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0025]下面結合附圖及具體實施例對本發明的應用原理作進一步描述。
[0026]本發明實施例的大黃魚植物乳桿菌飼料配方:植物乳桿菌lX106cfu/kg、菌體
0.lg/kg、牛奶 9.999g/kg、魚粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、魚膏 37g/kg、面筋 20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg組成的喂養詞料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分組成的基礎詞料；
[0027]按照質量百分比，喂養飼料為25.2%，粗蛋白47.3 %、粗脂8.9%、灰分10.2 %、水分 8.4%。
[0028]本發明的配方還可以為:植物乳桿菌I X 108cfu/kg、菌體0.lg/kg、牛奶9.999g/kg、魚粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、魚膏 37g/kg、面筋 20g/kg、魚油 20g/kg、奸殼粉 64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分 8.4% ；
[0029]本發明的配方還可以為:植物乳桿菌I X 101Qcfu/kg、菌體10g/kg、魚粉540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3 %、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分
8.4% ；
[0030]如圖1所示，本發明實施例的大黃魚植物乳桿菌飼料的制備方法包括以下步驟:
[0031]SlOl:從韓國腌白菜分離得到植物乳桿菌，37°C培養于含MRS肉湯的無菌燒瓶中，24小時后，15400Xg離心5分鐘，收集植物乳桿菌混合物；
[0032]S102:按1:4比例與脫脂牛奶混合，冷凍干燥，通過MRS瓊脂平板記數測定植物乳桿菌混合物的生活力；
[0033]S103:按照植物乳桿菌 IX 106cfu/kg、菌體 0.001g/kg、牛奶 9.999g/kg、魚粉540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg配置大黃魚喂養飼料；
[0034]S104:加入成分為47.3%粗蛋白、8.9%粗脂、10.2%灰分和8.4%水分的基礎飼料，混合制成大黃魚植物乳桿菌飼料。
[0035]結合以下具體的實施例對本發明的使用效果做進一步的說明:
[0036]實施例1:
[0037]I材料與方法:
[0038]1.1植物乳桿菌混合物飼料的制備:
[0039]植物乳桿菌SaccharomycescerevisiaeP13從韓國脆白菜分離得到[2]，37°C培養于含MRS肉湯的無菌燒瓶中，24小時后，15，400 Xg離心5分鐘，收集植物乳桿菌混合物，按1:4比例與脫脂牛奶混合，冷凍干燥，通過MRS瓊脂平板記數測定植物乳桿菌混合物的生活力，如表I所示，依據植物乳桿菌含量配置5種大黃魚喂養飼料，其中基礎飼料成分為47.3 %粗蛋白、8.9 %粗脂、10.2 %灰分和8.4 %水分，1.0 X 109cfu/g的植物乳桿菌混合物按表I所示的比例加入到基礎飼料中，使大黃魚喂養飼料中SaccharomycescerevisiaeP13 植物乳桿菌的含量分別達到 O、ΙΟ4、ΙΟ6、108、1010cfu/kg ；
[0040]1.2大黃魚飼養:
[0041]大黃魚幼魚購自當地一人工養殖場，采用水缸流水(海水)飼養方式在室內進行飼養實驗，實驗過程中，每天更換25-35%的海水以保證水的質量，水溫保持在27.0±0.5°C，水的pH值為7.4-8.5，水的鹽度保持在3.0±0.2%，所有實驗魚每天用含植物乳桿菌SaccharomycescerevisiaeP13配方飼料(表I)喂養兩次，每一配方飼料平行喂養三組實驗魚，共15組，每組5條大黃魚幼魚；
[0042]1.3大黃魚生長的測定:
[0043]將大黃魚幼苗隨機分成15組，每組于40-60升體積玻璃水族箱中用含有植物乳桿菌SaccharomycescerevisiaeP13的飼料或對照飼料喂養,所有水族箱配備空氣過濾器，在生長測定過程中，大黃魚每日喂食含植物乳桿菌0，IO4, IO6, IO8和101(lCfU/kg飼料，每星期稱重一次直到測定實驗結束，體重增加百分率(PWG)和飼料轉化效率(FE)的計算公式如下:PWG = [100% X (最后體重-初始體重)/ (初始體重)]和FE =(最后重量-初始體重)/(攝食量)；
[0044]1.4大黃魚抵抗病菌體分析:
[0045]大黃魚喂食含O、ΙΟ4、106、IO8 和 1010cfu/kg 植物乳桿菌 SaccharomycescerevisiaeP13的飼料四周后，分別肌肉注射相應量的Streptococcussp.菌體儲存夜(5.0X 1010cfu/ml),以使每一實驗魚體內初始Streptococcussp.的濃度為
