專利名稱：：一種馬乳酒亞種zw3菌株的制作方法
技術領域：
：本發明屬于生物工程領域，涉及一種馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種ZW3菌株。
背景技術：
：近年來，食品工業對于天然高聚物的需求越來越強烈，這也引起了人們對于微生物產生的胞外多糖的興趣。許多微生物包括乳酸菌，藻類，真菌以及植物，都具有合成胞外多糖的能力，并且可以把它以可溶性聚合物或者不可溶性聚合物分泌到細胞外。微生物胞外多糖廣泛應用于食品，制藥及化學領域，作為生物絮凝劑，生物吸附劑，重金屬脫除劑，藥物釋放劑等。工業上應用的重要的微生物胞外多糖有右旋糖苷類，黃原，結冷，支鏈淀粉，酵母葡聚糖和細菌藻酸鹽。微生物胞外多糖已經發展成為像黃單胞菌產生的黃原、假單胞桿菌伊樂藻產生的結冷一樣的食品添加劑。然而這些高聚物的物理特性表明它們不具備所有的應用條件，對于具有更好的流變特性的新物質的需求隨之產生。乳酸菌胞外多糖(ExopolySaccharides，EPS)是乳酸菌在生長代謝過程中分泌到細胞壁外常滲于培養基的一類糖類化合物，有的依附于微生物細胞壁形成莢膜，稱為莢膜多糖；有的進入培養基形成粘液，稱為粘液多糖，它們都是微生物適應環境的產物。近幾十年來，由于微生物胞外多糖在產品結構、性能及生產方面所具有的特別優勢而得到深入研究和開發，新的微生物胞外多糖的開發已成為工業微生物研究的熱點之一。由于乳酸菌是食品級工業生產菌，與其他菌相比安全性高，所以近年來對乳酸菌胞外多糖的研究逐漸增多。但產量低，菌株穩定性差，仍是制約其進行大規模生產的主要因素。
發明內容本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種熱穩定性好、乳化能力強、胞外多糖產量高的馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種ZW3菌株。本發明的目的是這樣實現的一種馬乳酒亞種ZW3菌株，該菌株保藏于中國科學院微生物研究所菌種保藏中心，保藏日期是2008年12月18日，保藏號是CGMCC2809。該ZW3菌株的分類命名為馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種，拉丁文學名為Zs^o力3w7A/s而且，所述菌株通過革蘭氏染色反應和過氧化氫酶反應鑒定，屬于革蘭氏陽性菌，過氧化氫酶陰性菌，菌株外形呈桿狀，凸菌落表面極其光滑，在15°C，37。C和45。C條件下生長。本發明的有益效果和優點1.本菌株是由開菲爾粒中篩選分離出一種馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種ZW3菌株，并從ZW3菌株發酵液中分離純化得到ZW3菌株胞外多糖培養物。該ZW3菌株具有熱穩定性好、乳化能力強、胞外多糖產量高的優點。2.本ZW3菌株胞外多糖是大分子生物多糖，既可以作為食品工業中的增稠劑、乳化劑，又可以作為益生素促進腸道內其他益生菌的生長，又與益生菌的抗腫瘤、抗瘺管、免疫調節、降膽固醇或調節血壓作用有關，具有用作保健食品的巨大潛力；此外，該ZW3菌株胞外多糖具有生物降解性，對人體和環境無害，可作為一種在廢水處理、飲用水生產和下游加工等食品領域中有效的絮凝劑。圖1是本發明ZW3菌株發酵液中分離純化的胞外多糖的紅外光譜圖2是本發明ZW3菌株發酵液中分離純化的胞外多糖氣相質譜色譜圖；圖3是本發明ZW3菌株發酵液中分離純化的胞外多糖與黃原膠和卡拉膠絮凝能力的對比圖。具體實施例方式下面結合實施例對本發明進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發明的保護范圍。開菲爾粒(&/_z>^rai/7s)是傳統開菲爾(A^/Yr)的發酵劑，它具有不規則的外形，表面巻曲，不平整或高度扭曲，多為白色或淺黃色，具有一定的彈性和特殊的酸味，直徑320mm不等，看上去像花椰菜。