專利名稱：中和氨基酸卵黃培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中和氨基酸卵黃培養基，特別是在臨床大量使用抗生素后的淋 病患者，需要淋球菌培養檢查時培養基的配方及其制備方法。其配方主要成分是氨基酸促 生長液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸 和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基)、多價蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白 胨、酵母浸膏粉、葡萄糖、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉、多粘
菌素B、萬古霉素、卵黃、土溫-80、卵磷酯。淋球菌培養檢査是診斷淋病的重要方法。尤其 對慢性患者及女性患者，需經培養后才能做出正確診斷；對已治療的患者需經培養才能證實 是否痊愈。該培養基能夠檢測大量臨床使用抗生素后的生殖道淋球菌陽性結果，具有指導臨 床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。淋病(Gonorrhea)是淋菌性尿 道炎的簡稱，是由淋球菌引起的泌尿生殖系統化膿性炎性疾病，主要通過性交傳染。是當前 世界范圍內流行非常廣泛的一種性傳播疾病。近30年來由于性亂的社會背景，無癥狀帶菌者 的增多(女性患者高達75%)、避孕方法的改變(避孕藥取代了子宮帽、避孕套)以及耐藥 菌株的不斷出現，更加快了本病的傳播。在許多國家和地區，淋病的患病率一直居于各種性 傳播疾病的首位。本病最初多侵犯尿道、宮頸內膜，繼而可波及前列腺、精囊、副睪、子宮 內膜及輸卵管。有時肛門、直腸、咽粘膜、眼結膜也可受染。尚可經血行播散引起菌血癥、 關節炎、心內膜炎及腦膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。由于本病 潛伏期短、傳染性強、后果嚴重，因此它是我國當前重點防治的性病之一。為使培養獲得成 功，除取材部位必須準確外，標本采集后，要盡快接種到己預溫至36。C的淋球菌培養基上。 用白金耳床邊取材，立即接種。正確地采取標本，及時接種和規范地鑒定是提高陽性率和準 確性的關鍵。最關鍵的是采用優質的淋球菌基礎培養基。中和氨基酸卵黃培養基富含高營養 物和其所需的基質(促生長液)及特殊的抑菌劑，可快速準確地檢測出臨床標本中的淋球菌。
技術背景 本發明的目的在于提供一種中和氨基酸卵黃培養基，用于臨床泌尿生殖道標本 淋球菌的規范鑒定。淋球菌培養檢査是診斷淋病的重要方法。由淋球菌引起的泌尿生殖系統 化膿性炎性疾病是近年來越來越引起臨床重視的病原體之一。尤其是大量臨床用抗生素后的 淋球菌檢測十分難檢，由于標本中含大量殘余抗生素，在恢復培養淋球菌時繼續受到殘余抗 生素的作用。因此，不釆用去除殘余的抗生素措施的實驗，應認為是在設計上的嚴重失誤， 依據這樣的實驗得出的結果是不可靠的。淋球菌較為嬌嫩，酶系統不完整，初代培養普通培 養基不易成功，需在含有動物蛋白的培養基上，且含有5% 10%二氧化碳的條件下才能生 長。與傳統的培養基比較.中和氨基酸卵黃培養基不僅以卵黃雙抗為基礎，還富含8種氨基 酸促生長液；將傳統培養基中的抑菌劑青霉素改為萬古霉素、多粘菌素；加入營養豐富的酵 母浸膏粉和淋球菌生長唯一熱能來源的葡萄糖及有吸附毒素作用的可溶性淀粉，并加入淋球 菌生長必須的生長因子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺酸等。營養素選擇新鮮蛋黃，實驗證明效 果很好。將傳統培養基中尤其是大量臨床用抗生素后的營養改為增加土溫-80、卵磷酯中和劑； 中和氨基酸卵黃培養基與其它類培養基相比具備下列特點中和氨基酸卵黃培養基淋球菌培養基營養豐富、配制簡單、選擇性強,與傳統培養基比較，檢出率高,污染小，臨床應用效果滿 意.大大提高檢測陽性率，方法簡單、時間短、準確性髙。能夠中和標本中含大量殘余抗生素， 對已治療的患者需經培養才能證實是否痊愈，具有指導臨床診斷和治療作用，為防止濫用抗 菌藥物也具有重要意義
發明內容
本發明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經加溫、溶解、混合、 冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種中和氨基酸卵黃培養基淋球菌培養基。
