專利名稱：助植物生長菌劑及其制備方法
技術領域：
本發明主要涉及微生物的一種助植物生長菌劑及其制備方法。屬微生物菌劑的制 備技術。
背景技術：
國內已有多種用于植物生長的微生物菌劑，如日本的EM，神力CM，VT等，但用原生 質體融合技術制備的基因工程菌株與膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉 菌復合制備菌劑的方法并能助植物快速生長的菌劑的技術目前尚屬空白。

發明內容
本發明的目的在于避免現有技術不足而提供一種助植物生長菌劑及其制備方法。 尤其是用原生質體融合技術制備的基因工程菌株與膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固 氮菌、康氏木霉菌復合制備微生物菌劑的方法。使用基因工程菌與膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌科學配 伍的培養基的原料是，以新鮮的豆腐或粉絲或玉米淀粉或洋芋淀粉的廢水或麩皮、玉米漿 混合液為原料，添加少量無機鹽制備。該方法是利用食品、輕工業產生的廢液為原料，生產 過程無“三廢”污染，生產工藝簡單，操作方便，節省人力，節省能源，其菌劑，可用于液體微 生物肥料，也可作為微生物固體肥料和有機堆肥的微生物菌種接種劑。本發明的目的可以通過采用以下技術方案實現一種助植物生長的菌 劑，其主要特點在于由酵母融合菌(Fusant between Candida tropicalisand saccharomycescerevisiae)F306、膠質芽抱桿菌(Bacillus megterium)B. me_8、巨大芽抱 桿菌(Bacillusmucilaginosus)B. mu-36、圓褐固氮菌(Azotobacter chroococcum) A. c-6> 康氏木霉菌(T.reesi)T.r-12和液體培養基組成，其菌群的重量百分比為酵母融合菌為 25 40 %、膠質芽孢桿菌為15 30 %、巨大芽孢桿菌15 30 %，圓褐固氮菌為15 30 %、 康氏木霉菌為15 30%，所述的酵母融合菌的保藏號為CGMCC 2461。所述的助植物生長的菌劑，所述的液體培養基包括有在1升新鮮豆腐廢水或粉絲 廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀粉廢水中加入硫酸銨l_2g，磷酸0. 5-lml，用的石灰水調 pH 5. 5-6. 5。所述的助植物生長的菌劑的制備方法，其有如下步驟A.瓊脂斜面培養基的制備及菌種的培養a.瓊脂斜面培養基的制備葡萄糖0. 8-1. 2 %、蛋白胨0. 8-1. 2 %、瓊脂 1. 8-2. 2 %、酵母膏0. 3-0. 8 %，氯化鈉0.8-1.2%，無菌水80_120ml，加熱溶解后，用1 %的 氫氧化鈉調PH值至6. 2-7. 2，經110-114°C，28-32分鐘蒸汽滅菌，然后在無菌條件下分裝于 15X1. 5cm的干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用；b.菌種的培養分別取酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、 康氏木霉菌的母種瓊脂斜面菌，在無菌條件下，轉種于上述制備的瓊脂斜面培養基上，經28-3224-48小時培養，即得瓊脂斜面菌種，為一級菌種；B液體培養基的制備及液體菌種的培養a.液體培養基的制備在1升新鮮豆腐廢水或粉絲廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀 粉廢水中加入硫酸銨l_2g，磷酸0. 5-lml，用的石灰水調pH 6. 2-7. 2，分裝于500ml三 角燒瓶中，分裝量為瓶子容量的1/4，然后經110-112°C，30-35分鐘高壓滅菌，冷卻后備用；b.分別取酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌的 一級菌種，在無菌條件下，接種于液體培養液中，經28-32°C、24-48小時培養，其培養液為 二級菌種；c.分別取酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌的 二級菌種再擴大培養，上搖床振蕩培養，經振幅100 120r/min、溫度28 32°C、18 24 小時培養，其菌液為三級菌種；d.