本發明涉及農藥技術領域，具體是一種生物農藥的制備方法。

背景技術：

在公知的技術領域，生物農藥因為對環境友好的特質，近年來發展比較迅速，而且也受到各國政府的高度重視，通過簡化登記流程、降低登記門檻等措施為生物農藥的開發提供便利。因此，生物農藥已成為新農藥開發的一個非常活躍的領域。生物農藥目前的市場約為15～20億美元，約占全球農藥市場的5%，雖然占比較低，但在整個農藥市場增長緩慢的背景下生物農藥一直保持著一個非常快的增長勢頭，從2006年占農藥市場的不到1%增長到目前約5%。目前最大的生物農藥市場在美國，占全球市場份額的40%以上。歐洲排第二，占總數的25%，亞洲占20%左右排第三，拉丁美洲約占10%。全球生物農藥市場是生物農藥中規模最大的，約為9億美元，植物源農藥位居次席，約5億美元，并以每年10%～15%的速度增長。生物農藥是一個比較大的范疇，里邊包含很多種品種，銷售狀況也因地區而已，因此不能僅僅因為整個市場表現良好就得出個別品種也具有良好發展前景的結論。而且，相比植物源農藥，隨著現代基因工程和發酵工程技術的不斷進步，使得微生物源農藥往往更具成本優勢。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種生物農藥的制備方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種生物農藥的制備方法，包括以下步驟：

（1）預處理：分別稱取芥末、辣椒、大蒜、花椒、醋、咖喱、生姜、夏枯草、荷葉、茴香、肉桂、橘皮、魚腥草、梔子，去除雜質，使用超微粉碎機進行處理，過100-200目篩，晾干，備用；

（2）發酵：將芥末、辣椒、夏枯草、荷葉、魚腥草放入發酵罐中，加醋、果膠酶、淀粉酶及纖維素酶后密封，控制溫度在30-40℃，發酵5-7天，拆封并過濾，制得發酵液；

（3）純化：將發酵液離心，離心轉速為10000-12000r/min，離心時間為10-20min，離心后取上清液，加入上清液3倍體積的70%乙醇，混勻后靜置10min，接著進行超濾，超濾膜選用截留分子量為100或120或150kDa，反復進行三次，收集濾液，進行減壓蒸發，即得組分A；

（4）超臨界二氧化碳萃取：將大蒜、花椒、咖喱、生姜、茴香、肉桂、橘皮、梔子加入到超臨界二氧化碳萃取機中，設置壓強為20-30MPa，采用95%乙醇為萃取洗脫劑，萃取劑溫度設置為40-45℃，分離溫度設置為48-50℃，萃取時間為3-3.5h；萃取結束后，收集萃取液，進行減壓濃縮，即得組分B；

（5）混合成品：將組分A與組分B攪拌混勻后，質檢合格后即得。

作為本發明進一步的方案：具體步驟（1）中過150目篩。

作為本發明進一步的方案：具體步驟（2）中控制溫度在35℃，發酵6天。

作為本發明進一步的方案：具體步驟（3）中離心轉速為11000r/min，離心時間為15min。

作為本發明進一步的方案：具體步驟（3）中超濾膜選用截留分子量為120kDa。

作為本發明進一步的方案：具體步驟（4）中設置壓強為25MPa。

作為本發明進一步的方案：具體步驟（4）中萃取劑溫度設置為43℃，分離溫度設置為49℃，萃取時間為3.3h。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

