專利名稱：非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑，特別是一種解脲脲原體和人 型支原體快檢試紙及其制備方法。其主要成分是蛋白胨、氯酚紅、胰蛋白胨、復合生長因 子、酵母浸膏、馬血清、氯化鈉、混合抗生素、尿素、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽、 濾紙條。該快檢試劑能夠檢測生殖道支原體陽性結果，具有指導臨床診斷和治療的作用，為 防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。非淋菌性尿道炎是由性接觸傳染的一種尿道炎，解脲支 原體是一群大小、結構復雜程度介于細菌與病毒之間，能在人工培養基上增殖的原核微生物， 主要存在人和動物的腔道黏膜上，解脲支原體與非淋性尿道炎的發生密切相關，正常人的泌 尿道中也可能有支原體寄生，故認為其致病性類似條件致病菌，其可通過性行為傳播，是非 淋性尿道炎的主要病原菌。臨床常見癥狀為非淋性尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、陰道炎、不 育不孕癥等，也有少數無癥狀攜帶者，是近年來越來越引起臨床重視的病原體之一。該快檢 試劑采用優質的支原體基礎培養基，富含高營養物和其所需的基質(尿素)及特殊的抑菌劑， 并添加氯酚紅指示劑組成，可快速準確地檢測出臨床標本中的解脲支原體。
技術背景 本發明的目的在于提供一種非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑，引起非淋菌性尿 道炎的支原體有解脲支原體、人型支原體和生殖支原體。不同的支原體使用不同的培養試劑。 包括液體和固體培養基。檢測解脲支原體和人型支原體最可靠的方法是先接種于液體培養基， 待有生長后(液體顏色發生改變)，再接種于固體培養基上，72小時后，如無菌落生長可視 為陰性。生殖支原體主要用于液體培養基14天后無生長可視為陰性。檢測方法復雜、時間長、 準確性差。對泌尿生殖道標本支原體進行快速檢測，與傳統的培養基比較.非淋菌性尿道炎支 原體快檢試劑是以布氏肉湯為基礎，并增加小牛血清含量;將傳統培養基中的抑菌劑青霉素改 為萬古霉素、氟康唑與多粘菌素；將解脲培養基中的酚紅指示劑改為氯酚紅.將傳統培養基 中的固體瓊脂粉改為濾紙條；結果非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑與其它類試劑相比具備下 列特點非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑營養豐富、配制簡單、選擇性強和變色靈敏，與傳統 試劑比較，檢出率高，污染小，臨床應用效果滿意.接種樣本24小時后，即能得到液體篩選增 菌，又能達到固體觀察菌落生長情況，檢測方法簡單、時間短、準確性強。
發明內容
本發明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經加溫、溶解、混合、 冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑。
本發明選擇的培養基配方如下(克/每升蒸餾水)蛋白胨9.0-10;氯酚紅0.05-0.06; 胰蛋白胨2. 5-6. 0;復合生長因子10. 0-20. 0;酵母浸膏2. 0-4. 0;無菌馬血清80-100ml氯 化鈉5.0-6.0;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑與多粘菌素)10-15ml; 尿素0.5-0.6;半 胱氨酸鹽酸鹽0.1-0.2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-4. 0;蒸餾水加至1000， p朋.3士0. 3 ，濾紙條吸 附。
快檢試劑中含有蛋白胨、酵母抽提物、馬血清、生長因子等營養物，并加有尿素、精氨 酸底物及酚紅指示劑；當有Uu和Mh生長時，尿素和精氨酸被分解，生成的堿性物質引起pH 值上升，培養基由黃變紅。快檢試劑內加有混合抗生素，可抑制泌尿生殖道中G+、 G-細菌和
3真菌生長。快檢試劑中不加葡萄糖，分別加入精氨酸及尿素，觀察pH變化情況。Mg不能水 解精氨酸及尿素，因此不發生pH變化。脲原體產生的集落稍大而呈深棕色，故甚易檢出。
解脲支原體和人型支原體將先接種于液體培養基，待有生長后(液體顏色發生改變)，再 接種于固體培養基上，72小時后，觀察無菌落生長。而非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑，是 一種快檢試紙條，將快檢試紙條加入試管再接種樣本24小時后，即能得到液體篩選增菌，又 能達到固體觀察菌落生長情況，檢測方法簡單、時間短、準確性強。培養到的微生物需作品 種鑒定，而分離過程中常規測定的某些非特征，可能提拱線索。由生殖泌尿道分離到的標本， 產生堿性顏色改變而使含精氨酸的基質混濁，則以含人型支原體的可能性最大；在含脲基質 中產生類似改變，則幾可肯定為脲原體。提高了試劑的靈敏度、特異性和穩定性。 本發明產品的制備方法是
1) 、將蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化鈉、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽按比
例進行加溫、溶解；
2) 、將復合生長因子按比例加熱溶解于蒸餾水中，冷至54'C;