分別將重量百分比為酵母融合菌為25 40%、膠質芽孢桿菌為15 30%、巨 大芽孢桿菌15 30%，圓褐固氮菌為15 30%、康氏木霉菌為15 30%三級菌種再擴大 培養，五種菌在同一個發酵罐，經28-32°C、18-24小時的通氣攪拌發酵培養，其菌液為酵母 融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌混合菌劑，即為四級菌種， 根據需要可繼續逐級擴大培養，也可作為產品應用。所述的助植物生長菌劑的制備方法，所 述的酵母融合菌的制備有如下步驟將酒精酵母菌作母種的斜面轉種和培養，在液體振蕩 培養14小時后，用EDTA-巰基乙醇進行預處理，使用的纖維素酶和蝸牛酶進行酶解 脫壁，時間為2小時，溫度33°C，得到酒精酵母原生質體；將熱帶假絲酵母菌作母種的斜面 轉種和培養，在液體振蕩培養14小時后，用EDTA-巰基乙醇進行預處理，使用1. 5%的纖維 素酶和0. 5%的蝸牛酶進行酶解脫壁，時間為2. 5小時，溫度33°C，得到熱帶假絲酵母原生 質體；將熱帶假絲酵母原生質體經0.1%碘乙酸滅活，與酒精酵母原生質體以1 1混合， 將沉淀懸于35%聚乙二醇的促溶劑中，30°C水浴靜止處理，pH 6.0，時間為40min，融合菌 液經高滲磷酸緩沖液(PBS)反復沖洗，涂布于高滲基礎型培養基(MMS)和高滲完全培養基 (YPDS)平板培養基上，經30°C、7天培養，平板生長出酵母融合菌。所述的助植物生長菌劑的制備方法，所述的酵母融合菌的培養基為麥芽汁 0. 5-2 %、葡萄糖0. 5-2 %、蛋白胨0. 2-0. 6 %、瓊脂粉1-3 %、無菌水80_120ml，加熱溶解后， 用1 %的氫氧化鈉調PH值至5. 5-6. 5，經110-114°C，30-35分鐘蒸汽滅菌，然后在無菌條件 下分裝于15 X 1. 5cm的干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用。本發明的有益效果發明人經過試驗，在灰鈣土和鹽堿土盆栽生長期觀察中，施用 了本發明的菌劑試驗組與對照組不論出苗時間、出苗率、三葉期、苗高均有顯著提高。在灰 鈣土和鹽堿土盆栽根系觀察中，試驗組與對照組不論根系長度、根系數、體積、鮮重均有顯
者差升。發明人采用先進的單親滅活原生質體融合技術，對熱帶假絲酵母 (Candidatropicalis)968 和酒精酵母(Saecharomyces cervsiar)2. 399 兩親本菌株做融 合，構建新的基因工程菌，這些融合菌即具有雙親的生物特性，又具有優于雙親的活性酶， 絮凝性和耐高溫的生物特性。能充分利用豆腐、粉絲和玉米洋芋淀粉廢水中有機物的營養 物質進行生長繁殖，利用2008年04月21日，地址是在北京市朝陽區大屯路，中國科學院微 生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No. 2461的釀酒酵母F306 (Saccharomyces cerevisiae)配伍膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮 菌、康氏木霉菌五菌組合，膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌具有適應性強、耐受性 好，能將土壤中的不溶性磷和鉀元素轉化為有效磷和速效鉀供植物生長；芽孢桿菌具有易 生長，抗逆性強，適應廣，不但能助植物生長，而且可增強植物的抗病蟲害能力；康氏木霉菌 能分泌纖維素酶可將土壤中的纖維素轉化為淀粉和糖，為植物生長提供營養，經科學配比 和獨特的發酵工藝，使其菌群在生長過程中產生的有用物質及其分泌物質成為各自或相互 生長的基料和原料，通過相互間的共生增殖關系，形成了一個復雜而穩定的微生態系統，發 揮了多功能的優勢。酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌在新鮮的豆 腐、粉絲、玉米、洋芋淀粉產生的廢水中，添加少量的無機鹽，直接發酵制備液體菌劑，既節 省了培養基的原料，減少原料配制和高壓滅菌的工序，節省了能源，也解決了這些行業治污 的難題，是一項變廢為寶，一舉多得的生物技術。酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌菌劑即可作 為植物生長劑，也可作為有機廢水處理凈化劑，還可作為生物絮凝劑，表面活性劑，生物吸 附劑等應用于石油開采、食品工業、環境工程、醫療和精細化工等行業，具有較廣的應用價值。


