鐵皮石斛培養基及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種鐵皮石斛培養基及其制備方法，所述培養基包括：花寶一號，其在培養基溶液中的濃度為3～4g/L；有機元素類如檸檬酸、肌醇、維生素B1，其中每一種物質在培養基溶液中的濃度均為15～200mg/L；化合物如磷酸二氫鉀，其在培養基溶液中的濃度為50～300mg/L；添加物如蛋白胨、馬鈴薯、香蕉等，其中每一種物質在培養基溶液中的濃度均為0.5～100g/L。本發明的培養基成分簡單、營養全面、配制簡便，能夠很好的促進鐵皮石斛壯苗生根，使得莖更粗壯，根系更發達，有效提高出瓶種苗的質量。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種鐵皮石斛培養基及其制備方法。 鐵皮石斛培養基及其制備方法

【背景技術】
[0002] 石斛是為蘭科石斛屬多年生草本植物，是蘭科植物中最大的一個屬。石斛天然就 是一個生命力很強的植物，多生長于人跡罕至的懸崖峭壁上，附生于樹上或巖石邊石縫中， 喜溫暖濕潤和半陰半陽的氣候環境。石斛在全世界有1600多種，我國約有76種，其中大部 分分布于西南、華南、臺灣等地。鐵皮石斛是眾多石斛中的一種，又名黃草、黑節草，是石 斛中的極品，它因表面呈鐵綠色而得名，具有獨特的藥用價值；民間俗稱"救命仙草"，因其 含有大量的石斛多糖、石斛堿等成分，而位列眾石斛之首，是歷代皇宮貴族養生保健首選的 "滋陰圣品"。《道藏》將其尊為中華九大仙草之首。李時珍在《本草綱目》中評價鐵皮石斛 "補五臟虛勞羸弱，強陰益精，厚腸胃，補內絕不足，平胃氣，長肌肉，益志除驚，輕身延年"。 鐵皮石斛自然產量極為稀少，加之長期掠奪式采掘，野生鐵皮石斛已瀕臨枯竭。1975年，鐵 皮石斛被列為《瀕危野生動植物國際貿易公約》瀕危植物；1987年，國務院已將鐵皮石斛列 為野生名貴藥材保護品種；2010年，由國內323位頂級藥學專家編纂完成的2010版藥品技 術監督法定技術標準--《中華人民共和國藥典》正式出版，因鐵皮石斛價值遠遠高于其他 石斛，為充分保護鐵皮石斛產業的健康發展，首次將鐵皮石斛作為一個單列品種從石斛中 分列出來。
[0003] 由于天然來源的鐵皮石斛越來越少，近年來，鐵皮石斛的組織培養技術成為了研 究的熱點。目前市場上關于鐵皮石斛組培的培養基有很多種，其中成分含量也不盡相同，但 這些培養基在鐵皮石斛壯苗生根階段的效果并不理想，莖不夠粗壯，根系不夠多等，使得種 苗質量大大降低，不利于鐵皮石斛的市場銷售。而且其配制所需的藥品眾多，配制較為麻 煩。


【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供了一種鐵皮石斛培養基及其制 備方法，更有利于生根壯苗，能有效提高出瓶種苗的質量。
[0005] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案之一是：
[0006] -種鐵皮石斛培養基，每升培養基中含有以下組分：
[0007] 花寶一號：3000?4000mg ;朽1檬酸：15?200mg ;肌醇：15?200mg ;維生素 B1 :15?200mg ;磷酸二氫鉀：50?300mg ;蛋白胨：1000?5000mg ;馬鈴薯：15000? lOOOOOmg ;香蕉：15000 ?lOOOOOmg ;白糖：18000 ?35000mg ;瓊脂：6000 ?8000mg ;活性 炭：500 ?5000mg。
[0008] -實施例中：每升培養基中含有以下組分：
