本發明涉及一種鐵皮石斛的栽培方法，特別是一種多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法。

背景技術：

鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內障等方面均有良好療效。

現代藥理學研究表明，鐵皮石斛對非特異性及特異性免疫均有增強作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學成分較復雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。多糖類成分是藥用石斛發揮免疫活性作用的重要物質基礎，鐵皮石斛多糖能顯著提高外周白細胞數，促進淋巴細胞產生移動抑制因子，可有效提高機體免疫力。2010版《藥典》首次收載了鐵皮石斛的質量標準，對多糖以及甘露糖進行含量測定。

隨著鐵皮石斛的保健功效被人們廣泛的認識和接受，野生鐵皮石斛已遠遠不能滿足人們的需求。人們已經開始采用人工栽培鐵皮石斛，鐵皮石斛的栽培方法中，培養基是鐵皮石斛賴以生存的條件，不同的培養原料和配方可對鐵皮石斛的生長、產量和活性成分等產生重要的影響。現有技術中鐵皮石斛用的培養基及現有栽培方法，，不利于產出的鐵皮石斛的品質保證。特別是不能保證鐵皮石斛中多糖的含量，使得最終得到的鐵皮石斛中多糖含量低。

技術實現要素：

本發明的目的，是提供一種多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，本發明方法培養鐵皮石斛時，最終產出的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是多糖的含量的高。

本發明是這樣實現的。

一種品質好的鐵皮石斛的栽培方法，包括苗床準備、幼苗繁育、幼苗移栽、移栽后的管理和采收。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法，具體包括以下步驟：

(1)苗床準備：選擇寬10-15m，高4-6m，長40-50m的大棚，在大棚1-1.5m的上方鋪設遮陽網，在大棚內離地面2.5-3.5m的上方鋪設保溫網；

(2)幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養基中，進行無菌繁殖培養，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養瓶中進行培養，每個培養瓶中培養30-45株幼苗；

(3)幼苗的移栽：移栽時間為4-6月，培養瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

(4)移栽后的管理；

(5)采收：剪下三年生以上的莖枝，留下嫩莖讓其繼續生長。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法步驟(4)移栽后的管理為：

A.澆水：采用噴施方式，澆水次數為1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次；

B.除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施硝酸鉀或磷酸二氫鉀，每隔5-8天噴施一次，成活后每10-15天噴施一次硝酸鉀或磷酸二氫鉀；

C.溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

D.病蟲害防治：每月用濃度為1-2‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網，兩年后即可采收。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法步驟(2)幼苗繁育中，所述的培養基主要由按重量份計算的檸檬酸1-10份、蛋白胨10-20份、馬鈴薯50-60份、香蕉50-60份、瓊脂20-30份、雪膽5-15份、金蕎麥10-20份、大血藤5-15份、紫珠10-20份和麻布袋1-8份按下述方法制備：取雪膽、金蕎麥、大血藤、紫珠和麻布袋，粉碎成細顆粒后，加8-12倍量水煎煮2-3h，收集煎煮液，得A品；將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；瓊脂在室溫下加3-5倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；F品加入E品中，混勻，得G品；G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌20-30分鐘，冷卻凝固后即得。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法所述培養基主要由按重量份計算的檸檬酸5份、蛋白胨15份、馬鈴薯55份、香蕉55份、瓊脂25份、雪膽10份、金蕎麥15份、大血藤10份、紫珠15份和麻布袋4份按下述方法制備：取雪膽、金蕎麥、大血藤、紫珠和麻布袋，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；F品加入E品中，混勻，得G品；G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法步驟(3)幼苗的移栽中，所述基質主要由按重量份計算的泥炭50-60份、樹皮渣30-40份、刨花顆粒30-50份和中藥渣30-40份混合而成。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法所述基質主要由按重量份計算的泥炭55份、樹皮渣35份、刨花顆粒40份和中藥渣35份混合而成。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法所述中藥渣主要由按重量份計算的枸杞葉1-10份、苦楝皮1-6份、川楝子1-4份和南蛇藤1-12份按下述方法制備：取枸杞葉、苦楝皮、川楝子和南蛇藤，加8-12倍量水煎煮2-3h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

前述的品質好的鐵皮石斛的栽培方法所述中藥渣主要由按重量份計算的枸杞葉5份、苦楝皮3份、川楝子2份和南蛇藤6份按下述方法制備：取枸杞葉、苦楝皮、川楝子和南蛇藤，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

申請人對本發明進行了大量的實驗研究，部分實驗如下：

實驗例1多糖含量考察.

