專利名稱：基于綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的雙熒光共定位系統的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種基于綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的雙熒光共定位系統。
背景技術：
研究蛋白質_蛋白質間的相互作用(PPI)是研究細胞中信號通道和傳導的基礎。 細胞內部的動態和平衡態、內部變化和細胞生理功能都很大程度上依賴于蛋白質_蛋白質 相互作用的信號網絡進行調節。檢測他們之間的相互作用，揭示生物學功能是目前生物醫 藥領域的熱點之一。通過分子生物學的方法，調節特定的蛋白質與蛋白質相互作用為一些疑難雜癥也 提供了一種新的治療方法的可能性。因此，無論是學術科研機構還是制藥公司對這一領域 都表現出濃厚的興趣，希望通過發現和調節蛋白質與蛋白質的相互作用作，為臨床治療找 到一種新的治療手段。在生物體外有很多種研究蛋白質-蛋白質相互作用的方法。其中大多需要首先將 這些蛋白從其生理環境中純化出來才可以使用。因為只有將所研究的蛋白還原到自然細 胞生理狀態下進行研究，我們才能得到準確空間信息，因此能夠用于活細胞中生理水平PPI 的分析技術顯得尤為重要。類似的技術包括熒光共振能量轉移技術(FRET)、雙分子熒光互補技術(BiFC)、 熒光互相關譜(FCCS)等。在這些方法中，雙色熒光共定位技術是較為普遍的研究蛋白質相 互作用的技術之一，并且廣泛用于研究各類細胞和生物中。另外，亞細胞定位、多蛋白質分 析同樣也能夠被雙色熒光共定位技術檢測出來。綠色熒光蛋白GFP和紅色熒光蛋白RFP蛋白，是自發熒光蛋白中最重要的成員。它 們分別是從水母victoria和珊瑚Discosma中分離得到的自發熒光蛋白。它們的光譜范圍 分別是 359nm-509nm 和 558nm_702nm。
發明內容
本發明的一個目的是提供一種用于檢測待測蛋白是否相互作用的融合蛋白組。本發明所提供的用于檢測待測蛋白是否相互作用的融合蛋白組，為如下1)和2)1)由熒光蛋白A、待測蛋白A和核輸出信號組成的融合蛋白；2)由熒光蛋白B、待測蛋白B和核定位信號組成的融合蛋白；所述熒光蛋白A與所述熒光蛋白B為發不同顏色熒光的熒光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段與2)所示融合蛋白片段分別獨立包裝；所述待測蛋白A和待測蛋白B是待檢測是否相互作用的兩個蛋白。上述融合蛋白組中，所述1)所示融合蛋白中，熒光蛋白A、待測蛋白A和核輸出信 號順次連接；所述2)所示融合蛋白中，待測蛋白B、核定位信號和熒光蛋白B順次連接。上述融合蛋白組中，所述熒光蛋白A為紅色熒光蛋白或綠色熒光蛋白；所述熒光蛋白B為紅色熒光蛋白或綠色熒光蛋白。上述融合蛋白組中，所述綠色熒光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示；所述 紅色熒光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO :3所示；所述核輸出信號的氨基酸序列如SEQ ID NO 5所示；所述核定位信號的氨基酸序列如SEQ ID NO 7所示。上述任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因也屬于本發明的保護范圍；上述任一 所述2)所示融合蛋白的編碼基因也屬于本發明的保護范圍。如下I、II或III所示的重組表達載體、重組菌、轉基因細胞系或表達盒也屬于本發 明的保護范圍I、含有上述任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達載體、重組菌、轉 基因細胞系或表達盒；II、含有上述任一所述2)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達載體、重組菌、轉 基因細胞系或表達盒；III、含有上述任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因和上述任一所述2)所示融合 蛋白的編碼基因的重組表達載體、重組菌、轉基因細胞系或表達盒。