[0009] 花寶一號：3000?4000mg ;朽1檬酸：50?200mg ;肌醇：15?25mg ;維生素B1 : 15 ?25mg ;磷酸二氫鉀：50 ?200mg ;蛋白胨：1500 ?2500mg ;馬鈴薯：50000 ?lOOOOOmg ; 香蕉：50000 ?lOOOOOmg ;白糖：20000 ?30000mg ;瓊脂：6000 ?7000mg ;活性炭：1000 ? 2000mg。
[0010] -實施例中：每升培養基中含有以下組分：
[0011] 花寶一號：3500mg ;梓檬酸：50?200mg ;肌醇：20mg ;維生素 B1 :20mg ;磷酸二氫 鉀：50 ?200mg ;蛋白胨：2000mg ;馬鈴薯：70000mg ;香蕉：70000mg ;白糖：30000mg ;瓊脂： 6500mg ;活性炭：1000mg。
[0012] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案之二是：
[0013] 一種用于制備權利要求1所述的鐵皮石斛培養基的制備方法，包括以下步驟：
[0014] 1)按配置10升所述鐵皮石斛培養基計，稱取各組分；
[0015] 2)將花寶一號、檸檬酸、肌醇、維生素 B1、磷酸二氫鉀及蛋白胨在室溫下加入2升 溶劑中，攪拌至溶解；
[0016] 3)馬鈴薯用2升溶劑煮熟后攪碎，連同溶劑一并加入步驟2)所得溶液中；
[0017] 4)香蕉攪碎后加入步驟3)所得溶液中；
[0018] 5)白糖、瓊脂在室溫下加入3升溶劑中，白糖攪拌至溶解，瓊脂攪拌至混勻，加入 步驟4)所得溶液中；
[0019] 6)活性炭加入步驟5)所得溶液中，攪拌至混勻；
[0020] 7)將步驟6)所得溶液定容至10升，調節pH值至5. 4?5. 8 ;分裝于組培瓶中，高 壓蒸汽滅菌20?30分鐘，冷卻凝固后即得。
[0021] 一實施例中：所述溶劑為去離子水。
[0022] 本發明所述的室溫為25°C。
[0023] 本發明所述的花寶一號為美國生產、臺灣或香港分裝產品，可從市場上購得。
[0024] 本發明所述的各組分均為市場上銷售的產品。
[0025] 本技術方案與【背景技術】相比，它具有如下優點：
[0026] 1.本發明的鐵皮石斛培養基，以花寶一號為基質，加入檸檬酸、肌醇、維生素B1等 補充有機元素，磷酸二氫鉀能提供充足的磷與鉀，蛋白胨能促進鐵皮石斛種苗的整體生長， 馬鈴薯能壯苗并改善培養基的硬度，香蕉可有效促進生根，白糖提供碳源，瓊脂可使培養基 成型以支撐種苗的生長，活性炭的添加則能大大減少褐變的產生，各組分營養全面、相輔相 成，有利于生根壯苗，能有效提1?出瓶種苗的質量。
[0027] 2.本發明的鐵皮石斛培養基組分簡單，來源廣泛，易于獲得，價格低廉，配置步驟 簡便，適合用于鐵皮石斛組培中的壯苗生根階段，尤其適合大規模組織培養。
[0028] 3.本發明的鐵皮石斛培養基培養效果良好，出瓶種苗平均克重約0. 75?0. 9g，莖 粗約0. 4?0. 5cm，每叢苗（三株一叢）2cm長以上的根5?6條；而市售的培養同樣時間 的鐵皮石斛種苗平均克重〇. 4?0. 5g，莖粗約0. 15?0. 2cm，每叢苗（三株一叢）2cm長以 上的根4條以上，與之相比，本發明的培養基培養的鐵皮石斛種苗克重明顯增加，且根莖肥 壯，根系發達，葉片青綠肥厚，出瓶種苗質量顯著提高。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0029] 下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明。
[0030] 圖1為米用本發明的鐵皮石斛培養基培養的鐵皮石斛種苗與市售培養同樣時間 的鐵皮石斛種苗對比示意圖，圖中左側較為纖細的為市售鐵皮石斛種苗，圖中右側較為粗 壯的為采用本發明的鐵皮石斛培養基培養的鐵皮石斛種苗。

