專利名稱：：植物耐旱相關蛋白及其編碼基因與它們的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及植物耐旱相關蛋白及其編碼基因與應用，特別涉及一種來源于擬南芥的植物耐旱相關蛋白及其編碼基因與應用。
背景技術：
：糧食問題是當今世界所面臨的幾大難題之一。隨著人類的經濟發展和人口膨脹，水資源短缺現象日益嚴重，直接導致了干旱地區的擴大與干旱化程度的加重，干旱問題已經成為全球關注的問題。因此，了解和認識植物對干旱脅迫的反應機制，進而提高植物特別是農作物的抗旱能力，已成為如何進一步提高作物產量的重要研究工作，倍受世界各國政府和科學家的關注，也是當前生命科學研究的熱點。擬南芥daWop^"a"a朋)是一種典型的模式植物(其作用與實驗鼠、果蠅等模式生物相當)，己被廣泛應用于植物遺傳學、發育生物學和分子生物學的研究。擬南芥約有1.3億個堿基對，約2.7萬個基因。目前大部分基因的功能還不清楚，利用突變技術研究基因功能已經成為一種有效的方法。對擬南芥而言，T-DNA插入突變是主要途徑，并且已經得到大量T-DNA插入突變體。擬南芥的大多數基因在其他植物中都能找到與之同源的序列，有關擬南芥的絕大多數發現也都能應用于其他植物研究。以往的研究已經證明，對擬南芥的研究將幫助科學家找到提高農作物產量的方法。面對農作物生產中日益嚴重的土壤干旱問題，克隆植物耐旱相關基因并對其功能進行研究，對盡快培育作物耐干旱品種有重要的實踐意義。
發明內容本發明的目的是提供一種植物耐旱相關蛋白及其編碼基因與應用。本發明所提供的植物耐旱相關的蛋白，名稱為Jt"7t4r3》^/叩w'sf力a7iay^"ro收力f7bJera/7zO，來源于擬南芥屬擬南芥(^raZ^obpw^Mah'朋a),是如下(a)或(b)的蛋白質(a)由序列表中序列3的氨基酸殘基序列組成的蛋白質；(b)將序列表中序列3的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐旱相關功能的由(a)衍生的蛋白質。其中，序列表中的序列3所示的蛋白序列由849個氨基酸殘基組成。為了使(a)中的AtDT分泌到細胞周質或培養基中或使其功能穩定，可在由序列表中序列3的氨基酸殘基序列組成的蛋白質的N端連接上信號肽序列，為了(a)中的AtDT便于純化，可在由序列表中序列3的氨基酸殘基序列組成的蛋白質的N端或C端連接上如表1所示的標簽。表l.標簽的序列標簽殘基序列Poly-Arg5-6(通常為5個)RRRRRPoly-His2-10(通常為6個)HHHHHHFLAG8麗DDDDKStrep-tagII8WSHPQFEKc—myc11EQKLISEEDL上述(b)中的AtDT可人工合成，也可先合成其編碼基因，再按照下述方法進行生物表達得到。上述(b)中的AtDT的編碼基因可通過將序列表中序列1或序列2的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5'端連上信號肽的編碼序列，和/或在其5'端和/或3'端連上表l所示的標簽的編碼序列得到。上述植物耐旱相關蛋白的編碼基因也屬于本發明的保護范圍。上述植物耐旱相關蛋白的cDNA基因，可具有下述核苷酸序列之一-1)序列表中SEQIDJSf2:1的核苷酸序列；2)在高嚴謹條件下可與l)所述的DNA序列雜交的核苷酸序列。其中，序列表中序列1是由2550個脫氧核苷酸組成，自序列表中序列1的5'端第卜2547位核苷酸序列為編碼序列(0RF)，編碼具有序列表中序列3的氨基酸殘基序列的蛋白質。上述植物耐旱相關蛋白的基因組基因，可具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQIDW:2的核苷酸序列；2)在高嚴謹條件下可與l)所述的DNA序列雜交的核苷酸序列。序列表中序列2由3123個脫氧核苷酸組成，含有6個外顯子和5個內含子。自序列表中序列2的5'端第1—1613位核苷酸為第一個外顯子，序列1的5'端第1698-1821位核苷酸為第二個外顯子，序列1的5'端第1903-2196位核苷酸為第三個外顯子，序列1的5'端第2282-2484位核苷酸為第四個外顯子，序列1的5'端第2572-2862位核苷酸為第五個外顯子，序列1的5'端第3189-3213位核苷酸為第六個外顯子，上述高嚴謹條件可為在0.1XSSPE(或0.1XSSC)，0.19GSDS的溶液中，在65。C4下雜交并洗膜。含有上述植物耐旱相關蛋白的編碼基因的表達載體、轉基因細胞系及宿主菌均屬于本發明的保護范圍。擴增JW7中任一片段的引物對在本發明的保護范圍之內，該引物對中的每一個引物的長度為15到36個堿基，如SEQIDNa:4(5，atggaattccgcaaaccctttaagtctcat3，)禾口SEQIDN2:5(5，ttaacattcaagaagaataattcgccttaaatcaggg3，)。利用任何一種可以引導外源基因在植物中表達的載體，將本發明所提供的力wr基因敲除掉，植物就表現耐旱相關性狀；或者將」wr^^在植株中過量表達，植物就表現干旱敏感性狀。為了便于對轉基因植物細胞或植物進行鑒定及篩選，可對所使用的載體進行加工，如加入植物可選擇性標記或具有抗性的抗生素標記物。被轉化的植物宿主既可以是單子葉植物，也可以是雙子葉植物。本發明的耐旱相關基因對于植物耐干旱分子機制的研究，植物抗逆性品種的選育具有重要的理論及實際意義。