一種麒麟竭懸浮細胞的快速繁殖方法
【專利摘要】本發明研究了一種麒麟竭懸浮細胞培養的快速繁殖方法，包括麒麟竭外植體的消毒、愈傷組織的誘導、愈傷組織的繼代、愈傷組織的保存等步驟。本發明方法誘導出大量的麒麟竭細胞工藝簡單，不受地域，季節的影響，為麒麟竭的有效利用提供基礎。
【專利說明】 一種麒麟竭懸浮細胞的快速繁殖方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及組培條件下麒麟竭懸浮細胞的培養，屬于植物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]麒麟竭，又名:麒麟竭、海蠟、麒麟血，棕櫚科。我國廣東、臺灣一帶生長的一種多年生藤本植物。其葉為羽狀復葉，小葉為線狀披針形，上有3條縱行的脈。果實卵球形，外有光亮的黃色鱗片。它通常纏繞在其他樹木上，它的莖可以長達10余米。如果把它砍斷或切開一個口子，血一樣的樹脂流出來，干后凝結成血塊狀的東西。這是很珍貴的中藥，稱之為“血竭” “麒麟竭”。經分析，血竭中含有鞣質、還原性糖和樹脂類的物質，可治療筋骨疼痛，并有散氣、去痛、祛風、通經活血之效，除莖之外，果實也可流出血樣的樹脂。主治跌打腫痛，內傷瘀痛；外傷出血不止，瘰疬，臁瘡潰久不合，目前關于其栽植方法尚待研究。


【發明內容】

[0003]本發明研究了一種麒麟竭懸浮細胞培養的快速繁殖方法，本發明方法具有細胞工藝簡單，不受地域，季節的影響等特點，為麒麟竭的有效利用提供基礎。
[0004]為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案:
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養溫度25°C，光照強度1501x，每天光照8h，誘導出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.01-0.02mg/L+6-BAl-2mg/L+香蕉泥100_150mg/L的培養基中進行愈傷組織的繼代培養，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進行低溫保存。
[0005]采用本發明制備的麒麟竭懸浮細胞，生長速度快，儲藏良好，可以提供大量原料。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養溫度25°C，光照強度1501x,每天光照8h,誘導出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.0lmg/L+6-BAlmg/L+香蕉泥100mg/L的培養基中進行愈傷組織的繼代培養，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進行低溫保存，懸浮細胞的增長率70%。
[0008]實施例2
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養溫度25°C，光照強度1501x，每天光照8h，誘導出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.02mg/L+6-BA2mg/L+香蕉泥150mg/L的培養基中進行愈傷組織的繼代培養，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進行低溫保存，懸浮細胞增長率72%。
[0009]實施例3
取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊，消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養溫度25°C，光照強度1501x，每天光照8h，誘導出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.02mg/L+6-BA2mg/L+香蕉泥100mg/L的培養基中進行愈傷組織的繼代培養，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，溫度25°C，培養出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進行低溫保存，懸浮細胞增長率71%。
【權利要求】
1.一種麒麟竭懸浮細胞培養的快速繁殖方法，包括麒麟竭外植體的消毒、愈傷組織的誘導、愈傷組織的繼代、愈傷組織的保存，其主要步驟如下: (1)取麒麟竭的嫩葉，進行消毒處理； (2)將步驟(I)消毒處理過的麒麟竭嫩葉接種到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖40g/L，瓊脂7g/L，培養溫度25°C，光照強度1501x，每天光照8h ； (3)取步驟(2)誘導出來的愈傷組織接種入C17+NAA0.01-0.02mg/L+6-BAl-2mg/L+香蕉泥100-150mg/L的培養基中進行愈傷組織的繼代培養，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 3001χ，光期 12h/d，溫度 25 °C ； (4)將步驟(3)培養出來的顏色翠綠松散性良好的愈傷組織放入液氮中進行低溫保存。
2.按照權利要求1所述的一種麒麟竭懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中所述麒麟竭無菌葉片的獲得為取幼嫩的麒麟竭葉片流水沖洗0.5h，在超凈工作臺上，3%過氧化氫處理6min，無菌水沖洗干凈，切成0.4X0.4的正方體小塊。
【文檔編號】A01H4/00GK104221868SQ201410540400
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年10月14日 優先權日:2014年10月14日
【發明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農業科技有限公司