【具體實施方式】
[0031] 下面通過實施例具體說明本發明的內容：
[0032] 實施例1
[0033] 1)按配置10升所述鐵皮石斛培養基計，稱取花寶一號35000mg、檸檬酸lOOOmg、 肌醇200mg、維生素 B1 200mg、磷酸二氫鉀lOOOmg、蛋白胨20000mg、馬鈴薯700000mg、香蕉 700000mg、白糖 300000mg、瓊脂 65000mg、活性炭 lOOOOmg ;
[0034] 2)將花寶一號、檸檬酸、肌醇、維生素B1、磷酸二氫鉀及蛋白胨在室溫下加入2升 去離子水中，攪拌至溶解；
[0035] 3)馬鈴薯用2升去離子水煮熟后攪碎，連同溶劑一并加入步驟2)所得溶液中；
[0036] 4)香蕉攪碎后加入步驟3)所得溶液中；
[0037] 5)白糖、瓊脂在室溫下加入3升去離子水中，白糖攪拌至溶解，瓊脂攪拌至混勻， 加入步驟4)所得溶液中；
[0038] 6)活性炭加入步驟5)所得溶液中，攪拌至混勻；
[0039] 7)將步驟6)所得溶液定容至10升，調節pH值至5. 4?5. 8 ;分裝于組培瓶中， 122°C、0. 12MPa下高壓蒸汽滅菌20分鐘，冷卻凝固后即得。
[0040] 將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，90天后收獲合格的鐵皮石斛種 苗，葉片數平均5片以上且葉片寬厚、顏色深綠，莖最粗處約為0. 4?0. 5cm，每叢苗（三株 一叢）2cm長以上的根6條以上，每株苗平均克重為0. 886g ;
[0041] 米用市售的培養同樣時間的鐵皮石斛種苗（購自福建某石斛科技有限公司、寧波 某研究所等）作為對比發現（請查閱圖1，圖1中左側較為纖細的為市售鐵皮石斛種苗，圖 1中右側較為粗壯的為本實施例的鐵皮石斛培養基培養的鐵皮石斛種苗），市售鐵皮石斛 種苗葉片數平均5片但葉片纖細且顏色較淺，莖最粗處約為0. 15?0. 2cm，每叢苗（三株一 叢）2cm長以上的根4條以上，每株苗平均克重為0. 486g。
[0042] 由此可見，本實施例的培養基培養的種苗，與市售鐵皮石斛種苗相比，每株苗平均 克重增長82. 3%，莖粗明顯增加，且根莖肥壯，根系發達，葉片青綠肥厚，出瓶種苗質量顯著 提商（圖1)。
[0043] 實施例2
[0044] 1)按配置10升所述鐵皮石斛培養基計，稱取花寶一號30000mg、檸檬酸500mg、 肌醇150mg、維生素 B1 150mg、磷酸二氫鉀500mg、蛋白胨15000mg、馬鈴薯500000mg、香蕉 500000mg、白糖 300000mg、瓊脂 60000mg、活性炭 15000mg ;
[0045] 2)將花寶一號、檸檬酸、肌醇、維生素B1、磷酸二氫鉀及蛋白胨在室溫下加入2升 去離子水中，攪拌至溶解；
[0046] 3)馬鈴薯用2升去離子水煮熟后攪碎，連同溶劑一并加入步驟2)所得溶液中；
[0047] 4)香蕉攪碎后加入步驟3)所得溶液中；
[0048] 5)白糖、瓊脂在室溫下加入3升去離子水中，白糖攪拌至溶解，瓊脂攪拌至混勻， 加入步驟4)所得溶液中；
[0049] 6)活性炭加入步驟5)所得溶液中，攪拌至混勻；
[0050] 7)將步驟6)所得溶液定容至10升，調節pH值至5. 4?5. 8;分裝于組培瓶中， 122°C、0. 12MPa下高壓蒸汽滅菌20分鐘，冷卻凝固后即得。
[0051] 將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，90天后收獲合格的鐵皮石斛種 苗，葉片數達5片以上葉片寬厚、顏色深綠，莖最粗處約為0. 4?0. 5cm，每叢苗（三株一 叢）2cm長以上的根6條以上，每株苗平均克重為0. 828g，顯示出良好的壯苗生根效果。