如利用本發明的基因可設計小干擾RNA對該基因的表達進行干擾，插入突變該基因或者缺失突變該基因，從而提高植物對干旱的耐受能力。該基因過表達植株也可以作為指示植物，預警旱情。圖1為^f/^在野生型和突變體中的表達結果-RT-PCR;圖2為Jt"r在野生型和J^r過量表達植株中的表達分析結果-Northern雜交；圖3為干旱條件下JW堪因的表達變化結果-RealtimePCR;圖4為野生型、^"r過量表達植株(SUPER::雄7W和SUPER::細7-5)、細r敲除突變體(aWO和^W7恢復突變材料(PAtDT::力z^r株系)在干旱條件下的表型觀察結果。具體實施例方式實施例l、植物耐旱相關的基因及其編碼蛋白的獲得一、Columbia背景的對干旱耐受性增強的擬南芥突變體的獲得對T-DNA插入突變體庫進行篩選，得到一株對干旱脅迫具有耐受能力的突變體。從ABRC(ArabidopsisBiologicalResourceCenter)購得到編號為Salk—133223的T-DNA插入突變體T4代種子(簡稱突變體sMO。1、T-DNA插入突變體Salk_133223的純合體的獲得和鑒定擬南芥野生型(Columbia型)和T-DNA插入突變體Salk—133223材料在MS培養基上生長10天得到幼苗。各取100-200mg為材料，用TRizol(Invitrogen)提取其總RNA，經甲酵變性瓊脂糖凝膠電泳檢査RNA的完整性。按照SUPERSCRIPTII的使用說明，合成單鏈sscDNA。設計引物進行半定量PCR擴增檢測插入基因的表達情況，引物序列為-Primer1:5'AAATCAGCTCCTCCTTTCTGC3，'Primer2:5'GAATTCCGCAAACCCTTTAAG3'。基因的擴增條件如下將合成的單鏈cDNA稀釋10倍，作為以下PCR反應的模板20|iL體系，內含10XPCRBuffer2nL，2.5mMdNTPmix0.4pL，lO^MPrimerl和Primer2各0.4pL，Taqenzyme(15U/pL)0.1^L。在PE9700上擴增95。C預變性5min，95°C30s，59°C30s，72°ClminlOs，共計35個循環；72。C延伸10rain，將獲得的PCR產物(1285bp)，用0.8%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。W基因為看家基因，作為對照。其擴增引物為引物Priraer3:5'ATGCCCCAGGACATCGTGATTTCAT3，，Primer4:5，TTGGCGGCACCCTTAGCTGGATCA3，。其擴增方法為將上述合成的單鏈cDNA稀釋10倍，作為以下PCR反應的模板20pL體系，內含10XPCRBuffer2pL，10mMdNTPmix0.4jiL，10Primer3禾口Primer4各O.4jaL，Taqenzyme(15U/pL)0.1|nL。在PE9700上擴增95。C預變性5min，95°C30s，56°C30s，72°Clmin，共計18個循環；72°。延伸10min，將獲得的PCR產物(685bp)，用0.8%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。結果如圖l所示，野生型植株中擴增到目的條帶，大小為1285bp，而在T-DNA插入突變體Salk_133223中，沒有擴增到目的條帶，說明T-DNA插入突變體Salk—133223中^Zr基因被完全敲除，將T-DNA插入突變體Salk—133223命名為突變體W&。二、本發明耐旱相關基因(/J"7)及其編碼蛋白的獲得1、本發明耐旱相關基因的cDNA的獲得按照步驟一的步驟1的方法提取擬南芥(Col咖bia型)幼苗總RNA、反轉錄為cDNA。以此cDNA為模板、利用分別設有和i〈pnl酶切位點的一對引物進行PCR擴增，得到耐旱相關基因的cDNA全長。引物序列如下Primer5:5，-gctctagaATGGAATTCCGCAAAC-3，(幼al);Primer6:5，-ggggtaccTTAACATTCAAGAAGA-3，(印nl)。采用Takara公司的高保真的PyrobestDNA聚合酶對力W7cDNA全長進行擴增，擴增體系為50pL，含10XPyrobestPCR緩沖液5fjL，10mMdNTPmixl|^L，10j^MPrimer5和Primer6各lpL，PyrobestDNA聚合酶0.25|aL，模板3-5jaL(0.lug)，補充滅菌超純水至50pL，反應體系在冰上進行操作。在PE9700儀器上進行擴增，預變性5min，95。C變性30s，56°C30s，72°C3min，循環數30個，72。C延伸10min。將擴增片段用0.8%的瓊脂糖凝膠進行電泳，回收擴增片段，連接到pID18-T載體，酶切、擴增、測序鑒定，測序結果表明，上述PCR擴增得到的片段具有序列表中序列l的核苷酸序列，為本發明的抗旱相關基因cDNA基因命名為A"7，序列表中序列1的核苷酸序列由2550個堿基組成，其編碼序列為自序列表中序列1的第1一2547位核苷酸，編碼具有序列表中序列3的氨基酸殘基序列。將上述獲得的正確的含有/k"7W的重組載體命名為pMD18-A"7。2、本發明抗旱相關基因的基因組DNA的獲得從ABRC(ArabidopsisBiologicalResourceCenter)購得到編號為F6P23的細菌人工染色體(BAC)。