專利名稱：一種培育耐旱植物的方法及其專用重組質粒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種培育耐旱植物的方法及其專用重組質粒。
背景技術：
干旱與水資源短缺已成為制約世界農業和社會發展的重要因素，同時受溫室效 應的影響，水資源短缺的問題將愈來愈突出。玉米是世界上三大糧食作物之一，也是重要 的飼料作物，在世界農業生產中占有相當重要的地位。我國是世界上第二大玉米生產國， 也是最大的玉米消費國。干旱是影響玉米產量的重要因素之一，也是限制我國玉米生產 發展和產量提高的第一要素(Hu R-F(胡瑞法)，Meng Erika C-H, Zhang S_H(張世煌)， Shi X-H(石曉華)· Prioritization for maize research anddevelopment in China. Sci Agric Sin (中國農業科學)，2004，37 (6) :781_787 (inChinese with English abstract))。 因此，國內外對玉米抗旱育種的研究越來越重視，然而由于玉米抗旱性狀屬于數量性狀，采 用傳統育種方法獲得優良抗旱品種十分困難。禾_轉基因技術將具有優良性狀的外源基因 導入作物中，培育出具有優良性狀的作物新品種，為作物的抗逆育種開辟了一條新的途徑。植物的轉基因抗逆育種，主要有3個方面的問題一方面是目的基因的選擇，主 要包括功能抗逆基因和調控抗逆基因，轉錄因子由于能調控下游一系列抗逆基因的表達而 逐漸受到人們的重視；其次是啟動子的選擇，由于抗逆基因的組成型表達會給正常生長條 件下的植物帶來負面影響，而用脅迫誘導的啟動子驅動時對轉基因植株生長的影響很小 (Yamaguchi-Shinozaki K, Shinozaki K. Improving plantdrought, salt and freezing tolerance by gene transfer of a singlestress-inducible transcription factor. Novartis Found Symp，2001，236 :176_186)，因此抗逆基因工程需要選擇逆境誘導表達的 啟動子；轉基因抗逆育種的另一重要方面是對獲得的轉基因植株進行抗逆性的評估，需要 從分子水平、生理水平和代謝水平上對獲得的轉基因植物進行檢測，對于轉轉錄因子抗逆 基因工程育種來說，逆境下其下游調控的抗逆基因表達水平的檢測也很重要。植物在非生物脅迫的脅迫下主要表達兩類基因編碼產物為直接保護植物免受 環境脅迫的功能蛋白類的基因及調控基因表達和脅迫信號轉導的基因；第一類基因包 括LEA蛋白基因、抗凍蛋白基因、脯氨酸合成酶基因等；第二類基因包括各種激酶和轉錄 因子等(Kasuga M，Liu Q，Miura S，Yamaguchi-Shinozaki K，ShinozakiK. Improving plant drought, salt, and freezing tolerance by gene transferof a single stress inducible transcription factor. Nat Biotechnol，1999，17 :287_291)。轉錄因子因 為調控下游一系列抗逆基因的表達而逐漸受到重視，轉轉錄因子抗逆基因工程的研究 也大量展幵(Hsieh T H，Lee J T，Charng Y Y，ChanM T. Tomato plants ectopicaly expressing Arabidopsis CBFlshow enhancedresistance to water deficit stress. Plant Physiol，2002，130 :618_626) (Lee S C，Choi H W，Hwang I S，Choi D S，Hwang B K.Functional roles ofthe pepper pathogen-induced bZIP transcription factor， CAbZIPl， in enhancedresistance to pathogen infection and environmentalstresses. Planta, 2006, 224 1209-1225) (Dai X Y, Xu Y Y, Ma Q B, Xu W Y, Wang T, Xue Y B, ChongK. Overexpression of an R1R2R3MYB gene, 