具有活性的開菲爾粒可浮在乳的表面，粒的主要成分是水、粘性多糖、蛋白質、脂質，以及在粒上棲息的大量益生菌，如乳酸球菌、乳酸桿菌、明串珠球菌、醋酸菌及酵母菌。開菲爾粒和開菲爾之所以具有營養保健功能，主要是由于這些益生菌的共生作用，本發明中的馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種ZW3菌株由市場上購買的開菲爾粒中篩選分離得到。一種馬乳酒亞種ZW3菌株，該菌株保藏于中國科學院微生物研究所菌種保藏中心，保藏日期是2008年12月18日，保藏號是CGMCC2809。該菌株通過革蘭氏染色反應和過氧化氫酶反應鑒定，屬于革蘭氏陽性菌，過氧化氫酶陰性菌，菌株外形呈桿狀，凸菌落表面極其光滑，在15"C，37°C和45'C條件下生長。該菌株的篩選方法是1.開菲爾粒的活化；2.菌株的分離在開菲爾粒發酵液中加入無菌生理鹽水進行稀釋，然后將lml混勻的逐級稀釋的生理鹽水涂布在瓊脂平板上的乳清培養基上進行培養，培養條件是3(TC厭氧條件下培養79天，氣箱內的混合氣體為80%的N2，10%的C02和10%的&(體積份數)，這樣比較粘稠的細菌就會被分離出來。乳清培養基的成分是lg/100ml乳糖-水合物、0.5g/100ml葡萄糖、0.5g/100ml胰蛋白胨、0.05g/100ml半胱氨酸-鹽酸鹽、0.5g/100ml乙酸鈉、0.lml/100ml吐溫80、lml/100ml礦物質溶液、2g/100ml瓊脂。上述乳清培養基中添加的乳清是通過脫脂奶過濾得到的，并用乳酸調節其pH為5.5，IO(TC加熱30min。上述乳清培養基中的礦物質溶液的組成是0.4g/LMgS047H20，0.15g/LMnS044H20，0.18g/LFeS047H20和0.1g/LNaCl。a).產胞外多糖菌株的初篩將產胞外多糖的乳酸菌中粘稠度高，形態為粘絲狀的菌落挑出繼續培養。(2).產胞外多糖菌株的復篩將具有粘稠度高，形態為粘絲狀的菌落分別接種2%于50ml液體乳清培養基中培養，培養4872h之后，發酵液在12000rpm，4。C條件下離心15min，去除菌體后，將上清液進行透析,透析袋規格為10kDa，置于蒸餾水中4"C浸泡72h，每天更換24次蒸餾水，透析至蒸餾水中無單糖檢出為止。胞外多糖的產量通過苯酚硫酸法進行測定并以葡萄糖作為標準，其中某一菌株產胞外多糖的量高達1215mg/l，如果該菌株的發酵液在10(TC加熱30min后，再進行離心和胞外多糖的產量測定時，其產量可達到1675mg/l，該菌株產胞外多糖的量同現有菌株的胞外多糖產量(現有已知相同培養條件下最高產量為405mg)高很多。復篩中所用的液體乳清培養基的成分是液體乳清培養基lg/100ml乳糖-水合物、0.5g/100ml葡萄糖、0.5g/100ml胰蛋白胨、0.05g/100ml半胱氨酸-鹽酸鹽、0.5g/100ml乙酸鈉、0.lml/100ml吐溫80、lml/100ml礦物質溶液、2g/100ml瓊脂。上述液體乳清培養基中添加的乳清是通過先使用2N的HC1調節脫脂奶pH到4.6，IO(TC加熱30min然后過濾，上清液使用2N的NaOH調整pH到6.8，10(TC加熱30min然后再過濾就得到除蛋白的乳清。上述液體乳清培養基中的礦物質溶液的組成是0.4g/LMgS04*7H20，0.15g/LMnS044H20，0.18g/LFeS047H20和0.1g/LNaCl。3.該菌株的微生物學特征是(1).形態學特征該胞外多糖產量最高的菌株通過革蘭氏染色反應和過氧化氫酶反應鑒定，屬于革蘭氏陽性菌，過氧化氫酶陰性菌，菌株外形呈桿狀，凸菌落表面極其光滑，在15'C，37。C和45-C條件下生長。(2).生理生化特征①檢測方法如下a.VP實驗的檢測方法和實驗結果以無菌操作接種少量菌苔至裝有葡萄糖蛋白胨培養液的試管中，空白對照管不接菌，置37'C恒溫箱中，培養2448h。