1材料與方法

1.1材料

1.1.1鐵皮石斛1：按實施例1進行栽培后，采收得到鐵皮石斛1。

1.1.2鐵皮石斛2：栽培時，培養基中不含雪膽、金蕎麥、大血藤、紫珠和麻布袋，其余方法同實施例1進行栽培后，采收得到鐵皮石斛2。

1.2儀器和試劑

葡萄糖標準品[D一(+)一葡萄糖]：KAYON公司；甲醇(色譜純)：天津市科密歐化學試劑有限公司；其余試劑均為分析純；苯酚：上海凌峰化學試劑有限公司；硫酸：上海凌峰化學試劑有限公司。

2方法

2.1供試品溶液的制備

2.1.1供試品溶液1的制備：

取本發明鐵皮石斛(鐵皮石斛1)樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末，揮干溶劑，加水2000mL，加熱回流2小時，放冷，轉移至250mL量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2mL，置15mL離心管中，精密加入95％乙醇，搖勻，冷藏1小時，取出，離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液1。

2.1.2供試品溶液2的制備

取鐵皮石斛2樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末，揮干溶劑，加水2000mL，加熱回流2小時，放冷，轉移至250mL量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2mL，置15mL離心管中，精密加入95％乙醇，搖勻，冷藏1小時，取出，離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液2。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖適量，加水制成99mg/L溶液，備用。

2.3標準曲線制備

精密量取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置10mL具塞試管中，加水至1.0mL，精密加入5％苯酚溶液1mL(I臨用前現配制)，搖勻，再精密加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20分鐘，取出，放入冰水浴中冷卻5分鐘，以相應的試劑為空白，在488nm波長處測定吸光度，以吸光度Y為縱坐標，濃度X(g/L)為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為：Y＝11.772X-0.1492，r＝0.9995。結果表明多糖在0.02-0.10g/L范圍內線性關系良好。

2.4測定法

分別精密量取供試品溶液1和供試品溶液2各0.5mL，置10mL具塞試管中，加水至1mL，按“2.3”標準曲線的制備項下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液1mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的含量，計算，即得。

2.5精密度試驗

精密吸取葡萄糖對照品溶液6份，每份0.6mL，按照“2.4”項下的方法測定吸光度。測定結果，RSD分別為1.60％和1.62％，精密度良好。

2.6重復性試驗

按上述方法制備6份供試品溶液1和供試品溶液2，照按上述方法測定吸光度。測定結果，RSD分別為2.70％和2.71％，重復性良好。

2.7穩定性試驗

分別取同一供試品溶液1和供試品溶液2，在室溫下放置，分別于10min、30min、1h、2h、4h、6h后按上述方法測定吸光度。測定結果，RSD分別為2.70％和2.73％，表明供試品溶液1和供試品溶液2均在6小時內穩定。

2.8加樣回收率試驗

稱取已知含量(12.5％)的鐵皮石斛1粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準確加入葡萄糖對照品溶液(濃度為0.099g/L)2mL，按上述方法制備供試品溶液1，按上述方法測定，計算多糖含量，結果平均回收率為94.9％，RSD為2.7％。

稱取已知含量(12.5％)的鐵皮石斛2粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準確加入葡萄糖對照品溶液(濃度為0.099g/L)2mL，按上述方法制備供試品溶液2，按上述方法測定，計算多糖含量，結果平均回收率為93.9％，RSD為2.6％。

2.9樣品測定

按上述供試品溶液1和供試品溶液2的制備方法和測定條件，測定6份鐵皮石斛1樣品和6份鐵皮石斛2樣品中多糖的含量，記錄結果，結果取平均值，結果見表1。

表1多糖含量測定結果

由表可知，本發明方法栽培得到的鐵皮石斛，最終采收的鐵皮石斛中多糖的含量較高。鐵皮石斛的品質好。

與現有技術相比，本發明方法培養鐵皮石斛時，最終產出的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是多糖的含量的高。

具體實施方式

實施例1。

培養基配方：檸檬酸50kg、蛋白胨150kg、馬鈴薯550kg、香蕉550kg、瓊脂250kg、雪膽100kg、金蕎麥150kg、大血藤100kg、紫珠150kg和麻布袋40kg。

培養基制作：

1、取雪膽、金蕎麥、大血藤、紫珠和麻布袋，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；

2、將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；

3、將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；

4、B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；

5、香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；

6、瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；

7、F品加入E品中，混勻，得G品；

8、G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

中藥渣制備：取枸杞葉50kg、苦楝皮30kg、川楝子20kg和南蛇藤60kg，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

