本發明屬于培養基制備
技術領域:
,具體涉及一種牛大力抗病毒組織培養基。
背景技術:
:牛大力,別名豬腳笠、金鐘根、山蓮藕、倒吊金鐘、大力薯,為豆科豆科崖豆藤屬植物,其主要成分為蛋白質、淀粉質及生物堿等。牛大力以根入藥,全年可采挖,為傳統的藥食同源植物。牛大力性平、味甘,有補腎潤肺、強筋活絡的功效,常用于治療腰肌勞損、風濕性關節炎、肺結核、慢性支氣管炎、慢性肝炎等病癥。牛大力除了入藥煎劑外,亦常為廣東民間入湯做食療、藥膳之用。牛大力有效成分有高麗槐素、芒柄花素、查爾酮類化合物、異黃酮類、糠醛、牛大力多糖等,這些成分具有抗炎殺菌、免疫調節作用,并由一定抗氧化和清除自由基作用。牛大力經采挖后,經清洗、晾曬可直接入藥,也可用于食用,更可經深加工,制成牛大力保健酒、牛大力花茶等深加工產品。牛大力是制藥企業加工中成藥、保健品的常用原料,近年來,隨著我國中醫藥事業蓬勃發展,人們生活水平逐漸提高,保健意識不斷增強,牛大力的市場需求也在不斷擴大。目前,牛大力的繁殖方法主要有種子繁育、扦插繁育、組織培養繁育等幾種模式。種子繁育及扦插培養對牛大力種苗本身要求較高,且培育周期較長,不利于牛大力種植推廣;因此,選擇優良的牛大力種苗,采用組織培養的模式進行繁育,是一種高效繁育培養牛大力的方法,能大大縮短牛大力的培育時間,且提高牛大力幼苗的成活率,繁育所得植株健康,有利于提高牛大力的結薯能力及產量。在植物組織培養過程中,根據植物生長發育過程所需求的養分不同,可分為三種培養基,分別為誘導分化培養基、生根培養基、壯苗組織培養基。組織培養基起到促進組培苗生長發育的目的,在提供給組培苗養分的同時,還能提升組培苗對養分的吸收能力,間接地移栽成活率。針對不同的植物,組織培養基的成分也應有所區別。由于組織培養基中含有大量無機物和有機物,有可能會導致病毒的生長,不利于組培苗的健康生長。銀杏葉提取物中含有黃酮類、生物堿類物質,經臨床試驗證明,其具有良好的抗病毒效果。將銀杏葉提取物添加進組織培養基,能夠有效抑制培養基產生病毒。以上
背景技術:
內容的公開僅用于輔助理解本發明的發明構思及技術方案,其并不必然屬于本專利申請的現有技術,在沒有明確的證據表明上述內容在本專利申請的申請日已經公開的情況下,上述
背景技術:
不應當用于評價本申請的新穎性和創造性。技術實現要素:本發明要解決的技術問題是提供一種牛大力抗病毒組織培養基,該培養基在提供給種苗必要成分的同時,能夠起到抗病毒效果。為了解決以上技術問題,本發明采用以下技術方案:一種牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂45~120g、葡萄糖10~30g、激素0.2~0.9g、無機鹽溶液4~18g、α-萘乙酸鈉0.1~0.8g、銀杏葉提取物0.1~0.7g、核黃素0.2~1.2g、玉米素0.2~1.5g、水解酪蛋白15~35g、有機物42~100g、三蒸水30~130g。優選地,所述的牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂50~110g、葡萄糖12~25g、激素0.3~0.8g、無機鹽溶液5~15g、α-萘乙酸鈉0.2~0.8g、銀杏葉提取物0.2~0.6g、核黃素0.3~1g、玉米素0.3~1.2g、水解酪蛋白16~30g、有機物50~85g、三蒸水35~110g。優選地,所述的牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂60~90g、葡萄糖15~20g、激素0.5~0.7g、無機鹽溶液6~12g、α-萘乙酸鈉0.3~0.7g、銀杏葉提取物0.3~0.5g、核黃素0.4~0.8g、玉米素0.4~1g、水解酪蛋白18~26g、有機物60~80g、三蒸水40~100g。優選地,所述的牛大力抗病毒組織培養基,所述有機物包括土豆泥、蘋果泥、香蕉泥中的一種。優選地,所述的牛大力抗病毒組織培養基,所述激素包括naa、6-ba、iba、aba中的一種。更優選地,所述的牛大力抗病毒組織培養基,所述的無機鹽溶液中的無機鹽包括硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣中的一種或幾種。更優選地,所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,包括以下步驟:s1:激素先用少量95%酒精溶解后,加入去離子水配置成溶液;s2:葡萄糖使用去離子水配置成10%的溶液;s3:向燒杯中加入三蒸水,接著加入s1所得的激素溶液、無機鹽溶液、α-萘乙酸鈉、銀杏葉提取物、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、有機物,充分攪拌;s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液,充分攪拌,使用10%naoh和10%hcl溶液調節至體系ph值為5~6.6;s5:向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂,加熱攪拌,待溶液沸騰后分裝于培養瓶中;s6:將步驟s5所制成的誘導組織培養瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌一段時間后,即制成抗病毒組織培養基。