[0052] 實施例3
[0053] 1)按配置10升所述鐵皮石斛培養基計，稱取花寶一號40000mg、檸檬酸2000mg、肌 醇250mg、維生素 B1 250mg、磷酸二氫鉀2000mg、蛋白胨25000mg、馬鈴薯lOOOOOOmg、香蕉 lOOOOOOmg、白糖 200000mg、瓊脂 70000mg、活性炭 20000mg ;
[0054] 2)將花寶一號、檸檬酸、肌醇、維生素B1、磷酸二氫鉀及蛋白胨在室溫下加入2升 去離子水中，攪拌至溶解；
[0055] 3)馬鈴薯用2升去離子水煮熟后攪碎，連同溶劑一并加入步驟2)所得溶液中；
[0056] 4)香蕉攪碎后加入步驟3)所得溶液中；
[0057] 5)白糖、瓊脂在室溫下加入3升去離子水中，白糖攪拌至溶解，瓊脂攪拌至混勻， 加入步驟4)所得溶液中；
[0058] 6)活性炭加入步驟5)所得溶液中，攪拌至混勻；
[0059] 7)將步驟6)所得溶液定容至10升，調節pH值至5. 4?5. 8 ;分裝于組培瓶中， 122°C、0. 12MPa下高壓蒸汽滅菌20分鐘，冷卻凝固后即得。
[0060] 將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，90天后收獲合格的鐵皮石斛種 苗，葉片數達5片以上，莖最粗處約為0. 4?0. 5cm，每叢苗（三株一叢）2cm長以上的根6 條以上，每株苗平均克重為0. 844g，顯示出良好的壯苗生根效果。
[0061] 實施例4
[0062] 1)按配置10升所述鐵皮石斛培養基計，稱取花寶一號35000mg、檸檬酸150mg、 肌醇150mg、維生素 B1 150mg、磷酸二氫鉀500mg、蛋白胨lOOOOmg、馬鈴薯150000mg、香蕉 150000mg、白糖 350000mg、瓊脂 65000mg、活性炭 lOOOOmg ;
[0063] 2)將花寶一號、檸檬酸、肌醇、維生素B1、磷酸二氫鉀及蛋白胨在室溫下加入2升 去離子水中，攪拌至溶解；
[0064] 3)馬鈴薯用2升去離子水煮熟后攪碎，連同溶劑一并加入步驟2)所得溶液中；
[0065] 4)香蕉攪碎后加入步驟3)所得溶液中；
[0066] 5)白糖、瓊脂在室溫下加入3升去離子水中，白糖攪拌至溶解，瓊脂攪拌至混勻， 加入步驟4)所得溶液中；
[0067] 6)活性炭加入步驟5)所得溶液中，攪拌至混勻；
[0068] 7)將步驟6)所得溶液定容至10升，調節pH值至5. 4?5. 8 ;分裝于組培瓶中， 122°C、0. 12MPa下高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。
[0069] 將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，90天后收獲合格的鐵皮石斛種 苗，葉片數達4片以上，莖最粗處約為0. 4?0. 5cm，每叢苗（三株一叢）2cm長以上的根6 條以上，每株苗平均克重為0. 811g，顯示出良好的壯苗生根效果。
[0070] 實施例5
[0071] 1)按配置10升所述鐵皮石斛培養基計，稱取花寶一號40000mg、檸檬酸2000mg、肌 醇2000mg、維生素 B1 2000mg、磷酸二氫鉀3000mg、蛋白胨50000mg、馬鈴薯600000mg、香蕉 600000mg、白糖 180000mg、瓊脂 70000mg、活性炭 15000mg ;
[0072] 2)將花寶一號、檸檬酸、肌醇、維生素 B1、磷酸二氫鉀及蛋白胨在室溫下加入2升 水中，攪拌至溶解；
[0073] 3)馬鈴薯用2升水煮熟后攪碎，連同溶劑一并加入步驟2)所得溶液中；
[0074] 4)香蕉攪碎后加入步驟3)所得溶液中；
