專利名稱：干細胞與膠原促生腦組織的制備及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫學生物材料技術領域和組織工程學領域，具體涉及到一種細胞與膠原促生腦組織的制備及應用。
背景技術：
隨著醫療科學技術的進步及醫學材料的不斷發展，近年來在醫療領域以膠原蛋白為基礎的產品獲得了顯著的發展，如中國專利，專利號為021212779，專利名稱為醫用膠原蛋白材料及其制造工藝就公開了一種醫用膠原蛋白材料，由牛肌腱組織為基料，經過除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨素交聯、冷凍干燥及環氧乙烷滅菌等工序制成具有孔隙、海綿狀醫用膠原蛋白材料，具有結構穩定、生物相容性好、可吸收的特點。目前，已在臨床上用于硬腦膜、硬脊膜的修復和防粘連。使用這種材料同時應用組織工程技術擴大和延伸到其他治療領域是生物醫學領域的重要課題。
目前，對因腦血栓或腦血管病變所引起的腦實質的局部病變壞死大多采用保守藥物治療，一般情況壞死腦組織無法修復，其相應引發的后遺癥是長期而且很難治愈。組織工程學是以生物材料、細胞和生長因子為基礎的復合方法用于組織修復再生。在軟骨損傷、腦膜缺損、周圍神經缺損以及其他組織損傷都已得到應用，其特點不僅僅是修復有損傷的組織而是使其受損組織再次形成具有其功能的相同組織。由于腦實質在供應大腦血液的動脈血管受到血栓阻塞時，血管遠端的腦實質缺血壞死，形成腔穴。神經膠質細胞的生長阻止干擾了腦組織的再生，病變的后果造成許多嚴重后遺癥。如何利用生物材料、細胞為基礎的組織工程技術修復受損的腦組織是本發明要解決的課題。

發明內容
本發明的目的是提供一種高純度的I型膠原蛋白配以自體骨髓干細胞的復合生物材料，植入損傷部位用于修復受損的腦組織。
為了達到上述目的，本發明采用如下技術方案進行制備干細胞與膠原促生腦組織由牛肌腱組織為基料，經過除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨素交聯，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50-200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20～50毫升自體骨髓血，經一周標準溫箱培養，將分離出的骨髓干細胞種植于柱狀膠原內；再經兩周標準溫箱培養，使其骨髓干細胞含量達到200～600萬；將1-5個攜帶干細胞的膠原柱，采用三維定位無創技術將帶有干細胞的膠原柱導入壞死腔穴中。其內的干細胞在膠原上生長，阻斷膠質細胞的增生，治療因腦血管疾病所引起的腦組織壞死或因軟化所造成的腦實質病變，從而促進壞死組織的新生，使病人的癥狀得到不同程度的改善。
具體實施方法干細胞膠原促生腦組織在動物身上進行的實驗表明由牛肌腱組織為基料，經過除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨素交聯，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50-200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20毫升自體骨髓血，經一周標準溫箱培養，將分離出的骨髓干細胞種植于柱狀膠原內；再經兩周標準溫箱培養，使其骨髓干細胞含量達到200～600萬；將3個攜帶干細胞的膠原柱，采用三維定位無創技術將帶有干細胞的膠原柱導入壞死腔穴中。細胞膠原腦組織在腦壞死腔穴中植入后，干細胞很快在膠原上生長，阻斷了膠質細胞的增生，促進壞死腦組織的新生，癥狀得到不同程度的改善。
本發明提供一種純度高的I型膠原蛋白和干細胞的腦組織，可以促進干細胞在膠原上生長，阻斷膠質細胞的增生，修復受損的腦組織，有效的治療因腦血管疾病所引起的腦組織壞死、軟化所造成的腦實質病變，使病人的癥狀得到不同程度的改善。
權利要求
1)一種干細胞膠原促生腦組織的制備方法及應用，步驟如下由牛肌腱組織為基料，經過除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨劑交聯，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50-200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20～50毫升自體骨髓血，經一周標準溫箱培養，將分離出的骨髓干細胞種植于柱狀膠原內；再經兩周標準溫箱培養，使其骨髓干細胞含量達到200～600萬，構成細胞膠原腦組織。將1-5個攜帶干細胞的膠原柱，采用三維定位無創技術將帶有干細胞的膠原柱導入壞死腔穴中是細胞膠原腦組織的應用方法。
2)根據權利要求1所述干細胞膠原促生腦組織的制備方法，其特征在于蛋白純度在95％以上的1×10毫米柱狀海綿I型膠原為載體。
3)根據權利要求1所述干細胞膠原促生腦組織的制備方法，其特征在于取20～50毫升自體骨髓血，經一周標準溫箱培養，將分離出的骨髓干細胞種植于柱狀膠原內；再經兩周標準溫箱培養，使其骨髓干細胞含量達到200～600萬，構成細胞膠原腦組織。
4)根據權利要求1所述干細胞膠原促生腦組織是通過三維定位無創技術將帶有干細胞的膠原柱導入壞死腔穴中。
全文摘要
本發明公開一種干細胞膠原促生腦組織的制備及應用，由牛肌腱組織為基料，經過除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨劑交聯，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50－200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20～50毫升自體骨髓血，經一周標準溫箱培養，將分離出的骨髓干細胞種植于柱狀膠原內；再經兩周標準溫箱培養，使其骨髓干細胞含量達到200～600萬；將1－5個攜帶干細胞的膠原柱，采用三維定位無創技術將帶有干細胞的膠原柱導入壞死腔穴中。其內的干細胞在膠原上生長，阻斷膠質細胞的增生，治療因腦血管疾病所引起的腦組織壞死、軟化所造成的腦實質病變，從而促進壞死組織的新生，使病人的癥狀得到不同程度的改善。
文檔編號C12N5/08GK1796545SQ20041010159
公開日2006年7月5日 申請日期2004年12月24日 優先權日2004年12月24日
發明者于海鷹, 許和平 申請人:于海鷹, 許和平