圖1為本發明的制備工藝流程示意圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明見圖1，實施例1(1)試管液體菌種的培養，取新鮮豆腐廢水經煮沸10分鐘自然沉淀取上清 液100ml,加入(NH4)2SO4O. lg, H3PO4O. 05ml,充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于 15X1. 5cm的干燥試管中，經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，分別接種F306酵母 融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌于試管液體培養基中，經 28 32°C培養24 48小時，即為試管液體菌種(一級菌種)(2)三角燒瓶液體菌種的培養取新鮮豆腐廢水經煮沸10分鐘自然沉淀取上清液1000ml，加入(NH4)2SO4 Ig, H3PO4O. 5ml，充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶子總 量的1/4，然后經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，將試管液體菌種接種在液體三角燒 瓶培養基中，經28 32°C培養24 48小時，即為液體三角燒瓶菌種(二級菌種)(3)液體擴大培養生產菌種取新鮮豆腐廢水經煮沸10分鐘自然沉淀取上清液10000ml，加入(NH4)2SO4 IOg, H3PO4 5ml，充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶子總量 的1/4，然后經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，將二級菌種接種在液體三角燒瓶培養 基中，上搖床振蕩培養，振幅為100 120r/min，經溫度28 32°C培養18 24小時發酵 培養，其培養液為三級菌種。
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(4)取三級菌種再擴大培養，上發酵罐，所用新鮮豆腐廢水不滅菌，將重量百分比 為酵母融合菌為40%、膠質芽孢桿菌為15%、巨大芽孢桿菌15%，圓褐固氮菌為15%、康氏 木霉菌為15%五菌培養液接入后，經28 32°C培養18 24小時，通氣攪拌發酵培養，其 發酵液即為F306酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌液體 菌劑，活細胞數為1.0 2. OX IO9個/ml ；(5)根據需要可逐級擴大產量。實施例2(1)試管液體菌種的培養，取新鮮粉絲廢水100ml，加入(NH4)2SO4O. Ig, H3PO4O. 05ml，充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于15X1. 2cm的干燥試管中，經112°C, 30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，分別接種F306酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、 圓褐固氮菌、康氏木霉菌于試管液體培養基中，經28 32°C培養24 48小時，即為試管液 體菌種(一級菌種)。(2)三角燒瓶液體菌種的培養取新鮮粉絲廢水1000ml，加入(NH4)2SO4 lg, H3PO4 0. 5ml，充分溶解后調節PH至 6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶子總量的1/4，然后經112°C，30分鐘高壓 滅菌，冷卻至32°C，將試管液體菌種接種在液體三角燒瓶培養基中，經28 32°C培養24 48小時，即為液體三角燒瓶菌種(二級菌種)。(3)液體擴大培養生產菌種取新鮮粉絲廢水10000ml，加入(NH4)2SO4 1 Og，H3PO4 5ml，充分溶解后調節PH至 6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶子總量的1/4，然后經112°C，30分鐘高 壓滅菌，冷卻至32°C，將二級菌種接種在液體三角燒瓶培養基中，上搖床振蕩培養，振幅為 100 120r/min，經溫度28 32°C培養18 24小時發酵培養，其培養液為三級菌種。