3) 、將溶解的l)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷卻后調1-6. 3，加氯酚
紅；壓力蒸汽滅菌115。C， 20-30min，冷至50。C;
4) 、在無菌條件下加馬血清、混合抗生素、尿素，混合均勻；
5) 、將4號濾紙制成濾紙條，包裝；壓力蒸汽滅菌115T:， 20-30min，烘干；
6) 、在無菌條件下將濾紙條浸泡液體中，待吸附完全后，無菌條件下烘干；冷藏備用。 本發明具有以下優點(1)非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑營養豐富、配制簡單；(2)臨
床應用效果滿意，解決了床邊接種的困難，污染小；(3)檢測方法簡單、時間短、選擇性強、 變色靈敏、檢出率高；(4)接種樣本24小時后，即能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀 察菌落生長情況，穩定性好。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明 按照下表所列數據(克/每升蒸餾水)及其所述步驟進行配置 配方一
蛋白胨9. 0-10. 0;氯酚紅0.05-0.06;胰蛋白胨2. 5-6. 0;復合生長因子10. 0-20. 0; 酵母浸膏2.0-4.0;無菌馬血清80-100ml氯化鈉5.0-6.0;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑 與多粘菌素)10-15ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-4. 0; 蒸餾水加至1000， p朋.3±0. 3 ，濾紙條吸附。
配方二
蛋白胨 9.5-10.0; 氯酚紅0.05-0.06; 胰蛋白胨4.5-6.0; 復合生長因子 15.0-20.0;酵母浸膏3.0-4.0;無菌馬血清85-100ml氯化鈉5.5-6.0;混合抗生素(萬古 霉素、氟康唑與多粘菌素)12-15ml; 尿素0.5-0.6;半胱氨酸鹽酸鹽0.1-0.2;精氨酸 鹽酸鹽3.5-4.0;蒸餾水加至1000， p服.3士0. 3 ，濾紙條吸附。配方三
蛋白胨9. 0-9. 5;氯酚紅0. 05-0. 06;胰蛋白胨4. 5-5. 5;復合生長因子10. 0-18. 0; 酵母浸膏2.0-3.0;無菌馬血清80-90ml氯化鈉5.0-5.5;混合抗生素(萬古霉素、氟康唑 與多粘菌素)10-13ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸鹽酸鹽0. 1-0. 2;精氨酸鹽酸鹽3. 0-3. 5; 蒸餾水加至1000， p朋.3±0. 3 ，濾紙條吸附。
權利要求
1、本發明涉及一種非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑，特別是一種解脲脲原體和人型支原體快檢試紙及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸餾水)蛋白胨9.0-10；氯酚紅0.05-0.06；胰蛋白胨2.5-6.0；復合生長因子10.0-20.0；酵母浸膏2.0-4.0；無菌馬血清80-100ml氯化鈉5.0-6.0；混合抗生素(萬古霉素、氟康唑與多粘菌素)10-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸鹽酸鹽0.1-0.2；精氨酸鹽酸鹽3.0-4.0；蒸餾水加至1000，pH6.3±0.3，濾紙條吸附。
2、 一種權利要求1所述非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1) 、將蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化鈉、半胱氨酸鹽酸鹽、精氨酸鹽酸鹽按比例進行加溫、溶解；2) 、將復合生長因子按比例加熱溶解于蒸餾水中，冷至54'C;3) 、將溶解的l)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷卻后調PH6.卜6. 3，加氯酚 紅；壓力蒸汽滅菌115。C， 20-30min，冷至50。C;4) 、在無菌條件下加馬血清、混合抗生素、尿素，混合均勻；5) 、將4號濾紙制成濾紙條，包裝；壓力蒸汽滅菌115'C， 20-30min，烘千；6) 、在無菌條件下將濾紙條浸泡液體中，待吸附完全后，無菌條件下烘干；冷藏備用。
全文摘要
本發明涉及一種非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑，特別是一種解脲脲原體和人型支原體快檢試紙及其制備方法。該快檢試劑能夠檢測生殖道支原體陽性結果，具有指導臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。本發明具有以下優點(1)非淋菌性尿道炎支原體快檢試劑營養豐富、配制簡單；(2)臨床應用效果滿意，解決了床邊接種的困難，污染??；(3)檢測方法簡單、時間短、選擇性強、變色靈敏、檢出率高；(4)接種樣本24小時后，既能得到液體篩選增菌，又能達到固體觀察菌落生長情況，穩定性好。
文檔編號C12Q1/00GK101566621SQ20081009341
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月21日 優先權日2008年4月21日
發明者奕 曲 申請人:奕 曲