專利名稱：改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基，特別是一種改良淋球菌卵黃血 瓊脂培養(yǎng)基的配方及其制備方法。其主要成分是多價(jià)蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母 浸膏粉、葡萄糖、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉、多粘菌素B、 萬(wàn)古霉素、卵黃、羊血、促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、 絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧淀2種堿基)。淋球菌 培養(yǎng)檢查是診斷淋病的重要方法。尤其對(duì)慢性患者及女性患者，需經(jīng)培養(yǎng)后才能做出正確診 斷；對(duì)已治療的患者需經(jīng)培養(yǎng)才能證實(shí)是否痊愈。該培養(yǎng)基能夠檢測(cè)生殖道淋球菌陽(yáng)性結(jié)果， 具有指導(dǎo)臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。淋病(Gonorrhea) 是淋菌性尿道炎的簡(jiǎn)稱，是由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病，主要通過(guò)性交傳 染。是當(dāng)前世界范圍內(nèi)流行非常廣泛的一種性傳播疾病。近30年來(lái)由于性亂的社會(huì)背景，無(wú) 癥狀帶菌者的增多(女性患者高達(dá)75%)、避孕方法的改變(避孕藥取代了子宮帽、避孕套) 以及耐藥菌株的不斷出現(xiàn)，更加快了本病的傳播。在許多國(guó)家和地區(qū)，淋病的患病率一直居 于各種性傳播疾病的首位。本病最初多侵犯尿道、宮頸內(nèi)膜，繼而可波及前列腺、精囊、副 睪、子宮內(nèi)膜及輸卵管。有時(shí)肛門、直腸、咽粘膜、眼結(jié)膜也可受染。尚可經(jīng)血行播散引起 菌血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。 由于本病潛伏期短、傳染性強(qiáng)、后果嚴(yán)重，因此它是我國(guó)當(dāng)前重點(diǎn)防治的性病之一。為使培 養(yǎng)獲得成功，除取材部位必須準(zhǔn)確外，標(biāo)本采集后，要盡快接種到已預(yù)溫至36'C的淋球菌培 養(yǎng)基上。用白金耳床邊取材，立即接種。正確地采取標(biāo)本，及時(shí)接種和規(guī)范地鑒定是提高陽(yáng) 性率和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。最關(guān)鍵的是采用優(yōu)質(zhì)的淋球菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。改良淋球菌卵黃血瓊脂培 養(yǎng)基富含高營(yíng)養(yǎng)物和其所需的基質(zhì)(促生長(zhǎng)液)及特殊的抑菌劑，可快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出臨床 標(biāo)本中的淋球菌。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的在于提供一種改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基，用于臨床泌尿生殖 道標(biāo)本淋球菌的規(guī)范鑒定。淋球菌較為嬌嫩，酶系統(tǒng)不完整，初代培養(yǎng)普通培養(yǎng)基不易成功， 需在含有動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基上，且含有5% 10%二氧化碳的條件下才能生長(zhǎng)。與傳統(tǒng)的培 養(yǎng)基比較.改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基不僅以卵黃雙抗為基礎(chǔ)，還富含抗凝羊血；將傳統(tǒng) 培養(yǎng)基中的抑菌劑青霉素改為萬(wàn)古霉素、多粘菌素；加入營(yíng)養(yǎng)豐富的酵母浸膏粉和淋球菌生
長(zhǎng)唯一熱能來(lái)源的葡萄糖及有吸附毒素作用的可溶性淀粉，并加入淋球菌生長(zhǎng)必須的生長(zhǎng)因 子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺酸等。營(yíng)養(yǎng)素選擇新鮮蛋黃，實(shí)驗(yàn)證明效果很好。改良淋球菌
卵黃血瓊脂培養(yǎng)基與其它類培養(yǎng)基相比具備下列特點(diǎn)改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基淋球菌 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單、選擇性強(qiáng)，與傳統(tǒng)培養(yǎng)基比較，檢出率高,污染小，臨床應(yīng)用效果 滿意.大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性高
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、 冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基淋球菌培養(yǎng)基。
本發(fā)明選擇的培養(yǎng)基配方如下(克、ml /每升蒸餾水)多價(jià)蛋白胨9.0-12.0;蛋白月
3示胨4. 0-5. 0;胰蛋白胨4. 0-5. 0;酵母浸膏粉4. 0-6. 0;葡萄糖1. 0-2. 0;可溶性淀粉1. 5-2. 5; 氯化鈉14. 0-16. 0;磷酸氫二鉀3. 0-5. 0;磷酸二氫鉀1. 5-2. 5;瓊脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L 多粘菌素BO. 2-0.3 ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0.3 ml; 15%無(wú)菌卵黃鹽水10. 0-15. 0 ml; 抗凝羊血10.0-15.0 ml;促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、 絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;雙 重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基，原材料易得，制作方便，基礎(chǔ)成分以GC基礎(chǔ)為主，調(diào) 整蛋白胨的成分比例，加入營(yíng)養(yǎng)豐富的酵母浸膏粉和淋球菌生長(zhǎng)唯一熱能來(lái)源的葡萄糖及有 吸附毒素作用的可溶性淀粉，并加入淋球菌生長(zhǎng)必須的生長(zhǎng)因子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺 酸等。營(yíng)養(yǎng)素選擇新鮮蛋黃及抗凝羊血，實(shí)驗(yàn)證明效果很好。淋球菌在該培養(yǎng)基孵育24小時(shí) 后，淋球菌可生長(zhǎng)成細(xì)小、圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、半透明或灰白色如露珠狀的菌落，直 徑為0.5mnTl.0mm。邊緣呈花瓣?duì)?，用白金耳觸之有粘性。如繼續(xù)培養(yǎng)，菌落面積增大，表 面變得粗糙，邊緣出現(xiàn)皺縮。從菌落上取材作涂片，可見到菌的大小及染色的深度有差異， 排列也不一致，約有25%的菌為典型的雙球菌，其他75%為單球菌、四聯(lián)形或八疊形。 本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是