(4)取三級菌種再擴大培養，上發酵罐，所用新鮮粉絲廢水不滅菌，將重量百分比 為酵母融合菌為25%、膠質芽孢桿菌為30%、巨大芽孢桿菌15%，圓褐固氮菌為15%、康氏 木霉菌為15%五菌培養液接入后，經28 32°C培養18 24小時，通氣攪拌發酵培養，其 成熟的發酵液即為F306酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉 菌液體菌劑，活細胞數為0.8 1.8 X IO9個/ml ；(5)根據需要可逐級擴大產量。實施例3(1)試管液體菌種的培養，取新鮮玉米淀粉廢水，經煮沸10分鐘自然沉淀取上 清液100ml,加入(NH4)2SO4O. lg, H3PO4O. 05ml,充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于 15X1. 2cm的干燥試管中，經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，分別接種F306酵母 融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌于試管液體培養基中，經 28 32°C培養24 48小時，即為試管液體菌種(一級菌種)。(2)三角燒瓶液體菌種的培養取新鮮玉米淀粉廢水，經煮沸10分鐘自然沉淀取上清液1000ml，加入(NH4)2SO4 lg, H3PO4 0.5ml，充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶 子總量的1/4，然后經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，將試管液體菌種接種在液體三 角燒瓶培養基中，經28 32°C培養24 48小時，即為液體三角燒瓶菌種(二級菌種)。
(3)液體擴大培養生產菌種取新鮮玉米淀粉廢水，經煮沸10分鐘自然沉淀取上清液10000ml，加入 (NH4)2SO4IOg, H3PO4 5ml，充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝 量為瓶子總量的1/4，然后經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，將二級菌種接種在液體 三角燒瓶培養基中，上搖床振蕩培養，振幅為100 120r/min，經溫度28 32°C培養18 24小時發酵培養，其培養液為三級菌種。(4)取三級菌種再擴大培養，上發酵罐，所用新鮮粉絲廢水不滅菌，將重量百分比 為酵母融合菌為35%、膠質芽孢桿菌為15%、巨大芽孢桿菌20%，圓褐固氮菌為15%、康氏 木霉菌為15%五菌培養液接入后，經28 32°C培養18 24小時，通氣攪拌發酵培養，其 成熟的發酵液即為F306酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉 菌液體菌劑，活細胞數為1.2 2. 2 X IO9個/ml ；(5)根據需要可逐級擴大產量。實施例4(1)試管液體菌種的培養，取新鮮洋芋淀粉廢水，經煮沸10分鐘自然沉淀取上 清液100ml，加入(NH4)2SO4 0. lg, H3PO4 0. 05ml,充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝 于15X1. 2cm的干燥試管中，經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，分別接種F306酵 母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌于試管液體培養基中，經 28 32°C培養24 48小時，即為試管液體菌種(一級菌種)。(2)三角燒瓶液體菌種的培養取新鮮洋芋淀粉廢水，經煮沸10分鐘自然沉淀取上清液1000ml，加入(NH4)2SO4 lg, H3PO4 0.5ml，充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶 子總量的1/4，然后經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，將試管液體菌種接種在液體三 角燒瓶培養基中，經28 32°C培養24 48小時，即為液體三角燒瓶菌種(二級菌種)。