（1）對人畜安全：本發明只針對病蟲害有作用，一般對人、畜及各種有益生物(包括動物天敵、昆蟲天敵、蜜蜂、傳粉昆蟲及魚、蝦等水生生物)比較安全，對非靶標生物的影響也比較小；（2）對生態環境影響小：本發明的有效活性成分完全存在和來源于天然草本植物和自然生態系統，它的最大特點是極易被日光、植物或各種土壤微生物分解，是一種來于自然，歸于自然正常的物質循環方式；因此，可以認為它們對自然生態環境安全、無污染；（3）可利用野生植物進行生產加工：本發明中原材料的來源十分廣泛、生產成本比較低廉，因此，生產生物農藥一般不會產生與利用不可再生資源(如石油、煤、天然氣等)生產化工合成產品爭奪原材料的矛盾，有利于人類自然資源保護和永久利用；（4）生產設備通用性較好：本發明中所用設備為通用設備，一般主要包括：粉碎機、發酵罐、離心裝置、濃縮裝置、過濾系統和干燥裝置等，該類設備一般可以滿足進行大規模工業化生產的要求；（5）產品改良的技術潛力大：可以利用常規技術、基因工程技術和微生物發酵工程技術改良的生產性能；優化活性成份提取工藝流程；提高生產效率；縮短生產周期；減少原材料消耗；降低生產使用成本；改進產品性能及提高防治效果的穩定性、速效性和持效性等；技術改進的途徑多，發展潛力巨大。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本專利的技術方案作進一步詳細地說明。

實施例1

一種生物農藥的制備方法，包括以下步驟：

（1）預處理：分別稱取芥末、辣椒、大蒜、花椒、醋、咖喱、生姜、夏枯草、荷葉、茴香、肉桂、橘皮、魚腥草、梔子，去除雜質，使用超微粉碎機進行處理，過100目篩，晾干，備用；

（2）發酵：將芥末、辣椒、夏枯草、荷葉、魚腥草放入發酵罐中，加醋、果膠酶、淀粉酶及纖維素酶后密封，控制溫度在30℃，發酵5天，拆封并過濾，制得發酵液；

（3）純化：將發酵液離心，離心轉速為10000r/min，離心時間為10min，離心后取上清液，加入上清液3倍體積的70%乙醇，混勻后靜置10min，接著進行超濾，超濾膜選用截留分子量為100kDa，反復進行三次，收集濾液，進行減壓蒸發，即得組分A；

（4）超臨界二氧化碳萃取：將大蒜、花椒、咖喱、生姜、茴香、肉桂、橘皮、梔子加入到超臨界二氧化碳萃取機中，設置壓強為20MPa，采用95%乙醇為萃取洗脫劑，萃取劑溫度設置為40℃，分離溫度設置為48℃，萃取時間為3h；萃取結束后，收集萃取液，進行減壓濃縮，即得組分B；

（5）混合成品：將組分A與組分B攪拌混勻后，質檢合格后即得。

實施例2

一種生物農藥的制備方法，包括以下步驟：

（1）預處理：分別稱取芥末、辣椒、大蒜、花椒、醋、咖喱、生姜、夏枯草、荷葉、茴香、肉桂、橘皮、魚腥草、梔子，去除雜質，使用超微粉碎機進行處理，過120目篩，晾干，備用；

（2）發酵：將芥末、辣椒、夏枯草、荷葉、魚腥草放入發酵罐中，加醋、果膠酶、淀粉酶及纖維素酶后密封，控制溫度在33℃，發酵5天，拆封并過濾，制得發酵液；

（3）純化：將發酵液離心，離心轉速為10500r/min，離心時間為13min，離心后取上清液，加入上清液3倍體積的70%乙醇，混勻后靜置10min，接著進行超濾，超濾膜選用截留分子量為100kDa，反復進行三次，收集濾液，進行減壓蒸發，即得組分A；

（4）超臨界二氧化碳萃取：將大蒜、花椒、咖喱、生姜、茴香、肉桂、橘皮、梔子加入到超臨界二氧化碳萃取機中，設置壓強為23MPa，采用95%乙醇為萃取洗脫劑，萃取劑溫度設置為42℃，分離溫度設置為48℃，萃取時間為3.1h；萃取結束后，收集萃取液，進行減壓濃縮，即得組分B；

（5）混合成品：將組分A與組分B攪拌混勻后，質檢合格后即得。

實施例3

一種生物農藥的制備方法，包括以下步驟：

（1）預處理：分別稱取芥末、辣椒、大蒜、花椒、醋、咖喱、生姜、夏枯草、荷葉、茴香、肉桂、橘皮、魚腥草、梔子，去除雜質，使用超微粉碎機進行處理，過150目篩，晾干，備用；

