本發明屬于蘋果苗木栽培
技術領域：
，尤其涉及一種蘋果砧木mac9快速繁殖的方法。
背景技術：
：1956年密歇根州立大學的卡爾博士播種m1、m16、西伯利亞海棠、美國酸蘋果等自然授粉種子，對實生苗進行了田間抗棉蚜和優良性狀篩選，初選出56個砧木類型，定名mac系。其中mac9和m9、m26有相同的矮化程度和早結果習性，加之木質硬，作為不設置住的砧木已受到世界各地高度評價，并且能適應沙土和黏土條件，抗寒冷，較抗棉蚜。目前，我國的蘋果生產模式由傳統低效郁閉果園模式逐步的轉變為現代化矮砧密植集約高效生產栽培模式、并由世界蘋果生產大國逐步的轉變為蘋果產業強國。蘋果苗木是蘋果生產栽培的基礎，苗木的質量直接影響著蘋果樹體的生長、開花、結果以及抗逆性、抗病能力和壽命。苗木受到病毒的侵染之后，樹體正常的細胞增殖，就會受到破壞，嚴重的話會影響果樹的生長勢、果實品質和產量等正常生理機制，這成為中國蘋果產業發展的隱患。今后一段時期是我國蘋果大規模更新換代的關鍵時期，如何從苗木方面提供支持和保障便成為一個值得高度重視的問題。目前，我國矮化蘋果苗木市場供不應求，限制苗木產業發展的關鍵在于，一方面缺乏適應性廣的優良矮化砧木，另一方面對現有矮化砧木繁育技術尚未取得突破。綜上所述，現有技術存在的問題是：(1)砧木外植體褐化較嚴重，影響成活率。(2)繼代培養激素濃度配比不當導致玻璃化苗比例過高。(3)煉苗移栽的基質配比不恰當，導致苗子后期養分不足生長不良。技術實現要素：針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種蘋果砧木mac9快速繁殖的方法。本發明是這樣實現的，一種蘋果砧木mac9快速繁殖的方法，所述蘋果砧木mac9快速繁殖的方法采用培養基為ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加pvp600mg/l的培養基初代培養、采用ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l處理的繼代培養、采用生根培養基1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l的生根培養、然后3/5田間土加上部2/5蛭石的煉苗移栽實現蘋果砧木快速的繁殖。進一步，所述蘋果砧木mac9快速繁殖的方法包括以下步驟：步驟一，以蘋果砧木mac9為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置26℃的溫室內進行水培，水培為每升水含有5g蔗糖，每隔5d換一次水并剪掉舊剪口，當水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5-2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗；步驟二，用超聲波清洗機清洗3min，再用無菌水沖洗3-5次，將處理好的嫩芽接種到聚乙烯毗咯烷酮600mg/l的培養基中進行培養；步驟三，將獲得的無菌外植體接種到ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l，光照2000lux的培養基中進行繼代培養，mac9的最優培養處理為m4處理；步驟四，選擇繼代培養獲得的生長健壯，高度大于2.0cm的植株，生長時間為25天的芽子，接種于1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l生根培養基中進行生根培養；步驟五，當組培苗根長度達到2cm后，移到室外遮陰煉苗10-12天，然后將培養容器瓶口打開，自然光下進行開瓶煉苗2-4天后，將生根苗從培養基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養基清洗干凈，最后用清水沖洗2-3次，然后3/5田間土加上部2/5蛭石移栽到的營養缽中。進一步，所述步驟一中在自來水下沖洗6-8h，用75％酒精處理30s，升汞處理7min。進一步，所述步驟二中培養基中進行培養，每升培養基附加30g蔗糖，7g瓊脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃條件下進行培養。進一步，所述步驟三中m4為每升附加30g蔗糖，7g瓊脂。進一步，所述步驟四中生根培養，每升加30g蔗糖，7g瓊脂。進一步，所述步驟五中移栽苗的管理方式為移栽后將生根苗在遮陰網下進行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進行噴灌，第二周每天用清水噴灌一次，保持基質濕潤透氣待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮陰網。本發明的另一目的在于提供一種由所述蘋果砧木mac9快速繁殖的方法繁殖的蘋果砧木。