基質制備：取泥炭550kg、樹皮渣350kg、刨花顆粒400kg和中藥渣350kg混合而成。

鐵皮石斛的栽培方法：

1、苗床準備：選擇寬12m，高5m，長45m的大棚，在大棚1.2m的上方鋪設遮陽網，在大棚內離地面3m的上方鋪設保溫網；

2、幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養基中，進行無菌繁殖培養，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養瓶中進行培養，每個培養瓶中培養30-45株幼苗；

3、幼苗的移栽：移栽時間為4月中旬，培養瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

4、移栽后的管理：

A.澆水：采用噴施方式，澆水次數為1-3月份2天1次，3-6月份2天1次，6-9月份6天1次，9-12月份3天1次；

B.除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施硝酸鉀，每隔5-8天噴施一次，成活后每10-15天噴施一次磷酸二氫鉀；

C.溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

D.病蟲害防治：每月用濃度為1-2‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網，兩年后即可采收；

采收：剪下三年生以上的莖枝，留下嫩莖讓其繼續生長。

實施例2。

培養基配方：檸檬酸10kg、蛋白胨20kg、馬鈴薯60kg、香蕉60kg、瓊脂30kg、雪膽15kg、金蕎麥20kg、大血藤15kg、紫珠20kg和麻布袋8kg。

培養基制作：

1、取雪膽、金蕎麥、大血藤、紫珠和麻布袋，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；

2、將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；

3、將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；

4、B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；

5、香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；

6、瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；

7、F品加入E品中，混勻，得G品；

8、G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

中藥渣制備：取枸杞葉50kg、苦楝皮30kg、川楝子20kg和南蛇藤60kg，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

基質制備：取泥炭550kg、樹皮渣350kg、刨花顆粒400kg和中藥渣350kg混合而成。

鐵皮石斛的栽培方法：

1、苗床準備：選擇寬12m，高5m，長45m的大棚，在大棚1.2m的上方鋪設遮陽網，在大棚內離地面3m的上方鋪設保溫網；

2、幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養基中，進行無菌繁殖培養，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養瓶中進行培養，每個培養瓶中培養30-45株幼苗；

3、幼苗的移栽：移栽時間為4月中旬，培養瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

4、移栽后的管理：

A.澆水：采用噴施方式，澆水次數為1-3月份2天1次，3-6月份2天1次，6-9月份6天1次，9-12月份3天1次；

B.除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施硝酸鉀，每隔5-8天噴施一次，成活后每10-15天噴施一次磷酸二氫鉀；

C.溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

D.病蟲害防治：每月用濃度為1-2‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網，兩年后即可采收；

采收：剪下三年生以上的莖枝，留下嫩莖讓其繼續生長。

實施例3。

培養基配方：檸檬酸1kg、蛋白胨10kg、馬鈴薯50kg、香蕉50kg、瓊脂20kg、雪膽5kg、金蕎麥10kg、大血藤5kg、紫珠10kg和麻布袋1kg。

培養基制作：

1、取雪膽、金蕎麥、大血藤、紫珠和麻布袋，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；

2、將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；

3、將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；

4、B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；

5、香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；

6、瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；

7、F品加入E品中，混勻，得G品；

8、G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

中藥渣制備：取枸杞葉50kg、苦楝皮30kg、川楝子20kg和南蛇藤60kg，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

基質制備：取泥炭550kg、樹皮渣350kg、刨花顆粒400kg和中藥渣350kg混合而成。

鐵皮石斛的栽培方法：

1、苗床準備：選擇寬12m，高5m，長45m的大棚，在大棚1.2m的上方鋪設遮陽網，在大棚內離地面3m的上方鋪設保溫網；

2、幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養基中，進行無菌繁殖培養，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養瓶中進行培養，每個培養瓶中培養30-45株幼苗；

3、幼苗的移栽：移栽時間為4月中旬，培養瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

4、移栽后的管理：

A.澆水：采用噴施方式，澆水次數為1-3月份2天1次，3-6月份2天1次，6-9月份6天1次，9-12月份3天1次；

B.除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施硝酸鉀，每隔5-8天噴施一次，成活后每10-15天噴施一次磷酸二氫鉀；

C.溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

D.病蟲害防治：每月用濃度為1-2‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網，兩年后即可采收；

采收：剪下三年生以上的莖枝，留下嫩莖讓其繼續生長。