一種含動物腸道有益菌的產品制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種含動物腸道有益菌的產品制備方法，通過將包括嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus）、枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）培菌及提取，混合、造粒、干燥等方法制備而成，該方法簡單易行，容易操作；通過一種保護劑，可用于兩種混合菌種，成功的獲得了可以適用于兩種菌種的保護劑，使得一次攝入可以獲得雙重保護。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物【技術領域】，尤其是涉及一種含動物腸道有益菌產品的生產方 法。 一種含動物腸道有益菌的產品制備方法 技術背景
[0002] 腸道是動物消化系統中最長的也是最重要的器官。90%以上的營養物質要靠腸道 吸收，故腸道被稱作生命最大的寶庫；同時又有90 %以上的毒素由腸道排出體外，故腸道 又稱作人體最大的排污廠。所以腸道健康與否對動物健康至關重要。健康動物的腸道內生 活著400多種、數十萬億的細菌，根據對動物的作用，我們把這些細菌分為有益菌（90%)、有 害菌（0. 9%)，這些細菌相互依存、相互制約，處于相對平衡狀態，組成體內最大的微生態環 境，成為維護人體健康的天然防線，共同完成營養吸收和毒素排泄的作用。對動物的消化吸 收起著極其重要作用。腸道內微生態環境失調，有害菌產生的毒素被腸壁細胞吸收后會引 起慢性中毒，引起各種疾病的衍生，甚至導致死亡。
[0003] 有益菌又稱為"益生菌"，這一概念最早來源于希臘語，意思是"對生命有益"（for life)。人類最早利用的益生菌，就是乳酸菌，早在遠古時代，人類的日常飲食中就已經含有 乳酸發酵類的食品了。益生菌大體上可分成三大類，其中包括：①乳桿菌類(如嗜酸乳桿 菌、干酪乳桿菌、詹氏乳桿菌、拉曼乳桿菌等）；②雙歧桿菌類(如長雙歧桿菌、金雙歧、短 雙歧桿菌、卵形雙歧桿菌、嗜熱雙歧桿菌等）；③革蘭氏陽性球菌(如糞鏈球菌、乳球菌、中 介鏈球菌等)。此外，還有一些酵母菌與酶亦可歸入益生菌的范疇。當人體住滿足夠的益生 菌時，人就會處于健康的狀態，但是一旦體內菌群失去平衡，比如菌種間比例發生大幅變化 或者超出正常數值時，那么腹瀉、過敏、胃口不佳、疲倦、免疫力低等一系列病癥就會隨之而 來，人體的健康就會亮紅燈，而這時適當添加益生菌，協助體內菌群平衡，才能讓人重現健 康狀態。
[0004] 國際上已對乳桿菌亞種菌株進行了大量的研究，含乳桿菌的食物幾乎覆蓋人類生 活的方方面面。然而，雖然乳桿菌能夠吸附在小腸和大腸中，但是當它們以活性菌的形式與 食物一起制備并攝取時，由于pH很低的胃酸的存在，其經常在胃中就被滅活，從而無法以 活菌的形式達到腸道中，也無法真正起到調節腸道菌群的作用。因此，如何將乳桿菌活菌能 過順利的經過胃酸和膽汁而不被滅菌，而是能夠保持活性直到腸道中是乳酸菌研究的一個 非常重要的分支。
[0005] 目前，常用于保持乳酸菌活性的方法主要有兩種： (1)通過篩選新的耐酸、耐膽汁菌株，例如： CN1406274 A公開了一種"新穎的類干酪乳桿菌屬菌株（類干酪乳桿菌類干酪亞種 CSK01，Lactobacillusparacasei subsp.paracasei CSK 01〕，它米用下述步驟制得：（1)向 胃腸炎患者給予從豬的胃粘液獲得的乳酸菌；（2)在這些患者完全病愈后，再從他們的糞 便中分離出乳酸菌；（3)進行16SrRNA測序和RAH)聚合酶鏈式反應鑒別出該細菌菌株。本 發明的乳桿菌可粘附在胃和腸粘膜上，并在它們上面增殖，該乳桿菌可突出地抵抗酸性條 件和膽汁質條件，并具有優異的抗細菌特性，從而可廣泛用于開發新藥、功能性食物、增進 健康的添加劑等。" CN1520754 A公開了一種"含有孢子型乳酸菌的水飲料制法"，其主要以內生孢子型乳 酸菌為主要成份，先使乳酸菌內部產生具保護作用的內生孢子，使其呈現休眠狀態存在于 水溶液中，讓乳酸菌在制成水飲料及喝入人體的過程中不會被消化道中的各種不利于乳酸 菌的因子（如溫度、唾液、胃酸等消化液）所傷害，使其在人體小腸腸道中蘇醒，來發揮乳酸 菌于腸道中的作用，以使乳酸菌飲料能達到其應有的增進腸道健康的效果。
[0006] (2)通過添加保護劑使得乳酸菌與胃酸隔絕以避免其被胃酸滅活，例如， CN103013972A公開了一種用微膠囊包裹的干酪乳桿菌，已達到能夠抵抗胃酸等惡劣環境的 目的。
[0007] 雖然通過篩選新的菌珠能夠制備出耐胃酸、耐膽汁的乳酸菌產品，但是篩選新的 菌種需要耗費大量的時間和金錢，還具有不確定性。而微膠囊等包埋工藝由于將乳酸菌進 行隔離，不僅工藝復雜，無法保證到腸內的活菌率，無法實現胃部的保健調節效果，同時產 生的產品還需要額外的調味，不然則口感差，不易為消費者所接受。


【發明內容】

[0008] 基于上述原因，本發明的目的在于提供一種含動物腸道有益菌的產品的制備方法 及由該方法制備的菌粉。既能夠在食用時通過胃酸和膽汁而不被滅活，同時工藝簡單、口感 好，能同時起到即保護胃部又能保健腸部的效果，易為消費者所接受。
[0009] 本發明的目的是這樣實現的： 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，包括嗜酸乳桿菌 <3<^￡/〇/7力以《*5)、枯草芽孢桿菌(3<3<^77^>5>5以〇7/5〇培菌及提取，混合、造粒、干燥等技術， 主要包括以下特征： A、菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏；將枯草芽孢桿 菌采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件下培養24小時， 置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時；將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種， 在37°C條件下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的二 株菌種子分另接入不同的發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數 期末期種子接種。嗜酸乳桿菌在5%C0 2、37°C條件下厭氧培養48小時；枯草芽孢桿菌在37°C 條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟。
