本發明涉及動物模型的建立方法，具體涉及一種棉酚誘導魚腸炎模型的建立方法。

背景技術：

棉粕是棉籽經過壓榨后得出的面餅，再經過浸出工藝將里面的大部分殘油分離出來，得到的一種微紅或黃色的顆粒狀物品，它是加工制造飼料的主要原料，其含有的粗蛋白可達40%，甚至高至44%，與豆粕的粗蛋白質含量不相上下；同時棉粕的價格較豆粕低廉，來源廣泛，我國的棉粕產量高，年產量為1200萬噸以上。因此，由于魚類的特殊生理特點，使得棉粕成為魚類飼料重要的優質廉價的蛋白質飼料源。而棉粕中含有的棉酚對養殖魚類動物有害，嚴重限制了其在魚類飼料中使用。但是棉酚對魚類產生有害作用的機理目前研究非常少，尚不清楚其對魚類有哪些毒害作用。

腸炎是養殖魚類，如草魚，最常見疾病之一。魚類腸炎的致死率通常在50%，有時甚至高達90%，是危害淡水養殖魚類最為嚴重的疾病。此病每年造成養殖魚類高達數億人民幣的災難性損失。

根據養殖魚類的生理特點，建立穩定的魚腸炎模型，是魚類腸炎病理機制研究和新型防治/或緩解魚腸炎的藥物/或營養組方篩選的良好工具。而如何建立穩定適宜的魚腸炎模型是目前急需解決的問題。在很多情況下，若采用不適宜方法建立的魚腸炎模型，容易導致魚腸炎病變過于嚴重進而導致魚類死亡，死亡率過高，魚腸炎模型不穩定，使魚腸炎模型應用受到限制。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種棉酚誘導魚腸炎模型的建立方法，使得建立的魚腸炎模型穩定，引起的腸炎病理表現是最適合的，既不會過于輕微也不會過于嚴重。

本發明通過下述技術方案實現：

一種棉酚誘導魚腸炎模型的建立方法，包括以下步驟：

選擇正常的養殖魚作為建立腸炎模型的對象；

取棉酚含量為250mg/kg的實驗飼料，飼喂上述養殖魚，得到棉酚誘導的魚腸炎模型。

本發明僅需要飼喂60天即可獲得魚腸炎病理表現合宜的魚腸炎模型，且獲得的魚腸炎模型的生產性能、免疫能力和肌肉品質略有下降，而不會嚴重阻礙魚的生長。

本發明通過研究發現：當棉酚含量低于250mg/kg時，魚的生產性能、腸道生長發育、免疫能力和肌肉品質的下降幅度較小，但是魚腸炎病理表現也過于輕微；當棉酚含量高于250mg/kg時，魚的生產性能、腸道生長發育、免疫能力和肌肉品質都有顯著的下降，而且魚腸炎病理表現過于嚴重，腸道上皮出現非常嚴重的空泡化，皺襞頂端的腸細胞脫落非常嚴重，腸上皮的結構和功能已嚴重受損，導致魚發病率升高，甚至魚死亡；當棉酚含量為250mg/kg時，致使腸道上皮出現明顯的空泡，皺襞頂端的腸細胞脫落明顯，魚腸炎病理表現是最適合的，且其生產性能、腸道生長發育、免疫能力和肌肉品質下降幅度較小。

一種棉酚誘導魚腸炎模型的建立方法，包括以下步驟：

選擇體重為230-727g的生長中期養殖魚作為建立腸炎模型的對象；

將棉酚混合于主要成分為魚粉、大豆濃縮蛋白、大米蛋白粉、玉米淀粉和α-淀粉的飼料中，配制成棉酚含量為250mg/kg的實驗飼料；

將上述實驗飼料每日按3wt%魚體重的量飼喂60天，獲得棉酚誘導的魚腸炎模型。

其中，制得的實驗飼料經制粒后，置于4℃溫度中保存備用。

其中，所述養殖魚包括但不限于草魚。

本發明與現有技術相比，具有如下的優點和有益效果：本發明采用棉酚誘導魚腸炎模型的建立方法對魚類的生產性能、腸道生長發育、免疫能力和肌肉品質影響最小，但引起的腸炎病理表現是最適合的，模型穩定可靠，重現性好。

附圖說明

此處所說明的附圖用來提供對本發明實施例的進一步理解，構成本申請的一部分，并不構成對本發明實施例的限定。在附圖中：

圖1為本發明實施例1的實驗魚腸道應用組織切片檢查腸道上皮形態的顯微照片，飼喂的實驗飼料中棉酚含量為0 mg/kg；

圖2為本發明實施例2的實驗魚腸道應用組織切片檢查腸道上皮形態的顯微照片，飼喂的實驗飼料中棉酚含量為125 mg/kg；

圖3為本發明實施例3的實驗魚腸道應用組織切片檢查腸道上皮形態的顯微照片，飼喂的實驗飼料中棉酚含量為250 mg/kg；

圖4為本發明實施例4的實驗魚腸道應用組織切片檢查腸道上皮形態的顯微照片，飼喂的實驗飼料中棉酚含量為375 mg/kg；

圖5為本發明實施例5的實驗魚腸道應用組織切片檢查腸道上皮形態的顯微照片，飼喂的實驗飼料中棉酚含量為775 mg/kg；

圖6為本發明實施例6的實驗魚腸道應用組織切片檢查腸道上皮形態的顯微照片，飼喂的實驗飼料中棉酚含量為1175 mg/kg。

具體實施方式

為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明白，下面結合實施例和附圖，對本發明作進一步的詳細說明，本發明的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本發明，并不作為對本發明的限定。