(3)液體擴大培養生產菌種取新鮮洋芋淀粉廢水，經煮沸10分鐘自然沉淀取上清液10000ml，加入 (NH4)2SO4IOg, H3PO4 5ml，充分溶解后調節PH至6. 2 7. 2，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝 量為瓶子總量的1/4，然后經112°C，30分鐘高壓滅菌，冷卻至32°C，將二級菌種接種在液體 三角燒瓶培養基中，上搖床振蕩培養，振幅為100 120r/min，經溫度28 32°C培養18 24小時發酵培養，其培養液為三級菌種。(4)取三級菌種再擴大培養，上發酵罐，所用新鮮粉絲廢水不滅菌，將重量百分比 為酵母融合菌為25%、膠質芽孢桿菌為15%、巨大芽孢桿菌15%，圓褐固氮菌為30%、康氏 木霉菌為15%五菌培養液接入后，經28 32°C培養18 24小時，通氣攪拌發酵培養，其 成熟的發酵液即為F306酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉 菌液體菌劑，活細胞數為1.2 2. 2 X IO9個/ml ；(5)根據需要可逐級擴大產量。實施例5一種酵母融合菌的制備有如下步驟將酒精酵母菌作母種的斜面轉種和培養，在 液體振蕩培養14小時后，用EDTA-巰基乙醇進行預處理，使用1 %的纖維素酶和1 %蝸牛 酶進行酶解脫壁，時間為2小時，溫度33°C，得到酒精酵母原生質體；將熱帶假絲酵母菌作
8母種的斜面轉種和培養，在液體振蕩培養14小時后，用EDTA-巰基乙醇進行預處理，使用 1. 5%的纖維素酶和0. 5%的蝸牛酶進行酶解脫壁，時間為2. 5小時，溫度33°C，得到熱帶假 絲酵母原生質體；將熱帶假絲酵母原生質體經0. 碘乙酸滅活，與酒精酵母原生質體以 1 1混合，將沉淀懸于35%聚乙二醇(PEG)的促溶劑中，30°C水浴靜止處理，pH 6.0，時間 為40min，融合菌液經高滲磷酸緩沖液(PBS)液反復沖洗，涂布于高滲基礎培養基(MMS)和 高滲完全培養基(YPDS)平板培養基上，經30°C、7天培養，平板生長出酵母融合菌。所述的酵母融合菌的培養基為麥芽汁0.5-2%、葡萄糖0.5-2%、蛋白胨 0. 2-0. 6 %、瓊脂粉1-3 %、無菌水80-120ml，加熱溶解后，用1 %的氫氧化鈉調pH值至 5. 5-6. 5，經110-114°C，30-35分鐘蒸汽滅菌，然后在無菌條件下分裝于15X1. 5cm的干燥 滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用。實施例6，酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌液 體菌劑在以灰鈣土和鹽堿土為試驗土壤的試驗效果。用苜蓿種籽做盆栽試驗，經三次重復其結果見表1、表2、表3、表4和表5 表 權利要求
一種助植物生長的菌劑，其特征在于由酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌和液體培養基組成，其菌群的重量百分比為酵母融合菌為25～40％、膠質芽孢桿菌為15～30％、巨大芽孢桿菌15～30％，圓褐固氮菌為15～30％、康氏木霉菌為15～30％，所述的酵母融合菌的保藏號為CGMCC 2461。
2.如權利要求1所述的助植物生長的菌劑，其特征在于所述的液體培養基包括有在 1升新鮮豆腐廢水或粉絲廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀粉廢水中加入硫酸銨l_2g，磷酸 0. 5-lml，用 的石灰水調 pH 5. 5-6. 5。