[0010] B、離心：分別將培養成熟的嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min， 收集菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、制粒：將嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌進行聯合制粒，首先將嗜酸乳桿菌泥和枯草芽 孢桿菌泥以1?6 :1?8的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0. 5份海藻 糖、0. 5份阿拉伯膠、2份羧甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物。將混合物用造粒機制成粒 徑為0. 的含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒。
[0011] D、將含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒置于45°C的流化床進行低溫 干燥。
[0012] E、混合：6份活性干嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌顆粒、0. 2份木聚糖酶、0. 4份 β -葡聚糖酶、3. 8份沸石粉混合均勻即成。
[0013] 優選的，將嗜酸乳桿菌泥和枯草芽孢桿菌泥以1 :3. 7的比例混合；還優選將嗜酸 乳桿菌泥和枯草芽孢桿菌泥以5 :1的比例混合。根據本發明的制備方法制得的產品中含有 蘭8X 109cfu/g的嗜酸乳桿菌和蘭3X 101Qcfu/g的枯草芽孢桿菌。
[0014] 本發明具有以下有益效果 (1) 采用乳酸菌、枯草芽孢桿菌增殖發酵后，分別加入可溶性淀粉、海藻糖、阿拉伯膠、 羧甲基纖維素鈉等保護劑，經造粒、低溫干燥制成含活性干乳酸菌、枯草芽孢桿菌產品，再 加入木聚糖酶、β-葡聚糖酶等混合制成益生菌的產品，獲得了能夠耐胃酸和耐膽汁的乳酸 菌產品，該方法簡單易行，容易操作； (2) 首次嘗試了通過一種保護劑，用于兩種混合菌種，通過混合菌種的發酵特點，成功 的獲得了可以適用于兩種菌種的保護劑，使得一次攝入可以獲得雙重保護。
[0015] (3)首次發現了嗜酸酵母菌與枯草芽孢桿菌對抗胃酸和抗膽汁有顯著的協同效 應，二者同時使用時，能夠有效的提高其抗胃酸和耐膽汁的能力。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1本發明活性乳酸菌生產工藝流程圖。

【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例并對照附圖對本發明作進一步詳細說明。應當理解，凡是本領域 技術人員根據本發明的內容不需要付出創造性的勞動就能夠想到的基本改進都在本發明 的保護范圍之內。
[0018] 實施例1 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，具體步驟如下： Α、菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏；將枯草芽孢桿 菌采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件下培養24小時， 置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時；將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種， 在37°C條件下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的二 株菌種子分另接入不同的發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數 期末期種子接種。嗜酸乳桿菌在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時；枯草芽孢桿菌在37°C 條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟。
[0019] B、離心：分別將培養成熟的嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min， 收集菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、制粒：將嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌進行聯合制粒，首先將嗜酸乳桿菌泥和枯草芽 孢桿菌泥以1 :3. 7的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0. 5份海藻糖、0. 5 份阿拉伯膠、2份羧甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物。將混合物用造粒機制成粒徑為 0. 的含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒。
[0020] D、干燥：將含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒置于45°C的流化床進 行低溫干燥。