5.0X IO5Cfu/克魚體重，所有實驗魚均繼續喂食含O、104、IO6,IO8和101Qcfu/kg植物乳桿菌SaccharomycescerevisiaeP13的飼料，每天統計死魚數；
[0046]1.5 大黃魚腸道內 SaccharomycescerevisiaePl3 的存活分析:
[0047]大黃魚喂食實驗用配方飼料四周后，剪取小段新鮮腸子，立即用20ml肉湯粉碎，37°C過夜培養，4°C，10，000 X g離心20分鐘，收集沉淀，用購自碧云天的基因組抽提試劑盒分離純化SaccharomycescerevisiaeP13 基因組DNA,用 SaccharomycescerevisiaeP13特異的弓 I 物對 5，-TCTGTATATTCTGTATCTATGTTCCTGC-3 ’和 5 ’ -AAATGGCCTATTGTATTGTCAGGTC-3 ’ ABI公司的Perkin-Elmer9700核酸擴增儀上進行聚合酶鏈式反應(PCR)擴增，先94°C加熱變性10分鐘，接著95 °C變性30秒，55 °C退火30秒，72 V延伸45秒，35個循環，最后72 °C延伸10分鐘，PCR產物用2.0 %瓊脂糖電泳分離鑒定；
[0048]2結果與分析:
[0049]2.1SaccharomycescerevisiaeP13對大黃魚體重增長率的影響:
[0050]喂食含植物乳桿菌SaccharomycescerevisiaeP13的配方飼料(表I)后的大黃魚從第一周起，體重增長率便明顯高于喂食基礎飼料(對照飼料)的大黃魚體重增長率，四周后，喂食對照飼料和含I X 104、1X 106、1X IO8和lX101Qcfu/kg植物乳桿菌SaccharomycescerevisiaeP13 的大黃魚體重增長率分別為 88.9±3.I %> 101.1±5.8%、132.4±11 %、140.8±6.7% 和 138.9±6.4% (圖 2);圖 2 中大黃魚喂食含 O、I X 104、I X 106、I X IO8 和 IX 1010cfu/kg 植物乳桿菌 SaccharomycescerevisiaeP13 飼料 1-4 周的體重增長率。每個數值等于每組3次測定值的平均值加上標準誤差，P <0.05;
[0051]表I大黃魚喂養飼料成分
【權利要求】
1.一種大黃魚植物乳桿菌飼料配方，其特征在于，該大黃魚植物乳桿菌飼料配方包括:植物乳桿菌 IX 106cfu/kg、菌體 0.lg/kg、牛奶 9.999g/kg、魚粉 540g/kg、淀粉 183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg組成的喂養飼料和粗蛋白、粗脂、灰分和水分組成的基礎飼料； 按照質量百分比，喂養飼料為25.2%，粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分8.4%。
2.如權利要求1所述的大黃魚植物乳桿菌飼料配方，其特征在于，該大黃魚植物乳桿菌飼料配方為:植物乳桿菌IX 108cfu/kg、菌體0.lg/kg、牛奶9.99g/kg、魚粉540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分8.4%。
3.如權利要求1所述的大黃魚植物乳桿菌飼料配方，其特征在于，該大黃魚植物乳桿菌飼料配方為:植物乳桿菌I X 101Qcfu/kg、菌體10g/kg、魚粉540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg、粗蛋白47.3%、粗脂8.9%、灰分10.2%、水分8.4%。
4.一種大黃魚植物乳桿菌飼料的制備方法，其特征在于，該大黃魚植物乳桿菌飼料的制備方法包括以下步驟: 從韓國腌白菜分離得到植物乳桿菌，37°C培養于含MRS肉湯的無菌燒瓶中，24小時后，15400 X g離心5分鐘，收集植物乳桿菌混合物； 按1:4比例與脫脂牛奶混合，冷凍干燥，通過MRS瓊脂平板記數測定植物乳桿菌混合物的生活力； 按照植物乳桿菌I X 106cfu/kg、菌體0.001g/kg、牛奶9.999g/kg、魚粉540g/kg、淀粉183g/kg、魚膏37g/kg、面筋20g/kg、魚油20g/kg、奸殼粉64g/kg、脫脂豆柏94g/kg、礦物混合物35g/kg、維生素混合物7g/kg配置大黃魚喂養飼料； 加入成分為47.3%粗蛋白、8.9%粗脂、10.2%灰分和8.4%水分的基礎飼料，混合制成大黃魚植物乳桿菌飼料。
5.如權利要求4所述的大黃魚植物乳桿菌飼料的制備方法，其特征在于，該大黃魚植物乳桿菌飼料一天喂養大黃魚兩次。
【文檔編號】A23K1/175GK103947886SQ201410188158
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月5日 優先權日:2014年5月5日
【發明者】廖志勇, 繆雄偉, 林利, 李小花 申請人:溫州大學