本發明涉及煙草抗青枯病抗病性強弱的室內苗期接種鑒定方法。

背景技術：

感染青枯病的植株，最初，地上部分未見任何異常現象的植株，白天突然失去生機，整個地上部均枯萎。陰天和早晚有所恢復，如同健株，然而，不久之后便枯萎，呈青枯癥狀，這一過程進展十分迅猛。是一種廣泛分布于熱帶、亞熱帶和某些溫帶地區的世界性病害，是多種農作物減產的主要原因。青枯病菌，可以同病株殘體一同進入土壤。長期生存形成侵染源。如何鑒定煙草品種的抗青枯病的抗病性強弱，挑選抗青枯病的煙草品種極為重要。

技術實現要素：

本發明提出了一種煙草抗青枯病抗病性強弱的室內苗期接種鑒定方法，能夠有效鑒定煙草品種的抗青枯病的抗病性強弱。

本發明的技術方案是這樣實現的：煙草抗青枯病抗病性強弱的室內苗期接種鑒定方法，包括以下步驟：

步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種以及已知感青枯病品種；

步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度28-30℃，相對濕度為80％以上的環境中，誘導發病；

步驟三，檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱。

進一步，每株煙苗灌15-25mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數為2.5×10⁸-3.5×10⁸CFU/mL。

進一步，步驟二中移栽至室內的每個品種至少種植5株煙苗，設置至少3次重復。

進一步，所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養基平板上劃線，28-30℃下培養22-26h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，27-29℃培養22-26h后移至肉汁斜面，繼續培養22-26h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度。

進一步，步驟三中通過檢測各品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱。發病率＝(發病株數/調查總株數)*100％；病情指數＝[Σ(各級病株或葉數*該病級值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數/調查總株數)*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數/調查總株數]*100％；蚜量指數＝[Σ(各級葉數*該級別值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數；百株蟲量＝(總蟲量/總株數)*100；有卵株率＝(有卵株數/調查總株數)*100％；青枯病病害嚴重度分級為：0級：全株無病；1級：莖部偶有褪綠斑，或病側二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。

步驟三種接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調查，每次均調查各品種全部植株。

本發明的有益效果為：本發明的煙草抗青枯病抗病性強弱的室內苗期接種鑒定方法，能夠有效鑒定煙草品種的抗青枯病的抗病性強弱。能夠在煙田煙草選種方面起到關鍵的作用。

具體實施方式

為更好地理解本發明，下面通過以下實施例對本發明作進一步具體的闡述，但不可理解為對本發明的限定，對于本領域的技術人員根據上述發明內容所作的一些非本質的改進與調整，也視為落在本發明的保護范圍內。

實施例1

煙草抗青枯病抗病性強弱的室內苗期接種鑒定方法，包括以下步驟：

步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種以及已知感青枯病品種；

步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內，每個品種種植5株煙苗，設置3次重復，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度28℃，相對濕度為80％以上的環境中，誘導發病；每株煙苗灌15mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數為2.5×10⁸CFU/mL；所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養基平板上劃線，28℃下培養26h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，27℃培養26h后移至肉汁斜面，繼續培養26h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度；

步驟三，接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調查，每次均調查各品種全部植株，通過檢測各品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱；發病率＝(發病株數/調查總株數)*100％；病情指數＝[Σ(各級病株或葉數*該病級值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數/調查總株數)*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數/調查總株數]*100％；蚜量指數＝[Σ(各級葉數*該級別值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數；百株蟲量＝(總蟲量/總株數)*100；有卵株率＝(有卵株數/調查總株數)*100％；青枯病病害嚴重度分級為：0級：全株無病；1級：莖部偶有褪綠斑，或病側二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。

實施例2

步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種、已知感青枯病品種、當地抗青枯病品種、當地中抗青枯病品種以及當地感青枯病品種；

步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內，每個品種種植6株煙苗，設置4次重復，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度30℃，相對濕度為80％以上的環境中，誘導發病；每株煙苗灌25mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數為3.5×10⁸CFU/mL；所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養基平板上劃線，30℃下培養22h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，29℃培養22h后移至肉汁斜面，繼續培養22h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度；

步驟三，接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調查，每次均調查各品種全部植株，通過檢測各品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱；發病率＝(發病株數/調查總株數)*100％；病情指數＝[Σ(各級病株或葉數*該病級值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數/調查總株數)*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數/調查總株數]*100％；蚜量指數＝[Σ(各級葉數*該級別值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數；百株蟲量＝(總蟲量/總株數)*100；有卵株率＝(有卵株數/調查總株數)*100％；青枯病病害嚴重度分級為：0級：全株無病；1級：莖部偶有褪綠斑，或病側二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。

實施例3

步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種以及已知感青枯病品種；

步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內，每個品種至少種植5株煙苗，設置至少3次重復，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度28-30℃，相對濕度為80％以上的環境中，誘導發病；每株煙苗灌20mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數為3×10⁸CFU/mL；所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養基平板上劃線，29℃下培養24h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28℃培養24h后移至肉汁斜面，繼續培養24h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度；

步驟三，接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調查，每次均調查各品種全部植株，通過檢測各品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱；發病率＝(發病株數/調查總株數)*100％；病情指數＝[Σ(各級病株或葉數*該病級值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數/調查總株數)*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數/調查總株數]*100％；蚜量指數＝[Σ(各級葉數*該級別值)/(調查總株數或葉數*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數；百株蟲量＝(總蟲量/總株數)*100；有卵株率＝(有卵株數/調查總株數)*100％；青枯病病害嚴重度分級為：0級：全株無病；1級：莖部偶有褪綠斑，或病側二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。

待鑒定煙草品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率與已知抗青枯病煙草品種和/或當地的抗青枯病煙草品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率相同或者相近的品種為抗青枯病品種；

待鑒定煙草品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率與當地的中抗青枯病煙草品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率相同或者相近的品種為中抗青枯病品種；

待鑒定煙草品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率與已知感青枯病煙草品種和/或當地的感青枯病煙草品種的發病率和/或病情指數和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率相同或者相近的品種為感青枯病品種。

以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。