[0021] E、混合：6份活性干嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌的顆粒、0. 2份木聚糖酶、0. 4份 β -葡聚糖酶、3. 8份沸石粉混合均勻即成。
[0022] 實施例2 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，具體步驟如下： Α、菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏；將枯草芽孢桿 菌采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件下培養24小時， 置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時；將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種， 在37°C條件下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的二 株菌種子分另接入不同的發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數 期末期種子接種。嗜酸乳桿菌在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時；枯草芽孢桿菌在37°C 條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟。
[0023] B、離心：分別將培養成熟的嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min， 收集菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、制粒：將嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌進行聯合制粒，首先將嗜酸乳桿菌泥和枯草 芽孢桿菌泥以5 :1的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0. 5份海藻糖、0. 5 份阿拉伯膠、2份羧甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物。將混合物用造粒機制成粒徑為 0. 的含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒。
[0024] D、干燥：將含活性嗜酸乳桿菌及活性枯草芽孢桿菌的顆粒置于45°C的流化床進 行低溫干燥。
[0025] E、混合：6份活性干嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌的顆粒、0. 2份木聚糖酶、0. 4份 β -葡聚糖酶、3. 8份沸石粉混合均勻即成。
[0026] 實施例3 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，具體步驟如下： A、菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏；將枯草芽孢桿 菌(ifeci77w5· 5·Μ?Υ7Υ5·)采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件下培養24小時， 置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時；將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種， 在37°C條件下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的二 株菌種子分另接入不同的發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數 期末期種子接種。嗜酸乳桿菌在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時；枯草芽孢桿菌在37°C 條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟。
[0027] B、離心：分別將培養成熟的嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min， 收集菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、制粒：將嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌分別進行制粒，取菌泥2份，5份可溶性淀粉、 〇. 5份海藻糖、0. 5份阿拉伯膠、2份羧甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物。將混合物用造 粒機制成粒徑為〇. 的含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒。
[0028] D、干燥：將含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒分別置于45°C的流化 床進行低溫干燥。
[0029] E、混合：取5份活性干嗜酸乳桿菌顆粒、1份活性干枯草芽孢桿菌顆粒、0. 2份木聚 糖酶、0. 4份β -葡聚糖酶、3. 8份沸石粉混合均勻即成。