0sMYB3R_2, increases tolerance tofreezing, drought, and salt stress in transgenic Arabidopsis. Plant Physiol, 2007,143 1739-1751)(Gutha L R，Reddy A R.Rice DREBlB promoter showsdistinct stress-specific responses, and the overexpression of cDNA intobacco confers improved abiotic and biotic stress tolerance. Plant Mol Biol. 2008,68 :533_555)。CBF轉錄因子是一類受低溫或干旱誘導的轉錄因子，它們特異地與CRT/ DRE(C-repeat dehydrat ion-responsive element)DNA i周控元件結合，激 舌下訪字冷誘 導或脫水誘導基因的表達，從而提高植物的抗逆能力。CBF4轉錄因子是擬南芥中的 干旱應答轉錄因子，其在擬南芥中超表達可提高擬南芥的抗旱和抗凍能力(Haake V, Cook D, Ri echmann J L, Pineda 0, Thomashow M F, Zhang J Ζ.Transcription factor CBF4is a regulator of drought adaptation inArabidopsis. Plant Physiol, 2002，130 =639-648) 0 rd29A基因是擬南芥中受干旱、高鹽、低溫脅迫等誘導表達的基因 (Yamaguchi-Shinozaki K, Shinozaki K. Characterization of the expression of a desiccation-responsive rd29geneof Arabidopsis thaliana and analysis of its promoter in transgenic plants. Mol Gen Genet, 1993, 236 :331_340)。

發明內容
本發明的目的是提供一種培育耐旱植物的方法及其專用重組質粒。本發明提供的重組質粒，是含有CBF4基因的重組質粒；所述重組質粒中，CBF4基 因由擬南芥rd29A基因(擬南芥親水蛋白rd29A基因)的啟動子驅動。所述重組質粒可為在pSP72質粒中插入如下DNA片段得到的重組質粒在BamHI 和SacI酶切位點間插入擬南芥CBF4基因；在Hind III和Bam HI酶切位點間插入擬南芥 rd29A(RD29A)基因的啟動子；在HindIIII位點插入DNA片段B ；所述DNA片段B自上游至 下游依次為CaMV35S啟動子、玉米Adhl內含子和EPSP基因。所述CaMV35S啟動子、玉米Adhl內含子的制備方法如下用HindIII和BamHI酶 切質粒 pBARGUS(Vasi 1, V.，et al, Bio/technology, 10(6) :667_674，1992)回收 1. Okb 片 段，該片段含CaMV35S啟動子(0. 45kb)和玉米Adhl內含子(0. 55kb)序列。所述EPSP基因的核苷酸序列具體可為GenBank Accession Number X63374. 1自 5’末端第1至1335位核苷酸。所述重組質粒還可為在PSP72質粒中插入如下DNA片段得到的重組質粒在 BamHI和Sac I酶切位點間插入擬南芥CBF4基因；在Hind III和Bam HI酶切位點間插入 擬南芥rd29A基因的啟動子。所述CBF4基因的核苷酸序列具體可為GenBank Accession Number NM_124578自 5’末端第1至675位核苷酸；所述擬南芥親水蛋白rd29A基因的啟動子的核苷酸序列具體 可為 GenBank Accession Number D13044 自 5，末端第 3928 至 5410 位核苷酸。所述重組質粒在培育轉基因植物中的應用也屬于本發明的保護范圍。所述轉基因植株具體可為抗旱轉基因植物，如抗旱轉基因玉米。本發明還保護一種培育抗旱植物的方法，是將所述重組質粒導入植物細胞中，得到抗旱植物。所述植物具體可為玉米。本發明還保護一種培育脯氨酸含量和/或葉綠色含量提高的植物的方法，是將所述重組質粒導入植物中，得到脯氨酸含量和/或葉綠色含量提高的植物。所述植物具體可 為玉米。本研究用PCR方法克隆了擬南芥菜脫水應答轉錄因子CBF4基因，以逆境誘導表達 基因rd29A的啟動子為驅動，構建了逆境誘導表達載體PBAC146。用基因槍轉化法轉化玉米 優良自交系的幼胚和胚性愈傷組織，轟擊后的愈傷組織經過篩選、分化和植株再生過程，共 獲得36棵轉基因植株。經PCR、PCR-Southern和Southern檢測表明，外源目的基因已成功 整合到部分轉基因玉米株系的基因組中。人工干旱處理下，轉基因株系的抗旱生理指標測 定顯示，一個轉基因株系的脯氨酸含量和葉綠素含量比野生型對照提高一倍，間接表明轉 基因株系的抗旱能力在某種程度上有所提高。