上述重組表達載體、重組菌、轉基因細胞系或表達盒中，所述I中所述重組表達載 體為如下a所示；所述II中所述重組表達載體為如下b所示；所述III中所述轉基因細胞系 是將a所示重組表達載體和b所示重組表達載體轉入細胞得到的；a、按照如下方法得到的重組表達載體在載體pmWasabi-C的多克隆位點間插入 所述核輸出信號的編碼基因和待測蛋白A的編碼基因，使綠色熒光蛋白的編碼基因、待測 蛋白A的編碼基因和核輸出信號的編碼基因順次連接為融合基因；b、按照如下方法得到的重組表達載體在載體pDsRedl-Nl的多克隆位點間插入 所述核定位信號的編碼基因和待測蛋白B的編碼基因，使待測蛋白B的編碼基因、核定位信 號的編碼基因和紅色熒光蛋白的編碼基因順次連接為融合基因。上述轉基因細胞系中，所述宿主細胞為Hela細胞系。如下物質中的至少一種在檢測蛋白是否相互作用中的應用也屬于本發明的保護 范圍1)上述任一所述的融合蛋白，2)上述編碼基因，3)上述III所述重組表達載體，4)上述 III所述重組菌，5)上述III所述轉基因細胞系。本發明的最后一個目的是提供一種檢測蛋白是否相互作用的方法。本發明所提供的檢測蛋白是否相互作用的方法，包括如下步驟檢測上述III所述 轉基因細胞系的熒光發光情況，根據檢測結果判別所述待測蛋白是否相互作用；所述根據檢測結果判別所述待測蛋白是否相互作用的方法如下若所述轉基因細胞系中細胞核中同時具有兩種顏色熒光，則所述待測蛋白相互作 用；若所述轉基因細胞系中細胞核中具有一種顏色熒光，而細胞質中具有另一個種顏色熒 光，則所述待測蛋白不能相互作用。或者，若所述轉基因細胞系中細胞核中同時具有綠色熒光和紅色熒光，則所述待 測蛋白相互作用；若所述轉基因細胞系中細胞核中具有紅色熒光，而細胞質中具有綠色熒 光，則所述待測蛋白不能相互作用。所述檢測轉基因細胞系的熒光發光情況，是在得到所述轉基因細胞系后的24h時 進行的。
本發明的檢測系統，賦予待檢測蛋白對在細胞核內和核外分區表達的能力，從而 產生空間位移變化的特點，并且使兩種蛋白分別帶有不同顏色的標記，便于區別。所用的核 定位信號是NES數據庫中核定位效果最突出的。出核信號的效果也非常明顯。當兩蛋白相 互作用時，兩蛋白全部出現在細胞核內，核內同時呈現綠色和紅色兩種顏色；當兩蛋白不存 在相互作用時，一個蛋白位于核內呈現紅色，另一個蛋白位于核外呈現綠色。通過核內核外 的兩種顏色的熒光定位變化，就可判斷兩蛋白是否相互作用(原理示意如圖1所示)。此方 法檢測結果可靠，操作簡單，一目了然地看到共定位現象，易于判別，方便快捷。
圖1為本發明的原理示意圖。圖2為pmWasabi-C載體的多克隆位點示意圖。圖3為各轉染處理組的熒光檢測圖。圖4為各轉染處理組的細胞統計結果圖。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。GFP是綠色熒光蛋白，其核苷酸序列SEQ ID NO :2，氨基酸序列SEQ ID N0:1 ；RFP是紅色熒光蛋白，其核苷酸序列SEQ ID NO :4，氨基酸序列SEQ ID NO 3 ；核輸出信號(ABL)，其核苷酸序列SEQ ID NO :6，氨基酸序列SEQ ID NO 5 ；該多肽 的作用是幫助核內的某些分子通過核孔進入細胞質。核定位信號(NoL)，其核苷酸序列SEQ ID NO :8，氨基酸序列SEQ ID NO 7 ；該多肽 的作用是幫助親核蛋白進入細胞核；Bcl2蛋白，其核苷酸序列SEQ ID NO 14，氨基酸序列SEQ ID NO 13 ；Bak(+)蛋白，其核苷酸序列SEQ ID NO 10，氨基酸序列SEQ ID NO 9 ；TIG3蛋白，其核苷酸序列SEQ ID NO 12，氨基酸序列SEQ ID N0 11 ；已知Bcl2蛋白與Bak(+)蛋白能夠相互作用而結合；Bcl2蛋白與TIG3蛋白能夠 相互作用而結合；下述實施例中所用的引物如表1所示。