該編號為F6P23的BAC包含」":T全長基因組序列。以此為模板，利用分別設有Xbal和酶切位點的一對引物(Primer5和Primer6)擴增目的基因的全長(3123bp)。采用Takara公司的LATaqDNA聚合酶對」f"7基因全長進行擴增，擴增體系為50^L，含10XLAPCR緩沖液5pL，10mMdNTPmix8fxL，lOjaMPrimerl和Primer2各2pL，LATaqDNA聚合酶0.5fiL，模板3-5fiL(0.l|ag)，補充滅菌超純水至50fiL。在PE9700儀器上進行擴增，預變性5min，95。C變性lmin，56°Clmin，72°C5tnin，循環數30個，72。C延伸10min。將擴增片段用0.8%的瓊脂糖凝膠進行電泳，回收擴增片段，連接到pMD18-T載體，酶切、擴增、測序鑒定，測序結果表明，上述PCR擴增得到的片段具有序列表中序列2的核苷酸序列，為本發明的耐旱相關基因的基因組基因，將其命名為^t"r基因組基因，序列表中序列2的核苷酸序列由3123個核苷酸堿基組成，自序列表中序列2的5'端第1一1613位核苷酸為第一個外顯子，序列1的5'端第1698-1821位核苷酸為第二個外顯子，序列1的5'端第1903-2196位核苷酸為第三個外顯子，序列1的5'端第2282-2484位核苷酸為第四個外顯子，序列1的5'端第2572-2862位核苷酸為第五個外顯子，序列1的5'端第3189-3213位核苷酸為第六個外顯子，這六個外顯子序列編碼具有序列表中序列3的氨基酸殘基序列。將上述獲得的正確的含有基因組DNA的重組載體命名為pMD18-g^t"7;實施例2、本發明的植物耐旱相關的基因及其編碼蛋白的功能驗證i、^t"r過量表達植株和^"r恢復突變體植株的獲得1)Zt"r過量表達植株(轉Super::^4W觀南芥植株)的獲得釆用實施例1的步驟二的步驟2所獲得的含有/IW堪因組DNA的重組載體pMD18-g^Z7SlpBIB-Super質粒(pBIB-Super載體的構建方法利用引物aagcttGTGGGCCTGTGGTCTCAAGAT和tctagaCTAGAGTCGATTTGGT從質粒pMSP-l(NiM'CuiD,EinsteinJ,NarasimhuluS，VergaraC，GelvinSB.Strenghtandtissuespecificityofchimaericpromotersderivedfromtheoctopineandmannopinesysthasegenes.19957:661-676.)中擴增出長l.lkb的s叩er啟動子序列；將擴增得到的s叩er啟動子用HindIII和XbaI雙酶切，回收s叩er啟動子片段，插入到質粒pBIB(BecherD.Binaryvectorswhichallowtheexchangeofplantselectablemarkersandreportergenes.NucleicAcidsRes.199018:203.)的HindIII和XbaI酶切位點之間中，得到pBIB-Super質粒))同時用內切酶Xbal和Kpnl進行大體系酶切。將所切得的ZW堪因片段和線性化的pBIB-Super質粒片段進行回收，連接，并測序驗證，即獲得驗證正確的含有力基因組基因的重組載體并將其命名為S叩er::W"7;將Super::^W憤入農桿菌株，進而利用農桿菌轉化侵染Columbia野生型擬南芥植株，從而獲得」fZmi量表達Tl代轉Super::^W觀南芥植株。經過在含50mg/L潮霉素的MS培養基上篩選轉Super::^tZm南芥T2代陽性植株并進行分離比統計，在T3代即得到轉Super::^z^7以南芥單拷貝純合株系。2)af&恢復突變體植株(PAtDT:Mz^7)的獲得從ABRC(ArabidopsisBiologicalResourceCenter)購得到編號為F6P23的細菌人工染色體(BAC)。該編號為F6P23的BAC包含^"7全長基因組序列和^f"r啟動子序列。以此為模板，利用分別設有"a歷M和尸"I酶切位點的一對引物擴增目的基因啟動子和目的基因的全長(5840bp)，引物序列如下(下劃線為保護堿基和酶切位點)Primer7:5，-—cgggatccTTATGCGTTCTAAGTGCTACTG一-3Primer8:5，-aactgcagTACGAAGATGAATCCACCCG-3，(尸W工)。采用Takara公司的LATaqDNA聚合酶對^z^7"基因全長及啟動子區域進行擴增，擴增體系為50(iL，含10XLAPCR緩沖液5iiL，10mMdNTPmixl(iL，lO(iMPrimerl和Primer2各2|iL，LATaqDNA聚合酶0.5pL，模板3-5pL(0.lpg)，補充滅菌超純水至50iiL。在PE9700儀器上進行擴增，預變性5min，95。C變性lmin，56°Clmin，72°C7rain，循環數30個，72"C延伸10min。將擴增片段用1%的瓊脂糖凝膠進行電泳，回收擴增片段，連接到pMD18-T載體，酶切、擴增、測序鑒定。測序結果表明，上述PCR擴增得到的片段包含^t"r全長基因組序列及其起始密碼子上游promoter區2717bp的核苷酸序列。將所得^f":T基因promoter區和全長基因組片段與載體pCAMBIA1381連接，構建成重組質粒，并測序驗證，即獲得驗證正確的含有JW7基因組基因及其啟動子序列的重組載體并將其命名為PAtDT::」W7。