圖1為pBAC146重組質粒的圖譜。圖2為愈傷組織的誘導、分化與轉基因玉米苗的田間移栽；A 玉米幼胚誘導培養基上誘導愈傷組織；B 愈傷在篩選培養基上篩選；C 分化出 苗；D 壯苗；E 移栽。圖3為轉基因Ttl代植株外源CBF4基因片段的PCR檢測；M :DL2000plus ladder ；+ 陽性質粒pBAC146 ；0 空白；-陰性對照(ck) ；1 12 轉基因玉米Ttl代植株。圖4為轉基因T1代植株外源CBF4基因片段的PCR檢測；M :DL2000plus ladder ；+ 陽性質粒 pBAC146 ；0 空白；_ 陰性對照(ck) ；1 4 轉基因玉米T1代植株。圖5為轉基因T1代植株外源CBF4基因片段的PCR-Southern分析；+ 陽性質粒PBAC146 ；0 空白；-陰性對照(ck) ；1 4 轉基因玉米T1代植株。圖6為轉基因Tl代玉米植株的Southern雜交檢測；+ 陽性質粒pBAC146 ；0 陰性對照(ck) ； 1 4 轉基因植株。圖7為轉基因玉米脯氨酸含量測定結果；Ck 轉空載體植株(對照)；1 8 轉基因植株。圖8為轉基因玉米葉綠素含量測定結果；Ck 轉空載體植株(對照)；1 8 轉基因植株。
具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自 常規生化試劑商店購買得到的。玉米遼單青貯178(北京農業生物技術研究中心作物遺傳育種實驗室)； pGEM-Teasy Vector、T4DNA連接酶等購自Promega公司；Taq DNA聚合酶、氨芐青霉素、 IPTG、X-gal等試劑均購自大連寶生物工程有限公司；DNA回收試劑盒購自天根生化科技公司；限制性內切酶購自Promega、New England Biolabs ；地高辛(DIG)標記與檢測試劑盒和 化學發光檢測試劑盒購自Roche Diagnostics GmbH公司；普通生化試劑購自Sigma公司、 Promega公司或國產。基因槍型號PDS_1000/He (BioRad)實施例1、重組質粒pBAC146的構建一、重組質粒pSHK49H3的構建1、將質粒 pBARGUS(Vasil，V.，et al, Bio/technology, 10(6) :667_674，1992)用 HindIII和BamHI酶切，回收1. Okb片段，該片段含CaMV35S啟動子(0. 45kb) +玉米Adhl內 含子(0. 55kb)序列。2、將步驟1得到的1. Okb片段插入到pSP72的HindIII和BamHI位點，得到重組質粒。3、將編碼抗除草劑草甘膦的玉米EPSP基因(GenBank Accession NumberX63374. 1 自5’末端第1至1335核苷酸序列)插入步驟2得到的重組質粒的BamHI和EcoRI位點間， 獲得重組質粒PSHK49。4、將重組質粒pSHK49用EcoRI位點酶切后補成平端，引入含HindIII位點的適配 子(adaptor) CCCAAGCTTGGG序列，將得到的重組質粒命名為重組質粒pSHK49H3。二、重組質粒pBAC145的構建1、制備擬南芥 CBF4 基因(GenBank Accession Number NM124578 自 5，末端第 1 至675核苷酸)。2、制備擬南芥 rd29A 基因啟動子(GenBank Accession Number D13044 自 5，末端 第3928至5410位核苷酸)。3、將 CBF4 基因用 Bam HI 和 SacI 酶切后插入到 pSP72 (Promega)的 Bam HI 和 Sac I位點間，得到重組質粒。4、將rd29A基因啟動子用HindIII和Bam HI酶切后插入到步驟3得到的重組質 粒的Hind III和Bam HI酶切位點間，得到重組質粒pBAC145。三、重組質粒pBAC146的構建用HindIII酶切重組質粒pSHK49H3，回收2. 