取出以上試管，振蕩2min。另取2支空試管，分別加入35ml以上對應管中的培養液，再加入40%NaOH溶液1020滴，并用牙簽挑入約0.5lmg微量肌酸，振蕩試管，以使空氣中的氧溶入，置37"C恒溫箱中保溫1530min后，若培養液呈紅色，記錄為V.P.試驗陽性反應(用"+"表示)；若不呈紅色，記錄為V.P.試驗陰性反應(用"—"表示)。b.糖發酵實驗的檢測方法和實驗結果1.用記號筆在各試管外壁上分別標明發酵培養基名稱和所接種的細菌菌名。2.分別接種ZW3于2支葡萄糖發酵培養基試管2支，另取一支相同培養基試管不接種作為空白對照。3.在接種后，輕緩搖動試管，使其均勻，防止倒置的小管進入氣泡。4.將接種過和作為對照的試管均置37。C培養24-72h，24、48、72h各記錄一次，緩慢者需要更長時間(14-30d)。其它糖類發酵實驗方法相同。5.觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡。6.其它糖類(阿拉伯糖，乳糖，纖維二糖，蔗糖，木糖，半乳糖，鼠李糖，麥芽糖，核糖，果糖，棉籽糖，海藻糖，蜜二糖，山梨醇，甘露醇)發酵實驗方法同上述方法。。_表1糖發酵實驗結果_實驗所用糖類實驗結果實驗所用糖類實驗結果~~葡萄糖+阿拉伯糖乳糖+纖維二糖蔗糖+木糖半乳糖+鼠李糖麥芽糖+果糖+海藻糖-山梨醇-淀粉_葡萄糖產氣胄糖糖醇酸錄子二露氨棉蜜甘精上述實驗表明該菌株可能屬于馬乳酒樣乳桿菌屬，該菌株最終所在的屬和種的結果通過16SrRNA基因的部分序列的分析確定，該菌株的DNA測序過程是首先在它16SrRNA基因和ISR區域序列的基礎上設計一個通用引物，乳酸菌的rDNA序列是從基因庫中得到的。引物P1(5，-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，)和P2(5'—TACCGCGGCTGCTGGCAC-3，)分別對應16SrDNA的828和542549的位置，該兩個引物用來克隆目標分離物的16SrRNA基因。從MRS過夜液體培養提取總的染色體DNA的方法已由Forsman和Alatossava所闡述。DNA片段的擴增過程如下初始變性94t:，10min;接著94"C，30s變性，30個循環；退火58°C，30s;延伸72°C，lmin;最后延伸階段72。C，10min。檢測后長度大約550bp的擴增產物使用DNA序列試劑盒來測序，其核苷酸序歹(l通過BLAST(BLAST全禾爾BasicLocalAlignmentSearchTool艮卩"局部相似性基本査詢工具"，是由美國國立生物技術信息中心(NCBI)開發的一個基于序列相似性的數據庫搜索程序)分析相似性。16SrRNA基因多個區域的大約550個堿基對被擴增，500個堿基對被測序。通過BLAST的核苷酸序列來分析序列的相似性，結果表明該菌株與馬乳酒樣乳桿菌高加索奶粒亞種和馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種相似度達100%。但是兩個亞種間的不同物理實驗結果，如該菌株能在15'C生長，凸菌落表面極其光滑，大量產胞外多糖，陰性七葉苷水解反應都表明該菌株屬于馬乳酒亞種，所以該菌株被鑒定為馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種并命名為馬乳酒樣乳桿菌馬乳酒亞種ZW3。4.