并將PAtDT:MW7"質粒通過農桿菌轉入突變體植株，從而獲得Tl代轉PAtDT:M^r擬南芥突變體植株。經過在含50mg/L潮霉素的MS培養基上篩選轉PAtDT:J"7擬南芥T2代陽性植株并進行分離比統計，在T3代即得到"W恢復突變體植株(PAtDT::」"7)單拷貝純合株系。2、/1f"7過量表達植株的定量表達Northen雜交檢測將野生型擬南芥(Columbia型)和步驟l得到的^t"7過量表達株系轉Super::擬南芥單拷貝純合株系(名稱分別為SUPER::^Zr-1、SUPER::^Z7M和SUPER::^Zr-5)以及突變體的種子萌發后在MS培養基上生長10天得到幼苗，取100-200mg，用TRizol(Invitrogen)提取其總RNA，經甲醛變性RNA瓊脂糖凝膠電泳檢查RNA的完整性，用紫外分光光度計和電泳方法結合做精確定量。然后分別取相同量的RNA進行定量Northen雜交，其探針序列如序列6所示(自序列表中序列l的5'端第268-829位核苷酸，是A"7基因的特異性較強的序列片斷區域，探針長度為562bp。以步驟二的步驟l中得到的載體pMD18-g力W7為摸板，進行PCR擴增。引物序列如下Primer9:5'-GAGGAAACAGAGGATGTCAGC—-3;Primer10:5，-—TGAGAACCAGCAAGACCACT—-3。采用Takara公司的Pyrobest聚合酶對^"5"基因探針進行擴增，擴增體系為50|iL，含10XPyrobestPCR緩沖液5fiL，10mMd,mixlpL，10jaMPrimerl禾口Primer2各2pL，PyrobestDNA聚合酶0.5pL，模板3pL(0.2|ig)，補充滅菌超純水至50pL。在PE9700儀器上進行擴增，預變性5min,95。C變性lmin，58°Clmin，72°Clmin，循環數30個，72。C延伸10min。將擴增片段用0.8%的瓊脂糖凝膠進行電泳，回收擴增片段，得到相應序列的探針。Northen雜交結果如圖2所示，結果表明在A"7基因過量表達株系SUPER::/k/^-l和SUPER::」Mr-5中^"7"基因的表達量明顯高于野生型。圖2中，1-3為3個^W7基因過量表達株系SUPER:.v!t"7-1、SUPER:.'A"7-4和SUPER::^kZr-5;4為突變體"&，5為野生型擬南芥(Columbia型)。3、干旱條件下^"7基因的表達變化結果-Real-TimePCR實施例中所用的材料為Columbia野生型擬南芥在土中生長3周，取蓮座葉進行干旱處理在溫室中，取蓮座葉的等位葉，于培養皿中放置3小時后，取100-200mg作為材料，用TRizol(Invitrogen)提取總RNA，經甲醛變性RNA電泳檢査RNA的完整性。使用SuperscriptII進行反轉錄，得到的cDNA樣品稀釋5倍作為Real-TimePCR反應的模板。對照樣品為直接取正常生長3周的野生型擬南芥材料。基因特異引物分別為9Primer9:5'GAGCACGGTCTTATGGCTAATC3，；Primerl0:5'ACGTGGAACGAAGAGGCTAGAA3，。PCR反應及其檢測分別使用SYBRGreenMastermix和ABI7500sequencedetectionsystem(AppliedBiosystems)。數據的處理采用ComparativeC丁方法(NatureProtocal，Analyzingreal-timePCRdatabythecomparativeC(T)method,2008,3:1101-1108)。以18SrRNA作為內對照對數據進行歸一化。結果如圖3所示，干旱處理條件下，^t":T基因的表達增加5倍，說明力W7基因受干旱誘導表達。4、野生型、力t"7過量表達植株(SUPER::力t"7-1和SUPER::^t"7-5)、AZr敲除突變體("&)和/itzr咴復材料(轉PA抓力w:r擬南芥)在干旱條件下的表型觀察結果將野生型、v^"7過量表達植株(SUPER::A"r-l和SUPER::A"7-5)、力f5"Z^敲除突變體(WW)和""7恢復材料(步驟1的步驟2)獲得的轉P顧^Z7t以南芥單拷貝純合株系)的種子播種于MS培養基上生長7天，種于土壤中，正常澆水條件(每3天澆水一次)下生長3周后，停止澆水，進行千旱處理。干旱處理21天后進行拍照，同時將進行干旱處理的苗恢復澆水，三天后拍照。同時設置不進行干早處理，繼續正常澆水培養的株系作為對照組。結果如圖4所示在土壤正常澆水條件下生長3周后，JW7的突變體(W&)、^"r過量表達材料(SUPER::^"7HT和SUPER::力fZ7-5)、^Wr咴復突變材料(PAtDT::^4^7)和野生型植株的表型一致；土壤干旱處理3周后，野生型植株和」tZ7恢復突變材料(PMT::^W7)冠部萎蔫變黃，突變體(at&)冠部葉片仍為綠色，略有萎蔫，過量表達材料(SUPER::^"^和SUPER::/k"7-5)較野生型對干旱更為敏感，冠部變黃植株基本死亡；干旱3周后恢復澆水，可以觀察到野生型和力^r咴復突變材料(Pa。t::」"r)的部分植株能繼續生長，突變體"&都能繼續正常生長，過量表達材料(SUPER::A"7W和SUPER::^Zr-5)不能繼續生長，全部死亡。