3kb片段(該片段含 35S+intron+EPSP)，將該2. 3kb片段插入到重組質粒的pBAC145的HindIIII酶切位點間， 選擇正向插入陽性質粒，進行測序，測序結果表明獲得了重組質粒pBAC146(如圖1所示)。pBAC146以CaMV 35S啟動子和玉米Adhl基因的Intronl驅動的EPSP基因作為選 擇標記基因，目的基因CBF4以擬南芥親水蛋白rd29A基因的啟動子驅動。rd29A基因的啟 動子在受到干旱、冷害、鹽漬等脅迫時表達，在正常條件下并不表達或表達量很低，對轉基 因植株的正常生長沒有影響。四、對照質粒的構建1、重組質粒pSHK49H3的構建方法同實施例1的步驟一。2、對照質粒的構建用HindIII酶切重組質粒pSHK49H3，回收2. 3kb片段(該片段含 35S+intron+EPSP)，將該2. 3kb片段插入到pSP72 (Promega)的HindIIII酶切位點，選擇正 向插入陽性質粒，進行測序，測序結果表明獲得了含攜帶DNA片段B的重組質粒，將其作為對照質粒；所述DNA片段B自上游至下游依次為CaMV35S啟動子、玉米Adhl內含子和EPSP基因。實施例2、轉基因玉米的獲得和鑒定一、轉基因玉米的獲得取授粉后12d左右的遼單青貯178的果穗，經75%乙醇表面消毒后挑取其幼胚接 種到誘導培養基(N6基本培養基+10mgL-1 AgNO3+100mg L-1肌醇+2mg L-12,4-0+308 L-1 蔗糖+7g L—1瓊脂)上，暗培養3 5d后誘導出胚性愈傷組織。純化好的PBAC146質粒 調整濃度為Iygy L—1，按張曉東等的方法(Zhang X-D (張曉東)，Li D-M (李冬梅)，Xu W-Y (徐文英)，Jiang Y-Y (蔣有繹)，Hu D-F (胡道芬)，HanL-X (韓立新)· Development of transgenic wheat by biolistic bombardmenttransferring Basta resistance gene and novel HMW Glutenin subumit genes. Acta Agric Boreali—Sin (華北農學 艮)，1997, 12(1) :133-136(in Chinese))進行基因槍微彈的制備，PDS-1000/He型基因槍轟擊胚性愈 傷組織，5d后將愈傷組織轉移到含有草甘膦的篩選培養基(誘導培養基中加入Img L—1草 甘膦)上篩選20d左右。然后選取生長正常的愈傷組織轉移到分化培養基(N6基本培養基 +0. 5mg L-11AgNO3+100mg L-1 肌醇+1. 5mg L^KT+SOg L—1 蔗糖+7g Γ1 瓊脂+0. 5mg L-1 草甘 膦)上分化，分化的幼苗進行壯苗后移栽到溫室。獲得轉基因植株的過程中，在各個時期進行觀察和拍照，見圖2。共獲得36株轉基 因再生植株(T0代)。用對照質粒代替PBAC146質粒，其它步驟同上，得到轉空載體玉米，作為對照。二、轉基因玉米的鑒定(一)Ttl代轉基因玉米植株的鑒定 用CTAB法對轉基因玉米葉片進行基因組DNA的提取，根據rd29A基因片段和CBF4 基因片段設計引物(上游引物為rd29A5 5，-AGGGTTTGATTACTTCTATTGG-3 ’ ；下游引物為 rdcbf3 :5，-TATGATTCCAGCCAACTTCC-3，；見序列表的序列1和序列2)，對36株轉基因植株 (Ttl代)進行PCR檢測。轉空載體玉米植株為陰性對照，PBAC146為陽性對照，水為空白對 照。PCR 反應體系ddH2017. 3μ L，DNA 1 μ L (1 μ g μ L-1)，10 X PCR Reaction Buffer2. 5 μ L, dNTPs (2. 5mmol L-1) 2 μ L,上游引物 1 μ L,下游引物 1 μ L, Taq DNA 聚合酶 (5U μ L-1)。· 2μ L。PCR 反應程序95°C變性 5min ；94°C變性 50s，45°C復性 50s，72°C延伸 50s，共35個循環；最后72°C延伸lOmin。反應產物用0. 8%瓊脂糖凝膠電泳檢測。陽性質粒和13株轉基因植株擴增出了 669bp的目標片段，而轉空載體玉米植株 (陰性對照)和水(空白對照)沒有擴增出帶，初步說明外源CBF4基因片段整合到部分轉 化玉米株系的基因組。部分植株PCR檢測結果見圖3。(二)T1代轉基因玉米植株的鑒定獲得的Ttl代轉基因植株移栽到溫室后，4株成功結實獲得T1代，對轉基因植株的 T1代進行鑒定，轉空載體玉米植株的T1代作為陰性對照，PBAC146為陽性對照，水為空白對眧。