[0075] 5)白糖、瓊脂在室溫下加入3升水中，白糖攪拌至溶解，瓊脂攪拌至混勻，加入步 驟4)所得溶液中；
[0076] 6)活性炭加入步驟5)所得溶液中，攪拌至混勻；
[0077] 7)將步驟6)所得溶液定容至10升，調節pH值至5. 4?5. 8 ;分裝于組培瓶中， 122°C、0. 12MPa下高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。
[0078] 將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，90天后收獲合格的鐵皮石斛種 苗，葉片數達5片以上，莖最粗處約為0. 35?0. 4cm，每叢苗（三株一叢）2cm長以上的根5 條以上，每株苗平均克重為0. 797g，顯示出良好的壯苗生根效果。
[0079] 以上所述，僅為本發明較佳實施例而已，故不能依此限定本發明實施的范圍，即依 本發明專利范圍及說明書內容所作的等效變化與修飾，皆應仍屬本發明涵蓋的范圍內。
【權利要求】
1. 一種鐵皮石斛培養基，其特征在于：每升培養基中含有以下組分： 花寶一號：3000?4000mg ;朽1檬酸：15?200mg ;肌醇：15?200mg ;維生素 B1 :15? 200mg ;磷酸二氫鉀：50 ?300mg ;蛋白胨：1000 ?5000mg ;馬鈴薯：15000 ?lOOOOOmg ; 香蕉：15000 ?lOOOOOmg ;白糖：18000 ?35000mg ;瓊脂：6000 ?8000mg ;活性炭：500 ? 5000mg〇
2. 根據權利要求1所述的一種鐵皮石斛培養基，其特征在于：每升培養基中含有以下 組分： 花寶一號：3000?4000mg ;朽1檬酸：50?200mg ;肌醇：15?25mg ;維生素B1 :15? 25mg ;磷酸二氫鉀：50?200mg ;蛋白胨：1500?2500mg ;馬鈴薯：50000?lOOOOOmg ;香 蕉：50000 ?lOOOOOmg ;白糖：20000 ?30000mg ;瓊脂：6000 ?7000mg ;活性炭：1000 ? 2000mg〇
3. 根據權利要求1所述的一種鐵皮石斛培養基，其特征在于：每升培養基中含有以下 組分： 花寶一號：3500mg ;朽1檬酸：50?200mg ;肌醇：20mg ;維生素 B1 :20mg ;磷酸二氫鉀： 50 ?200mg ;蛋白胨：2000mg ;馬鈴薯：70000mg ;香蕉：70000mg ;白糖：30000mg ;瓊脂： 6500mg ;活性炭：1000mg。
4. 一種用于制備權利要求1所述的鐵皮石斛培養基的制備方法，其特征在于：包括以 下步驟： 1) 按配置10升所述鐵皮石斛培養基計，稱取各組分； 2) 將花寶一號、檸檬酸、肌醇、維生素 B1、磷酸二氫鉀及蛋白胨在室溫下加入2升溶劑 中，攪拌至溶解； 3) 馬鈴薯用2升溶劑煮熟后攪碎，連同溶劑一并加入步驟2)所得溶液中； 4) 香蕉攪碎后加入步驟3)所得溶液中； 5) 白糖、瓊脂在室溫下加入3升溶劑中，白糖攪拌至溶解，瓊脂攪拌至混勻，加入步驟 4)所得溶液中； 6) 活性炭加入步驟5)所得溶液中，攪拌至混勻； 7) 將步驟6)所得溶液定容至10升，調節pH值至5. 4?5. 8 ;分裝于組培瓶中，高壓蒸 汽滅菌20?30分鐘，冷卻凝固后即得。
5. 根據權利要求4所述的一種鐵皮石斛培養基的制備方法，其特征在于：所述溶劑為 去離子水。
【文檔編號】A01H4/00GK104145815SQ201410359029
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月25日 優先權日:2014年7月25日
【發明者】莊國鐘, 林伯煌 申請人:莊國鐘