圖4中，1為^Z7"的突變體(3Wf)，2為野生型擬南芥(Columbia型)，3為A"7過量表達材料(SUPER:1)，4為A"7過量表達材料(SUPER:,掘r-5)，5為雄r咴復突變材料(P顧:雄"。上述實驗結果表明ziwr可以增加植物對干旱的敏感性，說明其是植物耐旱相關基因。序列表〈160〉6<210>1<211>2550〈212〉DNA<213>擬南芥屬擬南芥UraZ^cfo;w\s<400>1atgg犯ttccgcaaaccctttaagtctcatagctcgtataaacagattataagcaccgga60gatca^aacgagaagacaaagaaga卿agaaactggcgastcttgacgatggccacatt120gcta^aactcagagctctgggtctagtttcgstgg肌ac3gctataagttctggca_agac180attgcaacagatgattatac33卿gCgggagtttcgatttcccgcaateiccgtgaggag240atcacactcgatgtaaacgaag肌acagagga肌cagaggatgtca_gcaa300ttgtccggttctaaaga^cgagagtcttt11caaaataaacagttcagg360atgtctggttctgtacgttcttgtgLcatcttcgacttcgttttcatcggcceic肌tgcgg420ttaaatttagagcagcagttgg鄉atgaaggag鄉tggttgtaagatgttcatcggtg480aggaaaacagagctagtttcgagggcgaaggcg卿tcgaggttgat卿tccgccacaa540ga卿gg^caacaatactcgagctggatcggg3C3tCggatcagttaagatcaggttta600cttggg卿cactccgatgat3ttgELgg犯gaa_ga_tg￡ittcttcggctgaagaagatgtt660CC￡Lgtgga^tatcgaaagttgaaaatggatgcgataacgttgcttcaatggatgagctta720atcgcactcgtagttgcgttagtgttgagtctagggcttcsta_cttgg3gaaatgcaact780ctatggagccttcatctgtggaaatgggaagtggtcttgctggttctcatctgtgggagg840ctggtttcgggatgcggaatccgaatcatcgtcttctttatcgaaagaaacttccttttg900agga犯cgggttctttacttcgtatacggtgtg鄉3Ctgctgttcagaactgtctctgg960ctcggcctcgtgcttctcgcttggcatttcttgtttgacaagaaagtaga1020ca^agcgstgttcttcttcttatgtctaaaElt3tt3gtgtgttttttgttgagcacggtc1080ttatggctgatcaagacactggtggtgaaagttctagcctcttcgttccacgttagtacc1140tactttgatcggattcaagaagctctgtttcatcattacttgatcgagacgttatctgga1200cctccaatgcttgagttaagc3ggattg3ggaag3gg鄉atcggacgca1260tacaagstgcagaaaggaggagctgatttatcacctgaactttgttccgctgcgtttcct1320C3gg犯aa^gtggaagtacaatgaacatgaagttctctccaatcattccaaagacggga1380agtgataacggaa^tcfLC肌tatcagaaaaacgtttcagct1440tggaacatgaagagactgatga卿Ugtgagaaatgtttccctgagtacgttggacg犯1500caagcgcttcaaaacacgtgtgaagatgaatccactcgacagatacggag1560gctaaagcagctgcaaggaagattttcaag^cgtagctcaacctggcac1620tBtCtgg鄉acttgatgagatttttgcgagt卿cgaggcgatgaagacaatgtgtctc1680ttcg犯ggcgccttagtgaca<ct^￡itc3gCCttg33g犯ctggctggta1740aatgctttcag卿gag肌gagcacttgccttaacactcaatgscaccaaaacagcagtg1800aacaaactccatcacatgattagttttctcactgccattgtcatcatagtcatatggctg1860atccttcttgaaatcgctacttccaagtatcttttatttctaacttcacaagttgtactc1920ttagccttcatgtttgggaactctctcaagaccgtcttcgagtcaatcatcttcctcttc1980atcattcacccttacgatgttggtgatcggttactcatcgacactgtagageitggtggtg2040gagga組gaacattctcacaacagttttcttg卿gctga_c￡iatctg￡i3gattgtgtat2100