進一步地,所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,所使用的試劑級別均為分析純。進一步地,所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,步驟s5中所述培養瓶為罐頭瓶。更進一步地,所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,步驟s6中滅菌溫度為120~135℃,滅菌時間為5~15min。本發明具有以下有益效果:(1)本發明所述抗病毒組織培養基,其原料組分來源廣泛,制備方法易于操作,且儲存期長;(2)本發明所述的抗病毒組織培養基,含有能夠促進牛大力組培苗生長發育的激素成分以及抗病毒功能的銀杏葉提取物,在培育牛大力種苗的同時抑制培養基病毒產生。具體實施方式下面結合具體實施方式對本發明作進一步詳細說明。應該強調的是,下述說明僅僅是示例性的,而不是為了限制本發明的范圍及其應用。實施例1:一種牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂45g、葡萄糖10g、naa0.2g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣發的無機鹽溶液4g、α-萘乙酸鈉0.1g、銀杏葉提取物0.1g、核黃素0.2g、玉米素0.2g、水解酪蛋白15g、土豆泥42g、三蒸水30g。所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,包括以下步驟:s1:naa先用少量95%酒精溶解后,加入去離子水配置成溶液;s2:葡萄糖使用去離子水配置成10%的溶液;s3:向燒杯中加入三蒸水,接著加入s1所得的naa溶液、無機鹽溶液、α-萘乙酸鈉、銀杏葉提取物、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、土豆泥,所使用的試劑級別均為分析純,充分攪拌;s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液,充分攪拌,使用10%naoh和10%hcl溶液調節至體系ph值為5.2;s5:向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂,加熱攪拌,待溶液沸騰后分裝于培養瓶中;s6:將步驟s5所制成的誘導組織培養瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在120℃下滅菌15min,即制成抗病毒組織培養基。實施例2一種牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂120g、葡萄糖30g、6-ba0.9g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機鹽溶液18g、α-萘乙酸鈉0.8g、銀杏葉提取物0.7g、核黃素1.2g、玉米素1.5g、水解酪蛋白35g、蘋果泥100g、三蒸水130g。所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,包括以下步驟:s1:6-ba先用少量95%酒精溶解后,加入去離子水配置成溶液;s2:葡萄糖使用去離子水配置成10%的溶液;s3:向燒杯中加入三蒸水,接著加入s1所得的6-ba溶液、無機鹽溶液、α-萘乙酸鈉、銀杏葉提取物、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、蘋果泥,所使用的試劑級別均為分析純,充分攪拌;s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液,充分攪拌,使用10%naoh和10%hcl溶液調節至體系ph值為6.4;s5:向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂,加熱攪拌,待溶液沸騰后分裝于罐頭培養瓶中;s6:將步驟s5所制成的誘導組織培養瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在135℃下滅菌5min,即制成抗病毒組織培養基。實施例3一種牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂50g、葡萄糖12g、iba0.3g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機鹽溶液5g、α-萘乙酸鈉0.2g、銀杏葉提取物0.2g、核黃素0.3g、玉米素0.3g、水解酪蛋白16g、香蕉泥50g、三蒸水35g。