1、PCR 鑒定方法同步驟(一)，檢測結果如圖4所示。有四個轉基因株系擴增出669bp目標片段，表明這四個轉基因株系均整合進了外源目的基因片段。2、PCR-Southern 鑒定為了防止假陽性的出現，將步驟1鑒定陽性的四個轉基因株系進行PCR-Southern鑒定，步驟如下(1)以pBAC146為模板，rd29A5和rdcbf3為上下游引物，按照Roche公司PCR DIG Probe Synthesis Kit使用手冊提供的步驟進行探針標記，PCR所得產物經膠回收后作為雜 交探針。(2)對轉基因植株基因組DNA進行PCR反應，反應體系和反應程序步驟(一)，PCR 產物電泳后按照785型真空轉膜儀(Bio-Rad)使用手冊進行轉膜，信號檢測按照Roche公 司的DIG DNA Labeling and Detection Kit使用手冊提供的方法進行。結果如圖5所示。四個轉基因株系的PCR-Southern結果也為陽性，進一步驗證了 PCR結果。3、Southern 雜交鑒定為避免PCR及PCR-Southern檢測結果中假陽性的出現，又對PCR-Southern檢測 呈陽性的四個株系進行了 Southern雜交檢測，步驟如下(1)為了使用適宜大小的Southern檢測探針(500bp左右最佳)，根據CBF4 基因序列設計引物(上游引物5’ -CTGGGAGGAAGAAGTTTCGT GAG-3’ ；下游引物 5，-CGTTATGATTCCAGCCAACTTCC-3，)，用該引物按照 Roche 公司 PCR DIG ProbeSynthesis Kit使用手冊提供的步驟進行探針標記。(2) Southern 步驟參照 Sambrook 等(Sambrook J,Russell D. MolecularCloning A Laboratory Manual,3rd edn. New York CoId Spring HarborLaboratory Press,2001. PP 304-331)方法進行。植物基因組DNA利用HindIII進行完全酶切。酶切產物濃縮后、 0. 8%瓊脂糖凝膠、25V電泳過夜，轉膜、雜交，然后進行信號檢測(同步驟2)。結果如圖6所示。陽性質粒和3個轉基因株系出現特異性雜交信號，轉空載體植 株沒有出現雜交信號，由于質粒PBAC146上含有兩個HindIII酶切位點，因此Southern雜 交結果不能看出外源基因導入的拷貝數。Southern雜交結果進一步證實外源基因CBF4成 功導入到轉基因玉米基因組中。三、轉基因玉米的耐旱能力鑒定為了驗證所獲得的轉基因株系的抗旱能力，將T1代長勢較好的并且經分子檢測陽 性的1個轉基因株系所獲得的種子(T2代)種植到溫室花盆中，并通過PCR的方法篩選到8 個陽性植株，將該8個植株干旱處理如下(轉空載體玉米植株的T2代作為對照)將植株的3周齡苗置于26_28°C、相對濕度為15_20%、連續光照下，不澆水，觀察 表型并拍照同。實驗共設三次重復，每次重復中，所測試的各株系植株均分別為15株。1、轉基因玉米植株的脯氨酸含量測定脯氨酸作為一種重要的細胞內滲透調節物質，其在植物受到水分脅迫時可出現大 量積累。大量研究表明，在干旱脅迫下，玉米不同生育期的葉片中游離脯氨酸含量均有明顯 增加。一般來說，同一品種，脯氨酸含量越高，抗旱性越強。轉基因玉米的T2代人工抗旱處理6d后，用磺基水楊酸法測定其葉片中的游離脯 氨酸含量，測定方法參見王軍衛等(Wang J W，Yang F P，Chen X Q，Zhang L Q，Geng D M，Zhang X D, Song Y Z, Zhang G S. Induced expression of DREBtranscriptional factor and study on its physiological effects of droughttolerance in transgenic wheat. Acta Genet Sin, 2006，33 :468_476)。結果見圖7。除2號和5號轉基因植株的脯氨酸含量比對照較低外，其余轉基因植 株均比對照高，其中7號最高，達到了 199. 53mg L—1，將近對照的2. 5倍，而其余也比對照高 出20%以上，脯氨酸含量測定結果間接表明轉基因植株的抗旱能力高于轉空載體植株。2、轉基因玉米植株的葉綠素含量測定葉綠素是植物葉片的主要光合色素，葉綠素含量是植物生理研究中的重要指標。