該菌株的胞外多糖的分離、純化將ZW3菌株在500ml搖瓶的液體乳清培養基(與"產胞外多糖菌株的復篩"步驟中使用的液體乳清培養基的組分及各組分的含量相同)中3(TC厭氧振蕩培養72h;然后將搖瓶在10(TC的溫度條件下加熱30min來溶解結合在細胞上的胞外多糖；加熱后，再將搖瓶在12000rpm的條件下離心15min;離心后，分離出的上清夜中加入等體積的冷無水乙醇進行胞外多糖沉淀的粗提，溫度為4'C，過夜沉淀；沉淀后的產物在12000rpm的條件下離心15min;回收沉淀物，將其溶于溫度為低于5(TC，體積為100ml的蒸餾水中，然后加入等體積的冷無水乙醇，在4°C，25000g的條件下離心25min;將分離出的的胞外多糖沉淀物再次溶于溫度為低于5CTC蒸餾水中，蒸餾水的量不超過20ml，然后4。C透析72h，每天更換三次蒸餾水，這樣小分子的中性糖就被去除，然后把透析袋內容物進行冷凍干燥得到部分純化的胞外多糖；部分純化的胞外多糖再溶于14%三氯乙酸并攪拌過夜進行進一步的純化，析出的蛋白通過12000g離心15min去除，將分離出的上清液調pH為7，再加入等體積的乙醇于-2(TC進行沉淀，分離出沉淀物后溶于雙蒸水，冷凍干燥后得到進一步純化的胞外多糖。5.該菌株胞外多糖的分析細胞游離培養基黏度的測定(1).測定方法細胞游離培養基中發酵液的黏度通過室溫下使用帶有紫外吸收計主軸的BrookfieldRVDVIII+粘度計進行測定，流動特性通過增加剪切率(0400s—')進行分析。(2).測定結果細胞游離培養基(未預熱)的流變特性的測定是相對于黏度和凝膠強度測定進行的。上清液剪切力的測量表明高聚物溶液黏度(")隨著剪切力(O的增加而下降，并且由于剪切力的影響它具有非牛頓流的特性。起初測量的黏度非常高，達到i.e27mPa，隨后由于剪切力的增加黏度開始下降。因此，ZW3菌株胞外多糖的發酵溶液呈現抵制假塑性的行為。紅外光譜分析(1).分析方法純化的ZW3菌株胞外多糖的主要結構通過傅立葉變換紅外光譜進行測定。ZW3菌株胞外多糖的紅外光譜圖使用KBr法得到。ZW3菌株胞外多糖樣品加入KBr球團中，其比例為樣品KBr為l:100，傅立葉變換紅外光譜圖通過BrukerVector22儀器在4000-400cm—1區域得到,分辨率為4cm—1。使用BrukerOPUS軟件進行數據處理。(2).分析結果傅立葉變換紅外光譜是用來檢測生物大分子結構的一種有效的方法，碳水化合物如黃原膠的組成可以通過1040cnT1(乙醇內部的C-O鍵)，2940cm—1(C-H鍵)和3400cm—1(-OH鍵)的波峰數來分析。純化后的ZW3菌株胞外多糖的紅外光譜圖如圖1所示，可以看出從2950到1200cm—'峰的復雜性。ZW3菌株胞外多糖含有相當數量的羥基，它能夠屏蔽大量的3000cm—1以上區域的圓形吸收帶，在那個區域中的吸收帶具有羥基典型的圓形吸收帶的特點，由此可以表明這種物質就是多糖。ZW3菌株胞外多糖的紅外光譜揭示了它的特征功能，比如3，405cm—i處廣泛伸展的羥基組，2924cn^處甲基組弱的C-H峰。1000-1200cm—'區域寬的C-0-C,C-0峰說明碳水化合物的存在，所以在指紋區域(低于1500cii^區域，此處一個峰帶對應一個分子)1067處出現一個最強吸收說明這種物質就是多糖。在1643cirf'處的強吸收證明酰胺I〉C=0的存在，C-N彎曲峰說明是蛋白質或多肽胺類，在1378cm—'處出現在峰能夠斷定COO一中的〉oo健和c-0鍵。聚合物的紅外光譜證明了羰基的存在，是二價粒子的結合部位。此外，光譜也表明了羧基，羥基，胺類的存在，這些基團都與絮凝有關，類似于聚合電解質。顯然ZW3菌株胞外多糖不同于藻類多糖，因為它在1240cn^區域存在附加峰，證實為o-乙酰酯類的存在。糖分分析(1).分析方法糖類組成的測定試驗，首先將ZW3菌株胞外多糖在2MTFA中進行水解G2(TC，2h)，得到的糖就會轉變成相應的糖醇乙酯，然后使用氣相色譜質譜進行分析。標準的糖醇乙酯是通過將等比例的鼠李糖，葡萄糖，核糖，阿拉伯糖，木糖，甘露醇和半乳糖的初始混合物置于與胞外多糖相同實驗條件下作用產生的。胞外多糖組成是通過比較糖醇乙酯與混合的標準糖醇乙酯不同峰值的滯留時間來測定的。