表1、合成中需要的引物 實施例1、一、GFP系列表達載體的構建(一 )表達融合蛋白GFP-ABL的表達載體的構建ABL和Bcl2在pmWasabi_C載體中的插入位點如圖2所述。首先，從allelebiotech 公司購買 pmWasabi-C 載體；其次，退火合成ABL 退火合成的基本過程(1)片段處理50ul :Zhou_05n 10ul, Zhou_06c lOul, Zhou_07n lOul, Zhou_08c 10ul (引物濃度 0. lnmol/ul)，Ligase buffer (10X) 5ul,H20 5ul。煮沸 5min，冷卻至室溫。(2)連接(20ul)去上述體系 10ul，Ligase Buffer 2ul，Ligase 1. 5ul，H206. 5ul。 室溫連接2h。(3)酶切載體pmWasabi-C 載體 lug，EcoRI 0.5ul，HindIII 0. 5ul,Buffer2 2ul, H20 16ul。37 度酶切 4h。(4)膠回收酶切后的載體(步驟參照天跟公司膠回收試劑盒)(5)連接將⑵步中連接的片段2ul，酶切后的載體lul，Ligase Buffer2ul, Ligase 1. 5ul, H20 13.5ul。室溫連接 2h。(6)轉化取lOul連接產物加入大腸桿菌感受態細胞，冰浴20min，42度熱擊90s， 冰浴5min，加入500ul LB培養基，37度溫箱溫浴1小時，涂Amp+平板。(7)挑克隆PCR鑒定(8)取陽性克隆DNA測序測序結果載體pmWasabi-C中在EcoRI和Hindlll酶切位點間插入的ABL編碼基 因的核苷酸序列如SEQ ID NO :6所示，表明得到的基因序列正確及構建的載體正確，將該重 組載體記作pmWasabi-ABL ；該重組載體pmWasabi_ABL表達GFP-ABL融合蛋白(pmWasabi-C 載體中含有GFP蛋白的編碼基因，本實驗將ABL的編碼基因插在GFP的下游，構成了編碼 GFP-ABL融合蛋白的融合基因)。( 二)表達融合蛋白GFP-Bcl2_ABL的表達載體的構建PCR 擴增得到 Bcl2 并用 XhoI+EcoRI 插入到 GFP-ABL 上面得到 GFP_Bcl2_ABL。如下表達載體GFP-Bcl2_ABL構建步驟首先，從allelebiotech 公司購買 pmWasabi-C 載體其次，(1)PCR 擴增 Bcl2模板 pmWasabi-C 載體 lul弓| 物 09ZJ17n 5，-cgac ctcgagtc atggcgcacgctgggaga-3， lul引 物 09ZJ18c 5 ' -caat gaattc tcacttgtggctcagatagg-3' lulP f umixture (天 牛艮 公 司) 25ulH20
22ul_
8
50ul反應條件94度5min94 度 40sec30cycles 60 度 40sec72 度 lmin4 度 lOmin(2)酶切(l)PCR 產物PCR 擴增產物40ul
0087]EcoRIlul
0088]Xhollul
0089]Buffer 25ul
0090]H203ul
0091]_
0092]50ul37 度酶切 4h(3)酶切載體 pmWasabi-ABL載體lulgEcoRI0. 5ulXho I0. 5ulBuffer 2 2ulH2016ul_20ul37 度酶切 4h(4)膠回收酶切后的載體(步驟參照天跟公司膠回收試劑盒)(5)連接將⑵步中連接的片段 2ul酶切后的載體lulLigase Buffer2ulLigase1. 5ulH2013. 5ul_20ul室溫連接2h(6)轉化取lOul連接產物加入大腸桿菌感受態細胞，冰浴20min，42度熱擊90s， 冰浴5min，加入500ul LB培養基，37度溫箱溫浴1小時，涂Amp+平板。(7)挑克隆PCR鑒定(8)取陽性克隆DNA測序