3.如權利要求1所述的助植物生長的菌劑的制備方法，其特征在于有如下步驟A.瓊脂斜面培養基的制備及菌種的培養a.瓊脂斜面培養基的制備葡萄糖0.8-1.2%、蛋白胨0.8-1.2%、瓊脂1.8-2.2%、酵 母膏0. 3-0. 8 %，氯化鈉0.8-1.2%，無菌水80-120ml，加熱溶解后，用1 %的氫氧化鈉調pH 值至6. 2-7. 2，經110-114°C，28-32分鐘蒸汽滅菌，然后在無菌條件下分裝于15X1. 5cm的 干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用；b.菌種的培養分別取酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康 氏木霉菌的母種瓊脂斜面菌，在無菌條件下，轉種于上述制備的瓊脂斜面培養基上，經 28-3224-48小時培養，即得瓊脂斜面菌種，為一級菌種；B液體培養基的制備及液體菌種的培養a.液體培養基的制備在1升新鮮豆腐廢水或粉絲廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀粉廢 水中加入硫酸銨l_2g，磷酸0. 5-lml，用的石灰水調pH 6. 2-7. 2，分裝于500ml三角燒 瓶中，分裝量為瓶子容量的1/4，然后經110-112°C，30-35分鐘高壓滅菌，冷卻后備用；b.分別取酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌的一級 菌種，在無菌條件下，接種于液體培養液中，經28-32°C、24-48小時培養，其培養液為二級 菌種；c.分別取酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌的二級 菌種再擴大培養，上搖床振蕩培養，經振幅100 120r/min、溫度28 32°C、18 24小時 培養，其菌液為三級菌種；d.分別將重量百分比為酵母融合菌為25 40%、膠質芽孢桿菌為15 30%、巨大芽 孢桿菌15 30%，圓褐固氮菌為15 30%、康氏木霉菌為15 30%三級菌種再擴大培 養，五種菌在同一個發酵罐，經28-32°C、18-24小時的通氣攪拌發酵培養，其菌液為酵母融 合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌混合菌劑，即為四級菌種，然 后繼續逐級擴大培養。
4.如權利要求3所述的助植物生長菌劑的制備方法，其特征在于所述的酵母融合菌的 制備有如下步驟將酒精酵母菌作母種的斜面轉種和培養，在液體振蕩培養14小時后，用 EDTA-巰基乙醇進行預處理，使用的纖維素酶和蝸牛酶進行酶解脫壁，時間為2小 時，溫度33°C，得到酒精酵母原生質體；將熱帶假絲酵母菌作母種的斜面轉種和培養，在液 體振蕩培養14小時后，用EDTA-巰基乙醇進行預處理，使用1. 5的纖維素酶和0. 5%的蝸 牛酶進行酶解脫壁，時間為2. 5小時，溫度33°C，得到熱帶假絲酵母原生質體；將熱帶假絲 酵母原生質體經0.1%碘乙酸滅活，與酒精酵母原生質體以1 1混合，將沉淀懸于35%聚 乙二醇的促溶劑中，30°C水浴靜止處理，pH 6. 0，時間為40min，融合菌液經高滲磷酸緩沖液(PBS)反復沖洗，涂布于高滲基礎型培養基(MMS)和高滲完全培養基(YPDS)平板培養基上， 經30°C、7天培養，平板生長出酵母融合菌。
5.如權利要求4所述的助植物生長菌劑的制備方法，其特征在于所述的酵母融合菌 的培養基為麥芽汁0. 5-2 %、葡萄糖0. 5-2 %、蛋白胨0. 2-0. 6 %、瓊脂粉1_3 %、無菌水 80-120ml，加熱溶解后，用1 %的氫氧化鈉調pH值至5. 5-6. 5，經110-114°C，30-35分鐘蒸 汽滅菌，然后在無菌條件下分裝于15 X 1. 5cm的干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用。
全文摘要
本發明主要涉及微生物的一種助植物生長菌劑及其制備方法。屬微生物菌劑的制備技術。一種助植物生長的菌劑，其主要特點在于由酵母融合菌、膠質芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、圓褐固氮菌、康氏木霉菌和液體培養基組成，其菌群的重量百分比為酵母融合菌為25～40％、膠質芽孢桿菌為15～30％、巨大芽孢桿菌15～30％，圓褐固氮菌為15～30％、康氏木霉菌為15～30％，所述的酵母融合菌的保藏號為CGMCC 2461。本發明的優點是發明人經過試驗，在灰鈣土或鹽堿土盆栽生長期觀察中，施用了本發明的菌劑試驗組與對照組不論出苗時間、出苗率、三葉期、苗高均有顯著提高。在灰鈣土或鹽堿土盆栽根系觀察中，試驗組與對照組不論根系長度、根系數、體積、鮮重均有顯著差異。
文檔編號C12R1/07GK101984827SQ20101012940
公開日2011年3月16日 申請日期2010年2月16日 優先權日2010年2月16日
發明者孫榮高, 趙瑾, 鐘芳 申請人:甘肅求實生物工程有限公司