轉基因玉米的T2代人工抗旱處理6d后，參照彭運生等(Peng Y_S(彭運生)， LiuE(>ClJM). Comparative study about extraction method of chlorophyll. ActaAgric Univ Pekingsis (北京農業大學學報)，1992，18 (3) :247_250(in Chinese))的方法進行葉 綠素含量測定，取玉米葉片的中部，準確稱取鮮重(W)，剪碎，置于15mL試管中，采用丙酮 無水乙醇(2 1)混合液浸提，每個樣品加IOml混合液，絕對黑暗的環境中浸提24h。取 提取液于721型分光光度計分別在波長663nm和645nm下讀取OD值，按以下公式計算Ca、 Cb。
葉綠素 Ca=(12‘7D663_2‘69D645”V
1000W
cb_ (22.69D645 - 4.68D663) * V 1000W結果見圖8。干旱處理下的部分轉基因植株的葉綠素含量遠遠高于對照水平，其 中5號(2. 25mg g-1)葉綠素含量是對照的2倍，此項結果也表明部分轉基因株系的抗旱性 高于轉空載體株系。序列表<110>北京市農林科學院<120> 一種培育耐旱植物的方法及其專用重組質粒<130>CG6NARY92438<160>2<210>1<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>1agggtttgat tacttctatt gg 22<210>2<211>20<212>DNA
<213>人工序列<220><223><400>2tatgattcca gccaacttcc 20
權利要求
含有CBF4基因的重組質粒；所述重組質粒中，CBF4基因由擬南芥rd29A基因的啟動子驅動。
2.如權利要求1所述的重組質粒，其特征在于所述重組質粒是在PSP72質粒中插入 如下DNA片段得到的在BamHI和Sac I酶切位點間插入擬南芥CBF4基因；在Hind III和 Bam HI酶切位點間插入擬南芥rd29A基因的啟動子；在HindIIII酶切位點插入DNA片段 B ；所述DNA片段B自上游至下游依次為CaMV35S啟動子、玉米Adhl內含子和EPSP基因。
3.如權利要求2所述的重組質粒，其特征在于所述EPSP基因的核苷酸序列為 GenBank Accession Number X63374. 1 自 5，末端第 1 至 1335 位核苷酸。
4.如權利要求1所述的重組質粒，其特征在于所述重組質粒是在PSP72質粒中插入 如下DNA片段得到的在BamHI和Sac I酶切位點間插入擬南芥CBF4基因；在Hind III和 BamHI酶切位點間插入擬南芥rd29A基因的啟動子。
5.如權利要求1至4中任一所述的重組質粒，其特征在于所述CBF4基因的核苷酸序 列為GenBank Accession Number NM_124578自5，末端第1至675位核苷酸；所述擬南芥 rd29A基因的啟動子的核苷酸序列為GenBank Accession Number D13044自5，末端第3928 至5410位核苷酸。
6.權利要求1至5中任一所述重組質粒在培育轉基因植物中的應用。
7.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述轉基因植物為抗旱轉基因植物；所述轉 基因植物為抗旱轉基因玉米。
8.一種培育抗旱植物的方法，是將權利要求1至5中任一所述重組質粒導入植物中，得 到抗旱植物。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于所述植物為玉米。
10.一種培育脯氨酸含量和/或葉綠色含量提高的植物的方法，是將權利要求1至5中 任一所述重組質粒導入植物中，得到脯氨酸含量和/或葉綠色含量提高的植物。
全文摘要
本發明公開了一種培育耐旱植物的方法及其專用重組質粒。本發明提供的重組質粒，是含有CBF4基因的重組質粒；所述重組質粒中，CBF4基因由擬南芥rd29A基因的啟動子驅動。用發明得到的重組質粒轉化玉米的幼胚和胚性愈傷組織，獲得了耐逆性增強的轉基因植株。人工干旱處理下，轉基因植株的脯氨酸含量和葉綠素含量比野生型對照提高一倍，表明轉基因株系的抗旱能力有所提高。本發明具有重大的經濟價值。
文檔編號C12N15/82GK101988073SQ200910090410
公開日2011年3月23日 申請日期2009年7月31日 優先權日2009年7月31日
發明者張曉東, 張立全, 李向龍, 楊東歌, 楊鳳萍, 薛靜, 陳緒清 申請人:北京市農林科學院