[0030] 實施例4 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，具體步驟如下： Α、菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的菌 種接入發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數期末期種子接種。 嗜酸乳桿菌在5%C0 2、37°C條件下厭氧培養48小時； B、離心：將培養成熟的嗜酸乳桿菌收集菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min， 收集菌泥，洗滌3次； C、制粒：將嗜酸乳桿菌泥2份，5份可溶性淀粉、0. 5份海藻糖、0. 5份阿拉伯膠、2份羧 甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物。將混合物用造粒機制成粒徑為〇. 的含活性 嗜酸乳桿菌的顆粒。
[0031] D、干燥：將含活性嗜酸乳桿菌的顆粒分別置于45°C的流化床進行低溫干燥。
[0032] E、混合：取6份活性干嗜酸乳桿菌顆粒、0. 2份木聚糖酶、0. 4份β -葡聚糖酶、3. 8 份沸石粉混合均勻即成。
[0033] 實施例5 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，具體步驟如下： Α、菌種培養： (1) 斜面菌種：將枯草芽孢桿菌采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻 接種，在37°C條件下培養24小時，置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件 下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的菌 種接入發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數期末期種子接種； 枯草芽孢桿菌在37°C條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟。
[0034] B、離心：將培養成熟的枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min，收集菌泥；無菌水 洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、制粒：將枯草芽孢桿菌菌泥2份，5份可溶性淀粉、0. 5份海藻糖、0. 5份阿拉伯膠、2 份羧甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物。將混合物用造粒機制成粒徑為〇. 的含 活性枯草芽孢桿菌的顆粒。
[0035] D、干燥：將含活性枯草芽孢桿菌的顆粒置于45°C的流化床進行低溫干燥。
[0036] E、混合：取6份活性干嗜酸乳桿菌顆粒、0. 2份木聚糖酶、0. 4份β -葡聚糖酶、3. 8 份沸石粉混合均勻即成。
[0037] 實施例6 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，具體步驟如下： Α、菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏；將枯草芽孢桿 菌采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件下培養24小時， 置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時；將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種， 在37°C條件下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的二 株菌種子分另接入不同的發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數 期末期種子接種。嗜酸乳桿菌在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時；枯草芽孢桿菌在37°C 條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟。
[0038] B、離心：分別將培養成熟的嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min， 收集菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、制粒：將嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌進行聯合制粒，首先將嗜酸乳桿菌泥和枯草芽 孢桿菌泥以5 :1的比例混合，取混合后的菌泥2份，0. 5份海藻糖、混合均勻，得到混合物。 將混合物用造粒機制成粒徑為〇. 的含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆 粒。
[0039] D、干燥：將含活性嗜酸乳桿菌及活性枯草芽孢桿菌的顆粒置于45°C的流化床進 行低溫干燥。
[0040] E、混合：6份活性干嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌的顆粒、0. 2份木聚糖酶、0. 4份 β -葡聚糖酶、3. 8份沸石粉混合均勻即成。