本發明的優點及積極效果為：本發明提供的蘋果砧木mac9快速繁殖的方法，通過采用培養基為ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加pvp600mg/l的培養基初代培養、采用ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l處理的繼代培養、采用生根培養基1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l的生根培養、然后3/5田間土加上部2/5蛭石的煉苗移栽實現了蘋果砧木快速的繁殖。本發明不僅保證了較高的成活率，而且也保留了砧木的優良特性，為蘋果產業的發展和進一步擴大提供了便捷的方法和途徑。本發明建立一種蘋果砧木mac9快速繁殖的方法，對于生產優質矮化無病毒苗木，具有重要意義，市場前景廣闊。本發明從建立外植體進行初代培養到煉苗移栽，體系完整；本發明保證較高的擴繁系數和生根率及移栽成活率，提供優質矮化砧木苗，因此為蘋果產業的發展和進一步擴大提供了便捷的方法和途徑。病毒病是制約蘋果可持續發展的重要因素，栽培無毒苗木是目前生產上防止病毒病害的有效方法，培育無毒苗是栽培無毒苗的前提條件。本發明建立的一種蘋果砧木mac9快速繁殖的方法能夠提供大量組培苗，做為脫毒材料，最終獲得無毒苗，對生產優質矮化無病毒苗木具有重要意義。附圖說明圖1是本發明實施例提供的蘋果砧木mac9快速繁殖的方法流程圖。具體實施方式為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。下面結合附圖對本發明的應用原理作詳細的描述。如圖1所示，本發明實施例提供的蘋果砧木mac9快速繁殖的方法包括以下步驟：s101：以蘋果砧木mac9為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置26℃的溫室內進行水培，水培為每升水含有5g蔗糖，每隔5d換一次水并剪掉舊剪口，當水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5-2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6-8h，用75％酒精處理30s，升汞處理7min；s102：用超聲波清洗機清洗3min，再用無菌水沖洗3-5次，將處理好的嫩芽接種到聚乙烯毗咯烷酮600mg/l的培養基中進行培養，每升培養基附加30g蔗糖，7g瓊脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃條件下進行培養；s103：將獲得的無菌外植體接種到ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l，光照2000lux的培養基中進行繼代培養，mac9的最優培養處理為m4處理，即每升附加30g蔗糖，7g瓊脂；s104：選擇繼代培養獲得的生長健壯，高度大于2.0cm的植株，生長時間為25天的芽子，接種于1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l生根培養基中進行生根培養，每升加30g蔗糖，7g瓊脂；s105：當組培苗根長度達到2cm后，移到室外遮陰煉苗10-12天，然后將培養容器瓶口打開，自然光下進行開瓶煉苗2-4天后，將生根苗從培養基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養基清洗干凈，最后用清水沖洗2-3次，然后3/5田間土加上部2/5蛭石移栽到的營養缽中。在步驟s105中，移栽苗的管理方式為移栽后將生根苗在遮陰網下進行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進行噴灌，第二周每天用清水噴灌一次，保持基質濕潤透氣待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮陰網。本發明實施例提供的蘋果砧木mac9快速繁殖的方法具體包括以下步驟：步驟一，初代培養蘋果砧木mac9為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置26℃的溫室內進行水培(每升水含有5g蔗糖)，每隔5d換一次水并剪掉舊剪口，當水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5-2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6-8h，用75％酒精處理8s，0.1％升汞處理7min，進行消毒處理后，用超聲波清洗機清洗3min，再用無菌水沖洗3-5次，將處理好的嫩芽接種到到ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加不同濃度處理(0、0.3、0.6、0.7、1.0g/l)的聚乙烯毗咯烷酮(pvp)的培養基中進行培養，每升培養基附加30g蔗糖，8g瓊脂，每個三角瓶接個3芽，每處理15瓶，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃條件下進行培養，14d后分別調查污染率、褐化率、成活率，得出的mac9初代培養是最適宜的培養基為ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加pvp600mg/l(蔗糖30g/l，瓊脂7g/l)：步驟二，繼代培養將獲得的無菌外植體接種到含有不同6-ba、瓊脂、激素、光照的ms培養基中進行繼代培養，每升附加30g蔗糖，8g瓊脂，每瓶3株，每個處理10瓶，重復3次，mac9的最優培養處理為m4處理，即ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l(瓊脂7g/l，光照2000lux)；步驟三，生根培養選擇繼代培養獲得的生長健壯，高度大于1.5cm的植株，生長時間為25天的芽子，接種于1/2ms加不同濃度iba處理(0、0.6、0.8、1.2、1.4mg/l)的生根培養中進行生根培養，每瓶接種3個，每個處理10瓶，重復3次，得到mac9最適宜的生根培養基為1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l(蔗糖30g/l，瓊脂7g/l)；步驟四，煉苗移栽當組培苗根長度達到2cm后，移到室外遮陰煉苗10-12天左右，然后將培養容器瓶口打開，自然光下進行開瓶煉苗2-4天后，將生根苗從培養基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養基清洗干凈，最后用清水沖洗2-3次，然后移栽到容量相同的不同基質處理(蛭石、珍珠巖、田間土、3/5田間土加上部2/5蛭石、3/5田間土加2/5珍珠巖)的營養缽中，移栽苗的管理方式為將生根苗在遮陰網下進行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質濕潤透氣。于14天后統計煉苗移栽成活率，得出用的3/5田間土加上部2/5蛭石煉苗移栽成活率最好。通過以下的實驗和數據對本發明的應用效果作詳細的說明。1、參考表1不同濃度pvp處理對外植體生長的影響；表1不同濃度pvp處理對外植體生長的影響注同列數相同字母表示差異不顯著(p>0.05)，不同字母表示差異顯著(p<0.05)。數據為mean±se(平均值±標準誤)；下同。2、不同6-ba濃度處理對mac9繼代培養的影響：表2不同6-ba濃度對mac9繼代培養的影響3、不同iba濃度處理mac9生根的影響表3不同工濃度處理生根的影響4、不同煉苗基質對生根苗生長的影響：表4不同栽培基質處理對移栽苗生長的影響基質處理mac9移栽成活率蛭石76.50±5.20a珍珠巖67.50±6.30c田間土68.50±3.42b3/5田間土加2/5蛭石82.00±4.33a3/5田間土加2/5珍珠巖71.00±3.45bc5、蘋果砧木mac9增殖培養基的篩選將的mac9組培苗接種在含有不同6-ba濃度激素的培養基(蔗糖濃度30g/l，瓊脂濃度7g/l，ph5.8)中，觀察不同濃度激素下的擴繁系數，玻璃化程度及生長情況，每個處理30瓶，每瓶3株。6、瓊脂濃度對mac9組培苗玻璃化的影響：觀察方法②的試驗結果，根據組培苗的擴繁系數等綜合表現，選出相對較好的繼代培養基作為對照，研究瓊脂濃度對組培苗玻璃化的影響。將mac9的組培苗接種含有不同的瓊脂濃度(5.0、6.0、7.0g/l)，觀察不同濃度瓊脂下組培苗的分化系數、玻璃化程度及生長情況，每個處理30瓶，每瓶3株。7、iba對mac9組培苗玻璃化的影響：觀察方法③的試驗結果，根據組培苗的擴繁系數等綜合表現，選出相對合適的繼代培養基，并以此作對照，研究6-ba與不同濃度iba配比對玻璃化程度的影響。觀察組培苗的分化系數、玻璃化程度及生長情況，每個處理30瓶，每瓶3株。8結果與分析：8.1蘋果砧木mac9增殖培養基的篩選：如表5所示，m4處理培養基即ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l中mac9組培苗擴繁系數最高為3.64，玻璃化率為32％。各個處理的玻璃化程度直接無顯著差異，但都比較高。以擴繁系數為指標來篩選，則m4處理培養基是較好的增殖培養基。表5增殖培養基篩選結果統計編號培養基iba(mg/l)6-ba(mg/l)擴繁系數玻璃化程度m1ms0000m2ms0.10.32.780.31m3ms0.10.43.10.34m4ms0.10.53.640.32m5ms0.10.63.420.378.2瓊脂濃度對mac9組培苗玻璃化的影響如表6所示，以處理培養基m4為對照得出，提高瓊脂濃度對組培苗玻璃化有一定的抑制作用，并一定程度上提高了擴繁系數，但是差異無顯著性差異。綜合考慮，m4處理培養基要優于其它處理，其擴繁系數為3.64，玻璃化率為32％。表6瓊脂濃度對mac9組培苗的影響8.3iba對mac9組培苗玻璃化的影響以m12處理培養基為對照，研究不同iba濃度對mac9組培苗玻璃化的影響，如表7所示，提過iba濃度可以對擴繁系數有較大影響，處理m7、m9、m10與對照有顯著差異，并且提高iba濃度能夠明顯的降低玻璃化程度，但玻璃化程度仍比較高，綜合考慮m7為較優培養基表7iba對組培苗玻璃化的影響以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。當前第1頁12