1) 、將蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二
鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉按比例進(jìn)行加溫、溶解；冷卻后調(diào)rapH7.4;
2) 、分裝后，壓力蒸汽滅菌121。C， 20-30min;
3) 、在無(wú)菌條件下將消毒的復(fù)合生長(zhǎng)因子、卵黃加入到溶液中，混合均勻；
4) 、冷卻至6(TC在無(wú)菌條件下加入葡萄糖，萬(wàn)古霉素和多粘菌素B溶液；
5) 、冷至45。C，將羊血搖勻倒入培養(yǎng)基，輕輕的不時(shí)搖動(dòng)使成鮮亮紅色，凝固備用。 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單；(2)選
擇性強(qiáng)、方法靈敏、檢出率高、污染小，臨床應(yīng)用效果滿意；(3)大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，方法 簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性高。(4)靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明
按照下表所列數(shù)據(jù)(克、ml /每升蒸餾水)及其所述步驟進(jìn)行配置
配方一
多價(jià)蛋白胨9. 0-12.0;蛋白月示胨4.0-5.0;胰蛋白胨4.0-5.0;酵母浸膏粉4.0-6.0; 葡萄糖1.0-2.0;可溶性淀粉1. 5-2. 5;氯化鈉14. 0-16.0;磷酸氫二鉀3.0-5.0;磷酸二氫 鉀1. 5-2. 5;瓊脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0. 3 ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%無(wú)菌卵黃鹽水10. 0-15. 0 ml;抗凝羊血10.0-15.0 ml;促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、 精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸， 次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
配方二:多價(jià)蛋白胨10.0-12.0;蛋白月示胨4. 5-5.0;胰蛋白胨4.5-5.0;酵母浸膏粉4. 5-6. 0; 葡萄糖1.5-2.0;可溶性淀粉2.0-2.5;氯化鈉15.0-16.0;磷酸氫二鉀4.0-5.0;磷酸二氫 鉀2. 0-2. 5瓊脂粉15. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B0. 2-0.3 ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0.3 ml; 15%無(wú)菌卵黃鹽水12. 0-15. 0 ml;抗凝羊血12.0-15.0 ml;促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、 精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸， 次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
配方三
多價(jià)蛋白胨9. 0-11.0;蛋白月示胨4.0-4. 5;胰蛋白胨4.0-4.5;酵母浸膏粉4.0-5.0; 葡萄糖1.0-1.5;可溶性淀粉1. 5-2. 5;氯化鈉14.0-16.0;磷酸氫二鉀3.0-4.0;磷酸二氫 鉀1. 5-2. 0;瓊脂粉14. 0-15. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0. 3 ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%無(wú)菌卵黃鹽水10. 0-13. 0 ml;抗凝羊血10.0-13.0 ml;促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、 精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸， 次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
權(quán)利要求
1、本發(fā)明涉及一種改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基，特別是一種改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基的配方及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克、ml/每升蒸餾水)多價(jià)蛋白胨9.0-12.0；蛋白月示胨4.0-5.0；胰蛋白胨4.0-5.0；酵母浸膏粉4.0-6.0；葡萄糖1.0-2.0；可溶性淀粉1.5-2.5；氯化鈉14.0-16.0；磷酸氫二鉀3.0-5.0；磷酸二氫鉀1.5-2.5；瓊脂粉14.0-16.0；2.5mg/L多粘菌素B 0.2-0.3ml；3mg/L萬(wàn)古霉素0.2-0.3ml；15％無(wú)菌卵黃鹽水10.0-15.0ml；抗凝羊血10.0-15.0ml；促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml；雙重蒸餾水1000ml，pH7.4。
2、 一種權(quán)利要求l所述改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于具有如下 的步驟1) 、將蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉按比例進(jìn)行加溫、溶解；冷卻后調(diào)fflpH7.4;2) 、分裝后，壓力蒸汽滅菌121。C， 20-30min;3) 、在無(wú)菌條件下將消毒的復(fù)合生長(zhǎng)因子、卵黃加入到溶液中，混合均勻；4) 、冷卻至60。C在無(wú)菌條件下加入葡萄糖，萬(wàn)古霉素和多粘菌素B溶液；5) 、冷至45。C，將羊血搖勻倒入培養(yǎng)基，輕輕的不時(shí)搖動(dòng)使成鮮亮紅色，凝固備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基，特別是一種改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基的配方及其制備方法。淋球菌培養(yǎng)檢查是診斷淋病的重要方法。尤其對(duì)慢性患者及女性患者，需經(jīng)培養(yǎng)后才能做出正確診斷；對(duì)已治療的患者需經(jīng)培養(yǎng)才能證實(shí)是否痊愈。該培養(yǎng)基能夠檢測(cè)生殖道淋球菌陽(yáng)性結(jié)果，具有指導(dǎo)臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)改良淋球菌卵黃血瓊脂培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單；(2)選擇性強(qiáng)、方法靈敏、檢出率高、污染小，臨床應(yīng)用效果滿意；(3)大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性高。(4)靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101565731SQ20081009341
公開日2009年10月28日 申請(qǐng)日期2008年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月21日
發(fā)明者奕 曲 申請(qǐng)人:奕 曲