數據分析使用VarianGC/MS4000儀器(VF-5ms30mX0.25mmX0.10um柱)，實驗條件為注入器溫度320°C，分光比10，柱流動lml/min，載氣He，99.999%，烘箱溫度150°C(保溫2min)到300。C(保溫2min)，溫度升高梯度為10°C/min，電離EI全掃描(2).分析結果ZW3菌株胞外多糖的組成通過氣相質譜色譜進行分析，如圖2所示，色譜表明ZW3胞外多糖僅有葡萄糖和半乳糖組成，不同糖環的存在表明胞外多糖是一種雜多糖。在對以往的開菲爾粒中分離出的馬乳酒樣乳桿菌類胞外多糖的研究中得出過相類似的生化組成，因此在本次對照實驗中我們得出的結果與以往并沒有什么不同。ZW3菌株生長于50ml液體乳清培養基中，培養4872h之后，發酵液在12000rpm，4。C條件下離心15min，去除菌體后，將上清液進行透析，ZW3菌株胞外多糖的量通過苯酚硫酸法進行測定并以葡萄糖作為標準。其產量可達到1500mg/L以上。熱學性能分析(1).分析方法ZW3菌株胞外多糖的熱力學性能通過使用不同的量熱計(DSCModel141SETARAMScientific&IndustrialEquipmentCoLimited.France)來測定。在鋁盤上放置4.2mg干燥的胞外多糖樣品，然后密封進行分析，使用一個空盤作為對照，測定其熔點和焓變。溫度20°C-3(TC加熱速率為10°C/min。(2).分析結果除了化學特性外，胞外多糖的應用主要依靠于它的熱性能和流變性。胞外多糖的熱力學性能，熱吸收和熱釋放都伴隨著高聚物結構的物理變形或晶體的融化。ZW3菌株胞外多糖的能量水平可用不同的量熱計在2535(TC范圍內測量，并且可以黃原膠和瓜爾膠作為標準進行比較。如表1所示，ZW3菌株胞外多糖、黃原膠和瓜爾膠分別在93.38°C，153.4°C,490.1'C熔化，并且該吸熱反應地焓變(AH)需要分別在249.7"C，93.2"C和192.9。C熔化lgZW3菌株胞外多糖，黃原膠和瓜爾膠。因此ZW3菌株胞外多糖具有不同于黃原膠和瓜爾膠的熱力學性能。至于多粘芽孢桿菌的突變體分泌的胞外多糖，其熔點為1S3.25。C，熱焓是100.3cal/g。在早期的報道中，果聚糖聚合酶合成果聚糖的熱學性能的測定表明其熔點高達178.4°C，熱焓是1.66cal/g，與殘留微生物分泌的胞外多糖的熱性能相類似。熔點(。c)焓變(Jg—')ZW3菌株胞外多糖97.38249.7黃原膠153.2.493.2瓜爾膠490.1192.9表2ZW3胞外多糖、黃原膠和瓜爾膠熔點和焓變的比較乳化穩定性(1).分析方法ZW3菌株胞外多糖乳化能力的測定方法如Bramhachari等人所述。凍干的ZW3菌株胞外多糖(0.5mg)溶解于0.5ml去離子水中，并在IO(TC加熱大約15-20min，然后于室溫冷卻(25°C)。用磷酸鹽緩沖液(PBS)定容至2ml，樣品中加入0.5ml正十六垸渦旋lmin，在渦旋前后迅速于540nm測其吸光度(A。)。記錄室溫培養30min和60min時吸光度的降低值(At)。注意控制好2mlPBS和0.5ml正十六垸的量。乳化能力的表示通過一定時間內乳化的滯留時間比來表示t:At/AOX100。(2).分析結果微生物和植物的膠質以及一些植物和動物的蛋白質己經被認為具有脂質乳化能力。特別是微生物分泌的黃原膠因具有很強的乳化能力已經被廣泛應用于食品工業領域。胞外多糖的乳化能力被定義為在水中獲得烴類乳劑的強度。大致上來說，乳化劑在最初培養的30min內斷裂，在30和60min后的吸光度讀數能夠很好地說明乳化劑的穩定性。ZW3菌株胞外多糖的乳化穩定性被用來與多種商業多糖來比較，包括黃原膠，瓜爾膠和刺槐膠，結果如表2所示。ZW3菌株胞外多糖純的組分在30和60min后可分別得到91.25%和88.04%的乳化活性，ZW3菌株胞外多糖部分純的組分(與純組分差異不大)乳化活性結果表明30和60min后達88.09%和84.12%。