ccaaatattcttctatggcagaaagcgatccacaa11acaaccgtagtccggatatggga2160gatgaagttacatgctgtgtccacattactactcctcctgaaaagattgctgcaatcaaa2220caaag犯ta^tcaagctaca/ttgatagcaagcca_g3gtattggtatccaaaagctgatgtc2280attgtaaaggtttgaacattgtg3gg3t3gcaata/tggctatgtcataaa2340attaaccatcaaaeLcatgggagagagatttacaagaagagcgttgttgatcgaggaagta2400atcaaaatcctcctcgaactcga^ttcaataccggtttcatccacttgacatcaatgtt2460犯aaccatgccaacagttgtctcgagcagagttccacctgcctggtcacaaaaccctga_t2520ttaaggcgaattattcttcttgaatgttaa2550〈210〉2<211〉3123〈212〉DNA〈213〉擬南芥屬擬南芥(Ara&VoAsA〈400〉2atggaattccgcaaacccttgatcaaaacgagaagacaaagctaaaactcagagctctggattgceL3C3gatg^Lttatactaagtctcatagctcgtatagaagaagaagaaactggcgagtctagtttcgatggaaacaaaagagcgggagtttcgattaacagattataagcaccgga60atcttgacgatggcgacatt120gctataagttctggcaagac180tcccgcaataccgtgaggag240<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>g3tgttggtgatcggttactcatcgacacttgtttttagtctatttactaaaccttatacg"ggtggtggagg肌atgaacattctcacgattgtgtatcca^t3ttcttctatggcaggatatgggagatgaagttacatgctgtgttgca^tca犯caaggtaaaatatatattatg3C3gg￡Ltg￡Ltaat3tgatctagcaagccagagtattggtatccaaaagcgaacattgtg3gga/t8gc^tatggctatggaga^ttta^a卿卿gcgttgttgatcgscggtttcatccacttgacatgagc卿gttccacctgcctggtcax;aaaatgtgtgccttttcttttggtgttaagtgtggcaaactgtgttttagtatgaggttggttggcttgttgtatatatatga^ggtgaaagcaaactttatg3aatagaaaca^aatgatatttttgtgtggcagaagag￡iaaaacttcgaaaattttttaggcgaattattcttcttgaatgtgtagaggtaactaaaaaaccaaaatgtgtt2220ataggctaatttaacaagatcaaaattgta2280aacagttttcttgagagctgacaatctgaa2340gaaagcgatccacaattacaaccgtagtcc2400ccacattactactcctcctgaaaagattgc2460aatcatgcccttgttctagtgtcttaagct2520gttttttcgcgaaaaccgcagctacattga2580tgatgtcattgtaaaggatgtggaagattt2640tcataaaattaaccatcaaaacatgggaga2700ggaagtaatcaaaatcctcctcgaactcga2760caatgttaaaaccatgccaacagttgtctc2820ccctgatttaaggtaattatagagaagatg2880ttatcttaactcttaagtgcatgagagaca2940ttgtattttttttttctttgttagtaaacc3000aagagtgggatcataaacttgtgttataga3060ttagtaatgaggtatttttttatttatttt3120caaattcacttttttttcttcttgaatgtt3180taa3123<210>3<211〉849〈212〉PRT<213〉擬南芥屬擬南芥UraZ油，'s"ah.