本發明選擇的培養基配方如下(克、ml /每升蒸餾水)氨基酸促生長液(含胱胺谷氨 酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基 酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價蛋白胨9. 0-12.0;蛋白月示胨4. 0_5. 0;胰蛋 白胨4. 0-5. 0;酵母浸膏粉4. 0-6. 0;葡萄糖1. 0-2. 0;可溶性淀粉1. 5-2. 5;氯化鈉14. 0-16. 0; 磷酸氫二鉀3. 0-5. 0;磷酸二氫鉀1. 5-2. 5;瓊脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0. 3 ml; 3mg/L萬古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%無菌卵黃鹽水10. 0-15. 0 ml; 土溫-80 0.3-0.5;卵 磷酯O. 5-0. 8;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
中和氨基酸卵黃培養基，原材料易得，制作方便，基礎成分以GC基礎為主，調整蛋白胨 的成分比例，加入營養豐富的酵母浸膏粉和淋球菌生長唯一熱能來源的葡萄糖及有吸附毒素 作用的可溶性淀粉，并加入淋球菌生長必須的生長因子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺酸等。營 養素選擇新鮮蛋黃，實驗證明效果很好。淋球菌在該培養基孵育24小時后，淋球菌可生長成 細小、圓形、凸起、濕潤、光滑、半透明或灰白色如露珠狀的菌落，直徑為0. 5ram 1. 0ram。 邊緣呈花瓣狀，用白金耳觸之有粘性。如繼續培養，菌落面積增大，表面變得粗糙，邊緣出 現皺縮。從菌落上取材作涂片，可見到菌的大小及染色的深度有差異，排列也不一致，約有 25%的菌為典型的雙球菌，其他75%為單球菌、四聯形或八疊形。
本發明產品的制備方法是
1) 、將蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二 鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉、土溫-80 、卵磷酯、按比例進行加溫、溶解；冷卻后調rapH7.4;
2) 、分裝后，壓力蒸汽滅菌121。C， 20-30min;
3) 、在無菌條件下將消毒的復合生長因子、卵黃加入到溶液中，混合均勻；
4) 、冷卻至6(TC在無菌條件下加入葡萄糖，萬古霉素和多粘菌素B溶液；不時搖動， 凝固備用。
本發明具有以下優點(1)中和氨基酸卵黃培養基，營養豐富、配制簡單；(2)選擇性強、 方法靈敏、檢出率高、污染小，臨床應用效果滿意；(3)大大提高檢測陽性率，方法簡單、時 間短、準確性高。(4)靈敏度高、特異性強、穩定性好。能夠中和標本中含大量殘余抗生素， 對已治療的患者需經培養才能證實是否痊愈，具有指導臨床診斷和治療作用，為防止濫用抗 菌藥物也具有重要意義。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明
按照下表所列數據(克、ml /每升蒸餾水)及其所述步驟進行配置 配方一氨基酸促生長液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮 氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價蛋白胨9. 0-12. 0; 蛋白月示胨4.0-5.0;胰蛋白胨4.0-5.0;酵母浸膏粉4.0-6.0;葡萄糖1.0-2.0;可溶性淀 粉1. 5-2. 5;氯化鈉14. 0-16. 0;磷酸氫二鉀3. 0-5. 0;磷酸二氫鉀1. 5-2. 5;瓊脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B0. 2-0.3ml; 3mg/L萬古霉素0. 2-0.3ml; 15%無菌卵黃鹽水10. 0-15. 0 ml; 土溫-80 0. 3-0. 5;卵磷酯0. 5-0. 8;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
配方二
氨基酸促生長液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮
氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價蛋白胨 10.0-12.0;蛋白月示胨4. 5-5.0;胰蛋白胨4. 5-5.0;酵母浸膏粉4. 5-6. 0;葡萄糖1. 5-2. 0; 可溶性淀粉2.0-2.5;氯化鈉15.0-16.0;磷酸氫二鉀4. 0-5. 0;磷酸二氫鉀2. 0-2. 5瓊脂粉 15.0-16.0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0.3 ml; 3mg/L萬古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%無菌卵黃 鹽水12. 0-15. 0 ml; 土溫-80 0.3-0.4;卵磷酯0. 5-0. 6;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
配方三
氨基酸促生長液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮 氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價蛋白胨9. 0-11.0; 蛋白月示胨4.0-4.5;胰蛋白胨4.0-4.5;酵母浸膏粉4. 0-5. 0;葡萄糖1. 0-1. 5;可溶性淀 粉1. 5-2. 5;氯化鈉14. 0-16. 0;磷酸氫二鉀3. 0-4. 0;磷酸二氫鉀1. 5-2. 0;瓊脂粉14. 0-15. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B0. 2-0.3 ml; 3mg/L萬古霉素0. 2-0.3 ml; 15%無菌卵黃鹽水10. 0-13. 0 ml; 土溫-80 0.4—0.5;卵磷酯0. 6-0. 8;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
權利要求
1、本發明涉及一種中和氨基酸卵黃培養基，特別是在臨床大量使用抗生素后的淋病患者，需要淋球菌培養檢查時特制培養基的配方及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克、ml/每升蒸餾水)氨基酸促生長液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml；多價蛋白胨9.0-12.0；蛋白月示胨4.0-5.0；胰蛋白胨4.0-5.0；酵母浸膏粉4.0-6.0；葡萄糖1.0-2.0；可溶性淀粉1.5-2.5；氯化鈉14.0-16.0；磷酸氫二鉀3.0-5.0；磷酸二氫鉀1.5-2.5；瓊脂粉14.0-16.0；2.5mg/L多粘菌素B 0.2-0.3ml；3mg/L萬古霉素0.2-0.3ml；15％無菌卵黃鹽水10.0-15.0ml；土溫-800.3-0.5；卵磷酯0.5-0.8；雙重蒸餾水1000ml，pH7.4。
2、 一種權利要求1所述中和氨基酸卵黃培養基的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1) 、將蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉、土溫-80 、卵磷酯、按比例進行加溫、溶解；冷卻后調 ra pH7. 4;2) 、分裝后，壓力蒸汽滅菌121。C， 20-30min;3) 、在無菌條件下將消毒的氨基酸促生長液、卵黃加入到溶液中，混合均勻；4) 、冷卻至6(TC在無菌條件下加入葡萄糖，萬古霉素和多粘菌素B溶液；不時搖動，凝固備用。
全文摘要
本發明涉及一種中和氨基酸卵黃培養基，特別是在臨床大量使用抗生素后的淋病患者，需要淋球菌培養檢查時培養基的配方及其制備方法。淋球菌培養檢查是診斷淋病的重要方法。由淋球菌引起的泌尿生殖系統化膿性炎性疾病是近年來越來越引起臨床重視的病原體之一。尤其是大量臨床用抗生素后的淋球菌檢測十分難檢，由于標本中含大量殘余抗生素，在恢復培養淋球菌時繼續受到殘余抗生素的作用。因此，不采用去除殘余的抗生素措施的實驗，應認為是在設計上的嚴重失誤，依據這樣的實驗得出的結果是不可靠的。本發明的目的在于提供一種中和氨基酸卵黃培養基，用于臨床泌尿生殖道標本淋球菌的規范鑒定。
文檔編號C12Q1/04GK101565729SQ200810093410
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月21日 優先權日2008年4月21日
發明者奕 曲 申請人:奕 曲