[0041] 實施例7 一種含腸道有益菌的產品的制備方法，具體步驟如下： Α、菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏；將枯草芽孢桿 菌采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件下培養24小時， 置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時；將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種， 在37°C條件下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值。接種是將三角培養好的二 株菌種子分另接入不同的發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數 期末期種子接種。嗜酸乳桿菌在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時；枯草芽孢桿菌在37°C 條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟。
[0042] B、離心：分別將培養成熟的嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min， 收集菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、制粒：將嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌進行聯合制粒，首先將嗜酸乳桿菌泥和枯草 芽孢桿菌泥以5 :1的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0. 5份海藻糖、0. 5 份阿拉伯膠、2份羧甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物。將混合物用造粒機制成粒徑為 0. 的含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒。
[0043] D、干燥：將含活性嗜酸乳桿菌及活性枯草芽孢桿菌的顆粒置于45°C的流化床進 行低溫干燥，即成。
[0044] 下面通過胃酸試驗和膽汁試驗的結果來說明本發明的有益效果： (1)胃酸試驗 試驗方法： 參考 J.E. Holcombe 等，（1991)，Cult. Dairy Prod. J·，26(3) :4-5 以及 US 5711977A 中 所公開的方法，以產品在中性（PH7)及仿胃酸環境（pH 2)中的存活菌數作為測試指標。取 各實施例制得的產品〇. lg，添加 l〇ml的生理食鹽水溶液（0. 85%NaCl，pH 7)，先以竹簽將 菌體攪散，再振蕩均勻，然后分別取〇.5ml經散浮的菌液置于pH 7及pH 2的生理食鹽水溶 液中，于37°C的恒溫培養箱內靜置2小時后，分別測其存活菌數。試驗結果列于下表中： 表1耐胃酸試驗結果

【權利要求】
1. 一種含動物腸道有益菌的產品制備方法，包括嗜酸乳桿菌(hcio知ciBm <3<^￡/〇/7力以《*5)、枯草芽孢桿菌(3<3<^77^>5>5以〇7/5〇培菌及提取，混合、造粒、干燥等技術， 主要包括以下特征： A、 菌種培養： (1) 斜面菌種：將嗜酸乳桿菌(LacioAaciBiAs 米用MRS固體培養基滅 菌、冷卻接種，在5%C02、37°C條件下厭氧培養48小時，置于4°C冰箱內保藏；將枯草芽孢桿 菌(ifeci77w5· 5·Μ?Υ7Υ5·)采用土豆瓊脂培養基滅菌、冷卻接種，在37°C條件下培養24小時， 置于4°C冰箱內保藏； (2) 三角瓶種：將經過保藏的嗜酸乳桿菌用MRS液體培養基滅菌、冷卻接種，在5%C02、 37°C條件下厭氧培養36小時；將經過保藏的枯草芽孢桿菌用土豆培養基滅菌、冷卻接種， 在37°C條件下搖瓶培養24小時； (3) 發酵罐培養：發酵罐培養用玉米水解為葡萄糖、濾清后實消，加入滅菌后的尿素為 氮源，冷卻到37°C接種，培養中期流加滅菌后的氨水調節pH值；接種是將三角培養好的二 株菌種子分另接入不同的發酵罐，進行分批培養，大型發酵罐還需加入一級種子罐，用對數 期末期種子接種；嗜酸乳桿菌在5%C0 2、37°C條件下厭氧培養48小時；枯草芽孢桿菌在37°C 條件下通氣培養36小時，待大部分形成芽孢后成熟； B、 離心：分別將培養成熟的嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌在3000r/min離心15min，收集 菌泥；無菌水洗漆，再3000r/min離心15min，收集菌泥，洗漆3次； C、 制粒：將嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌進行聯合制粒，首先將嗜酸乳桿菌泥和枯草芽 孢桿菌泥以1?6 :1?8的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0. 5份海藻 糖、0. 5份阿拉伯膠、2份羧甲基纖維素鈉混合均勻，得到混合物；將混合物用造粒機制成粒 徑為0. 的含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒； D、 將含活性嗜酸乳桿菌和活性枯草芽孢桿菌的顆粒置于45°C的流化床進行低溫干 燥； E、 混合：6份活性干嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌顆粒、0. 2份木聚糖酶、0. 4份β -葡聚 糖酶、3. 8份沸石粉混合均勻即成。
2. -種如權利要求1所述的含動物腸道有益菌的產品制備方法，其特征在于將嗜酸乳 桿菌泥和枯草芽孢桿菌泥以1 :3. 7的比例混合。
3. -種如權利要求1所述的含動物腸道有益菌的產品制備方法，其特征在于將嗜酸乳 桿菌泥和枯草芽孢桿菌泥以5 :1的比例混合。
4. 一種由權利要求1-3中任一項權利要求的制備方法制得的產品。
5. -種如權利要求4所述的產品，其特征在于其產品中含有3 8X 109cfu/g的嗜酸乳 桿菌和會3X101(lCfu/g的枯草芽孢桿菌。
【文檔編號】A23K1/16GK104095148SQ201410347478
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月21日 優先權日:2014年7月21日
【發明者】劉建, 費錦榮, 董麗華 申請人:九江禮淶生物科技有限公司