扁)<400>3MetGluPheArgLysProPheLysSerHisSer1510lieSerThrGlyAspGinAsnGluLysThrLys2025AlaAsnLeuAspAspGlyAsplieAlaLysThrSerTyrLysGinlie15LysLysLysLysLeu30GinSerSerGlySer35SerPheAspGly50AspTyrThrLys65lieThrLeuAspAsnAsnAsnAsn100SerAspProSerAspProGin195GluGin180LeuGluGluGluAsp210ArgLysLeuLys225lieAlaLeuValArgAsnAlaThr260LeuLeuLeuVal275lielieVal40AsnSerTyrLysPheTrpGin55SerGlySerPhe70AsnGluGluAspVal85LeuSerGlySerThrGlylieAsnSer115ThrSerSerThrSer130GinGinLeuGluAsp145ArgLysThrGluArgAspMetVal245LeuPhePro75GluGlu90GluThrLys105MetSerGlyThrAsnAsn120PheSerSerAlaThrMet135GluGlyGluVal150ValSerArg45AsplieAlaThrAsp60GinTyrArgGluGlu80ThrGluAspValSer95ArgValPhePheLys110SerValArgSerCys125ArgLeuAsnLeuGlu140ArgCysSerSerLeu165GluGluGluGinAlaGin185LeuValVal155LysAlaArgSerArgLeu170175SerGlyLeu200SerSerAlaGlu215AspAlalieThr230AlaLeuValLeuTrpSerLeuHis265lieCysGlyArgLeu280PhePhelieGluArgAsnTyrSerSerTrplieGly190GlyArgHisSerAspAsp205GluAspValProValGlu220LeuLeuGinTrpMetSer235SerLeuGlyLeuHisThr250255LeuTrpLysTrpGluVal270ValSerGlyCysGlylie285PheLeuLeuArgLysArgVal160lieThrlieTyrLeu240TrpValArgVal15290LeuTyrPheVal305LeuGlyLeuValGluLysGluThr340ValCysPheLeu355ValLysValLeuGinAspGlulie420GluLeuCysSer435LysPheAsnMet450lieThr465TrpAsnTyrLeu325GinLeuAla370lieGinGluAlaLeu385ProProMetLeu295GlyValLysThr310LeuAlaTrpHisSerAspValLeu345SerThrValLeu360SerSerPheHis375PheHisHisTyr390LeuSerArglie300AlaValGinAsn315PheLeuPheAsp330LeuLeuMetSerCysLeuTrp320LysLysVal335LyslieLeu350ThrLeuValMetAspMetLysThrLeuAspGlu500ArgGinlieArg515PheLysAsnVal530LeuMetArgPheGlu405TyrLysMetGinAlaAlaPhePro440SerProlielie455AspLeuHisLys470ArgLeuMetLys485GinAlaLeuGinTrpLeulieLys365ValSerThrTyrPheAspArg380LeulieGluThrLeu395GluGluGluGluAsp410GlyGlyAlaLys425GinGluLysSerAspSerGly400ArgThr415SerProProMetlieAsn505SerGluLysGluAla520AlaGinProGlyThr535LeuArgValAspGluGly445LysThrGlySer460AsnGinLysAsn475ValArgAsnVal490ThrCysGluAspLeu430SerThrMetAspAsnGlyValSerAla■SerLeuSer495GluSerThr510ArgLyslieLysAlaAlaAla525LysHislieTyrLeuGluAsp540AlaMetLysThrMetCysLeu545PheGluGlyAlaAsnTrpLeuVal580LeuAsnAspThr595PheLeuThrAla610lieAla625LeuAlaLeu565Asn550ValThrLysLysAlaPheArgGlu585LysThrAlaValAsn600lieVallielieVal615ThrSerLysTyrLeuLeuPhe630GlyAsnSerliePheLeuPhe660lieAspThrVal675LeuArgPheMetPhe645lielieHisProGluValPhe690LeuTrp705AspGluAlaMetValVal680AspAsnLeu695GinLysAlalieHisAsn710ValThrCysCysValHis725GinArglieSerLeuTyr665GluLysTyrlie555560lieThrLysSerAlaLeuLys570575ArgArgAlaLeuAlaLeuThr590LysLeuHisHisMetlieSer605lieTrpLeulieLeuLeuGlu620LeuThrSerGin635LysThrValPhe650AspValGlyAspAlaAlalieLys740TyrTrpTyrProLys755AsnlieValArglie770AsnMetGlyGluArg785lieLyslieLeuLeuGluMetAsnlie685lieValTyrPro700AsnArgSerPro715ThrThrProPro730TyrlieAspSerValValLeu640GluSerlie655ArgLeuLeu670LeuThrThrAsnlieLeuAspMetGly720GluLyslie735LysProGlu750GluAspLeuSer745AlaAspVallieValLysAspVal760765AlalieTrpLeuCysHisLyslieAsnHisGin775780PheThrArgArgAlaLeuLeulieGluGluVal790795800GluLeuAsplieGinTyrArgPheHisProLeu805810815AsplieAsnValLysThrMetProThrValValSerSerArgValPro820825830ProAlaTrpSerGinAsnProAspLeuArgArglielieLeuLeuGlu835840845Cys〈210〉4〈211〉30<212〉DNA<213〉擬南芥屬擬南芥(^ra&VoA^t力ah'a"a)<400〉4atggaa,ttccgcaaaccctttaagtctcat30<210>5<211>37<212〉DNA〈213〉擬南芥屬擬南芥(^ra&Vopsis"a7i朋a)<400>5ttaacattcaagaagaataattcgccttaaatcaggg37〈210>6<211>563<212>DNA<213〉擬南芥屬擬南芥(Ara》io^/s^tAsh'朋a)〈400〉6aggatgtcagcaacaacaacaatttgtccggttctaaaga3acg3gagtc60tttttcaa^ataaacagttcaggaactaatetatatgtctggttctgtacgttcttgtaca120tcttcgact"tcgttttcatcggccacaMgcggttaaatttagagcagcagttggaggat180ga^ggag鄉tggttgtaagatgttcatcggtgaggaaaacagagctagtttcgagggcg240aaggcg卿tcgaggttgatagatccgccacaagaagaggaacaacaatactcgagctgg300atcgggacatcggatcagttaagatcaggtttacttgggagacactccgatgatsttgag360gaaga卿tgattc"ttcggctgaagetag已tgttccagtggaatatcg肌agttgaaaatg420ga^tgcgat6L3cgttgcttca"ggatgagcttaatcgcactcgtagttgcgttagtgttg480agtctagggcttcatacttggagaaatgcaactctatggagccttcatctgtgga訊tgg540gaagtggtcttgctggttctcat56319權利要求1、一種植物耐旱相關蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質1)序列表中的SEQID№.3的氨基酸殘基序列；2)將序列表中的SEQID№.3氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有增加植物對耐旱相關性的功能的由SEQID№3衍生的蛋白質。2、權利要求l所述的植物耐旱相關蛋白的編碼基因。3、根據權利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述植物耐旱相關蛋白的編碼基因具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQIDN2:l的核苷酸序列；2)序列表中SEQIDJ^:2的核苷酸序列；3)在高嚴謹條件下可與l)或2)所述的DNA序列雜交的核苷酸序列。4、含有權利要求2或3所述的植物耐旱相關蛋白編碼基因的重組表達載體、轉基因細胞系或宿主菌。5、擴增權利要求2或3所述基因中任一片段的引物對。6、權利要求1所述的植物耐旱相關蛋白及其編碼基因在培育對耐旱相關性提高的植物中的應用。7、根據權利要求6所述的應用，其特征在于所述植物為擬南芥。全文摘要本發明公開了一種與植物耐旱相關蛋白及其編碼基因與應用。該蛋白是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質1)序列表中的SEQID№.3的氨基酸殘基序列；2)將序列表中的SEQID№.3氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有耐旱相關功能的由SEQID№3衍生的蛋白質。該基因具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQID№1的核苷酸序列；2)序列表中SEQID№1的核苷酸序列；3)在高嚴謹條件下可與1)或2)所述的DNA序列雜交的核苷酸序列。本發明的耐旱相關基因對于植物耐干旱分子機制的研究，植物抗逆性品種的選育具有重要的理論及實際意義。該基因過表達植株也可以作為指示植物，預警旱情。文檔編號C12N15/82GK101525379SQ20091008112公開日2009年9月9日申請日期2009年4月2日優先權日2009年4月2日發明者潔龐,武維華,陳益芳申請人:中國農業大學