（2）發酵：將芥末、辣椒、夏枯草、荷葉、魚腥草放入發酵罐中，加醋、果膠酶、淀粉酶及纖維素酶后密封，控制溫度在35℃，發酵6天，拆封并過濾，制得發酵液；

（3）純化：將發酵液離心，離心轉速為11000r/min，離心時間為15min，離心后取上清液，加入上清液3倍體積的70%乙醇，混勻后靜置10min，接著進行超濾，超濾膜選用截留分子量為120kDa，反復進行三次，收集濾液，進行減壓蒸發，即得組分A；

（4）超臨界二氧化碳萃取：將大蒜、花椒、咖喱、生姜、茴香、肉桂、橘皮、梔子加入到超臨界二氧化碳萃取機中，設置壓強為25MPa，采用95%乙醇為萃取洗脫劑，萃取劑溫度設置為43℃，分離溫度設置為49℃，萃取時間為3.3h；萃取結束后，收集萃取液，進行減壓濃縮，即得組分B；

（5）混合成品：將組分A與組分B攪拌混勻后，質檢合格后即得。

實施例4

一種生物農藥的制備方法，包括以下步驟：

（1）預處理：分別稱取芥末、辣椒、大蒜、花椒、醋、咖喱、生姜、夏枯草、荷葉、茴香、肉桂、橘皮、魚腥草、梔子，去除雜質，使用超微粉碎機進行處理，過180目篩，晾干，備用；

（2）發酵：將芥末、辣椒、夏枯草、荷葉、魚腥草放入發酵罐中，加醋、果膠酶、淀粉酶及纖維素酶后密封，控制溫度在37℃，發酵7天，拆封并過濾，制得發酵液；

（3）純化：將發酵液離心，離心轉速為11500r/min，離心時間為17min，離心后取上清液，加入上清液3倍體積的70%乙醇，混勻后靜置10min，接著進行超濾，超濾膜選用截留分子量為150kDa，反復進行三次，收集濾液，進行減壓蒸發，即得組分A；

（4）超臨界二氧化碳萃取：將大蒜、花椒、咖喱、生姜、茴香、肉桂、橘皮、梔子加入到超臨界二氧化碳萃取機中，設置壓強為28MPa，采用95%乙醇為萃取洗脫劑，萃取劑溫度設置為44℃，分離溫度設置為50℃，萃取時間為3.4h；萃取結束后，收集萃取液，進行減壓濃縮，即得組分B；

（5）混合成品：將組分A與組分B攪拌混勻后，質檢合格后即得。

實施例5

一種生物農藥的制備方法，包括以下步驟：

（1）預處理：分別稱取芥末、辣椒、大蒜、花椒、醋、咖喱、生姜、夏枯草、荷葉、茴香、肉桂、橘皮、魚腥草、梔子，去除雜質，使用超微粉碎機進行處理，過200目篩，晾干，備用；

（2）發酵：將芥末、辣椒、夏枯草、荷葉、魚腥草放入發酵罐中，加醋、果膠酶、淀粉酶及纖維素酶后密封，控制溫度在40℃，發酵7天，拆封并過濾，制得發酵液；

（3）純化：將發酵液離心，離心轉速為12000r/min，離心時間為20min，離心后取上清液，加入上清液3倍體積的70%乙醇，混勻后靜置10min，接著進行超濾，超濾膜選用截留分子量為150kDa，反復進行三次，收集濾液，進行減壓蒸發，即得組分A；

（4）超臨界二氧化碳萃取：將大蒜、花椒、咖喱、生姜、茴香、肉桂、橘皮、梔子加入到超臨界二氧化碳萃取機中，設置壓強為30MPa，采用95%乙醇為萃取洗脫劑，萃取劑溫度設置為45℃，分離溫度設置為50℃，萃取時間為3.5h；萃取結束后，收集萃取液，進行減壓濃縮，即得組分B；

（5）混合成品：將組分A與組分B攪拌混勻后，質檢合格后即得。

上面對本專利的較佳實施方式作了詳細說明，但是本專利并不限于上述實施方式，在本領域的普通技術人員所具備的知識范圍內，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下做出各種變化。