所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,包括以下步驟:s1:iba先用少量95%酒精溶解后,加入去離子水配置成溶液;s2:葡萄糖使用去離子水配置成10%的溶液;s3:向燒杯中加入三蒸水,接著加入s1所得的iba溶液、無機鹽溶液、α-萘乙酸鈉、銀杏葉提取物、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、香蕉泥,所使用的試劑級別均為分析純,充分攪拌;s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液,充分攪拌,使用10%naoh和10%hcl溶液調節至體系ph值為6;s5:向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂,加熱攪拌,待溶液沸騰后分裝于罐頭培養瓶中;s6:將步驟s5所制成的誘導組織培養瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在125℃下滅菌12min,即制成抗病毒組織培養基。實施例4一種牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂110g、葡萄糖25g、aba0.8g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機鹽溶液15g、α-萘乙酸鈉0.8g、銀杏葉提取物0.6g、核黃素1g、玉米素1.2g、水解酪蛋白30g、土豆泥85g、三蒸水110g。所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,包括以下步驟:s1:aba先用少量95%酒精溶解后,加入去離子水配置成溶液;s2:葡萄糖使用去離子水配置成10%的溶液;s3:向燒杯中加入三蒸水,接著加入s1所得的aba溶液、無機鹽溶液、α-萘乙酸鈉、銀杏葉提取物、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、有機物,所使用的試劑級別均為分析純,充分攪拌;s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液,充分攪拌,使用10%naoh和10%hcl溶液調節至體系ph值為5.8;s5:向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂,加熱攪拌,待溶液沸騰后分裝于罐頭培養瓶中;s6:將步驟s5所制成的誘導組織培養瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在130℃下滅菌8min,即制成抗病毒組織培養基。實施例5一種牛大力抗病毒組織培養基,包括以下原料:瓊脂80g、葡萄糖18g、naa0.6g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機鹽溶液10g、α-萘乙酸鈉0.5g、銀杏葉提取物0.4g、核黃素0.6g、玉米素0.8g、水解酪蛋白24g、蘋果泥70g、三蒸水60g。所述的牛大力抗病毒組織培養基的制備方法,包括以下步驟:s1:naa先用少量95%酒精溶解后,加入去離子水配置成溶液;s2:葡萄糖使用去離子水配置成10%的溶液;s3:向燒杯中加入三蒸水,接著加入s1所得的naa溶液、無機鹽溶液、α-萘乙酸鈉、銀杏葉提取物、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、蘋果泥,所使用的試劑級別均為分析純,充分攪拌;s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液,充分攪拌,使用10%naoh和10%hcl溶液調節至體系ph值為5.6;s5:向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂,加熱攪拌,待溶液沸騰后分裝于罐頭培養瓶中;s6:將步驟s5所制成的誘導組織培養瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在130℃下滅菌7min,即制成抗病毒組織培養基。為了更詳細說明本發明的有益效果,以下還提供了具體的試驗結果。選取牛大力新鮮種子切片180份作為組織培養的外植體,隨機分為a、b、c、d、e、f六組,每組30份。每組經升汞消毒后,a~e組種苗移入采用本發明實施例1~5所述配方及方法制備成的抗病毒組織培養基中,f組接入市售普通培養基中,培養10天后,比較各組培養基狀況,并記錄實驗數據如下表所示。組別各培養基中病毒數目/個組培苗誘導分化率/%a9712b7755c9806d7797e8865f15502由此可見,本發明所述的牛大力抗病毒組織培養基與市售普通培養基相比,培養基的病毒數目少,同時誘導分化率較高,能夠起到促進牛大力種苗的生長發育的效果。以上內容不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明,對于本發明所屬
技術領域:
的普通技術人員來說,在不脫離本發明構思的前提下,還可以做出若干簡單推演或替換,都應當視為屬于本發明由所提交的權利要求書確定的專利保護范圍。當前第1頁12