實施例l-6：一種棉酚誘導的魚腸炎模型的建立方法，包括以下步驟：

1、按常規方法將230-727g的生長中期草魚540尾作為建立腸炎模型的對象，隨機分為6個處理組，每組3重復，每個重復30尾魚。

2、制備含棉酚的實驗飼料

將棉酚均勻混合于主要成分為魚粉、大豆濃縮蛋白、大米蛋白粉、玉米淀粉和α-淀粉的飼料中，分別配制成棉酚含量為0、125、250、375、775和1175mg/kg的實驗飼料，制粒，置于4℃冰箱中保存備用；

3、模型的建立

將步驟1選擇的草魚飼養在1立方米的網箱中，每日按3wt%魚體重的量分別投喂上述步驟2所制備的實驗飼料60天，獲得棉酚誘導的魚腸炎模型。

上述實施例l-6獲得的魚腸炎模型結果檢驗如下：

4.1對實施例l-6獲得的棉酚誘導魚腸炎模型測定生產性能、腸道生長發育和肌肉品質，并將結果記錄于下表1。

表 1

注：上表1中，FE為飼料效率，可反映飼料的利用效率；SGR為特異性生長率，可反映魚類的生長速度；ISI和ILI分別為腸體比和腸長指數，可反映腸道的生長發育；剪切力和pH可反映肌肉的品質；上標a、b、c、d、e是采用多重比較的字母標記法來表征各組數據之間的差異顯著性，該多重比較的字母標記法是本領域技術人員常用的標注各數據之間是否具有顯著性差異的方法。

從上表1中可以看出，當棉酚含量大于250mg/kg后，魚類的生產性能顯著下降，腸道生長發育嚴重受阻，肌肉品質明顯下降。當棉酚含量低于或等于250mg/kg時，魚類的生產性能、腸道生長發育以及肌肉品質均略有下降，但影響較小。

4.2對實施例l-6獲得的棉酚誘導魚腸炎模型采用腹腔注射嗜水氣單胞菌的方式進行攻毒，以檢測魚腸道、脾臟和頭腎免疫和病菌抵抗能力，其結果具體如下表2所示。

表2

注：上表2中，上標a、b、c、d、e是采用多重比較的字母標記法來表征各組數據之間的差異顯著性。

從上表2中可以看出，當棉酚含量大于250mg/kg后，魚類的腸道、脾臟和頭腎免疫和病菌抵抗能力顯著下降，前腸、中腸和后腸紅腫充血發生率顯著升高，脾臟和頭腎充血腫大發病率也顯著增加。而當棉酚含量低于或等于250mg/kg時，魚類的腸道、脾臟和頭腎免疫和病菌抵抗能力略有下降。

4.3對實施例l-6獲得的棉酚誘導魚腸炎模型腸道應用組織切片檢查腸道上皮的形態變化，其結果如圖1-6所示。可見，如圖1所示，當棉酚含量為0 mg/kg時，腸道上皮形態結構正常；如圖2所示，當棉酚含量大于0 mg/kg且小于250mg/kg時，腸道上皮細胞出現輕微空泡化，皺襞兩側上皮細胞出現輕微脫落，部分皺襞頂端變為平頂，魚腸炎病理表現過于輕微；如圖3所示，當棉酚含量為250mg/kg時，腸道上皮出現明顯的空泡增多，皺襞頂端的腸細胞脫落明顯，魚腸炎病理表現是最適合的；如圖4-6所示，當棉酚含量大于250mg/kg后，腸道上皮出現非常嚴重的空泡化，皺襞頂端的腸細胞脫落非常嚴重，腸上皮的結構和功能已嚴重受損，魚腸炎病理表現過于嚴重，導致發病率顯著升高，甚至出現魚死亡。

綜上，本發明采用250mg/kg的棉酚誘導魚腸炎模型的建立方法對魚類的生產性能、腸道生長發育、免疫能力和肌肉品質影響最小，但引起的腸炎病理表現是最適合的，模型穩定可靠，重現性好。且本發明所述的方法能夠廣泛適用于各種養殖魚，包括但不限于實施例所列舉的草魚。

以上所述的具體實施方式，對本發明的目的、技術方案和有益效果進行了進一步詳細說明，所應理解的是，以上所述僅為本發明的具體實施方式而已，并不用于限定本發明的保護范圍，凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。