其他多糖如槐豆和瓜爾膠，與ZW3菌株胞外多糖相比顯示出較低的乳化活性，瓜爾膠為72.67%和37.47%，槐豆為86.34%和65.46%，而黃原膠在30和60min后得到92.66%和81.10%乳化活性。所以部分純化的ZW3菌株胞外多糖與黃原膠相比顯示出相似的乳化活性，而純化的ZW3菌株胞外多糖則顯示出更強的乳化活性。由這個結果可以看出，ZW3菌株胞外多糖分別在30和60min具艮強的乳化能力。乳化劑培養時間(min)A540nm處吸光值乳化活性(%)標準物00.173100300.06638.15<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表3各絮凝劑乳化活性對比絮凝能力分析(1).分析方法絮凝能力的測定方法如Lim等人所述。活性炭用來作為檢測材料懸浮于去離子水(濃度為5g/1)中。在試管中加入10ml活性炭懸浮溶液和0.1mlCaC12溶液(6.8mM)，在此混合物中加入不同稀釋度的胞外多糖渦旋30s，接著室溫靜止10min。將上層lml的混濁相置于550nm進行測量。對照實驗不加入胞外多糖，其他條件相同。絮凝能力(％)的表示和計算如下公式絮凝能力二[(B-A)/B]X100X稀釋度其中，A:包含胞外多糖的懸浮液濁度，B:對照組濁度。(2).分析結果絮凝能力的實驗是使胞外多糖濃度保持在O.ling到lmg溶于5mg/1活性炭離散溶液中，并且加入6.8mMCaC12.H20。分離菌的絮凝能力與同樣條件的黃原膠和瓜爾膠相比較。起初絮凝能力隨著ZW3菌株胞外多糖濃度的升高而增強，當濃度增至0.3-0.5mg/l時絮凝能力達到最強，此后隨著ZW3菌株胞外多糖的升高絮凝能力降低。在實驗溶液中，最優的絮凝濃度為0.4mg/ml。而黃原膠和瓜爾膠的最優絮凝濃度分別為0.3mg/l和0.5rag/l。如圖3所示，圖中直觀地說明起初絮凝能力隨著濃度的升高而增強，達到最高之后隨著濃度的升高而降低，其原因可能是多余的絮凝劑的吸附作用使顆粒不穩定造成的。由于過多的絮凝劑不完全分散，只有在絮凝劑外圍的顆粒在那時參與了絮凝反應。大分子量的絮凝劑通常很長，所以有足夠數量的功能基團作為橋梁把許多懸浮顆粒吸引過來，因此在絮凝反應中形成了較大體積的絮凝物。ZW3菌株胞外多糖具有比瓜爾膠更強的絮凝能力，幾乎與黃原膠差不多。此外，ZW3菌株胞外多糖的絮凝能力也可以通過紅外光譜分析得到。由于ZW3菌株胞外多糖具有生物降解性，并且對人體和環境都無害，所以它被認為在廢水處理，飲用水生產和下游加工等食品領域作為很有效的絮凝劑。權利要求1、一種馬乳酒亞種ZW3菌株，其特征在于該菌株保藏于中國科學院微生物研究所菌種保藏中心，保藏日期是2008年12月18日，保藏號是CGMCC2809。2、根據權利要求1所述的馬乳酒亞種ZW3菌株，其特征在于所述菌株通過革蘭氏染色反應和過氧化氫酶反應鑒定，屬于革蘭氏陽性菌，過氧化氫酶陰性菌，菌株外形呈桿狀，凸菌落表面極其光滑，在15"C，37'C和45'C條件下生長。全文摘要本發明涉及一種馬乳酒亞種ZW3菌株，該菌株從開菲爾粒中經過篩選分離得到，并被保藏于中國科學院微生物研究所菌種保藏中心，保藏日期是2008年12月18日，保藏號是CGMCC2809。本發明的ZW3菌株具有熱穩定性好、乳化能力強、胞外多糖產量高的優點，從ZW3菌株發酵液中分離純化得到胞外多糖是大分子生物多糖，既可以作為食品工業中的增稠劑、乳化劑，又可以作為益生素促進腸道內其他益生菌的生長，又與益生菌的抗腫瘤、抗瘺管、免疫調節、降膽固醇或調節血壓作用有關；而且該胞外多糖具有生物降解性，對人體和環境無害，它可以作為一種在廢水處理、飲用水生產和下游加工等食品領域中有效的絮凝劑。文檔編號C12N1/20GK101586090SQ20091006840公開日2009年11月25日申請日期2009年4月8日優先權日2009年4月8日發明者超李,王艷萍,阿哈邁德申請人:天津科技大學