結果載體pmWasabi-ABL中在EcoRI和Xho I酶切位點間插入的Bcl2編碼基因 的核苷酸序列如SEQ ID NO :14所示，表明得到的基因序列正確及構建的載體正確，將該重 組載體記作 pmWasabi-Bcl2-ABL ；該重組載體 pmWasabi-Bcl2_ABL 表達 GFP_Bcl2_ABL 融合 蛋白(本實驗將Bcl2的編碼基因插在GFP和ABL之間，構成了編碼GFP-Bcl2-ABL融合蛋白 的融合基因)。二、RFP系列表達載體的構建(一)表達融合蛋白N0L-RFP的表達載體的構建載體pDsRedl-Nl購自 Clontech laboratories，產品目錄號為 Catalog #6921-1; 載體pDsRedl-Nl中含有RFP的編碼基因(DsRedl)。
0120]退火鏈接N0L0121]退火合成的基本過程0122](1)片段處理引物濃度0lnmol/ul0123]Zhou__llnlOul0124]Zhou_,12clOul0125]Zhou__13nlOul0126]Zhou_,14clOul0127]Zhou__15n100128]Zhou_,16clOul0129]Zhou__17nlOul0130]Zhou_,18clOul0131]Zhou__19nlOul0132]Zhou_20c100133]Zhou_2 InlOul0134]Zhou_22clOul0135]Zhou_23nlOul0136]Zhou_24clOul0137]Zhou_25nlOul0138]Zhou_26nlOul0139]Zhou_27clOul0140]Ligase buffer(10X)20ul0141]H20lOul0142]0143]200ul0144]煮沸5min，冷卻至室jm0145](2)連接0146]去上述體系 10ul0147]Ligase Buffer 2ul0148]Ligase 1. 5ul0149]H20 6. 5ul
100150]_
0151]20ul
0152]室溫連接2h
0153](3)酶切載體 pDsRedl-Nl
0154]載體lulg
0155]EcoRI 0. 5ul
0156]BamHI 0. 5ul
0157]Buffer 2 2ul
0158]H2016ul
0159]_
0160]20ul
0161]37度酶切4h
0162](4)膠回收酶切后的載體(步驟參照天跟公司膠回收試劑盒)
0163](5)連接
0164]將⑵步中連接的片段 2ul
0165]酶切后的載體lul
0166]Ligase Buffer2ul
0167]Ligase1. 5ul
0168]H2013. 5ul
0169]_
0170]20ul室溫連接2h(6)轉化取lOul連接產物加入大腸桿菌感受態細胞，冰浴20min，42度熱擊90s， 冰浴5min，加入500ul LB培養基，37度溫箱溫浴1小時，涂Amp+平板。(7)挑克隆PCR鑒定(8)取陽性克隆DNA測序；結果載體pDsRedl-Nl中在EcoRI和BamHI酶切位點間插入的N0L編碼基因的核 苷酸序列如SEQ ID NO :8所示，表明得到的基因序列正確及構建的載體正確，將該重組載體 記作pDsRedl-NOL ；該重組載體pDsRedl_N0L表達N0L-RFP融合蛋白(pDsRedl-Nl載體中 含有RFP蛋白的編碼基因，本實驗將N0L的編碼基因插在RFP的上游，構成了編碼N0L-RFP 融合蛋白的融合基因)。(二)表達融合蛋白Bak-NOL-RFP的表達載體的構建Bak+ 由引物 Venus01n，Venus0 退火合成，并用 Xhol+Hindlll 連接到 NOL-DsRed 的N端。退火合成的基本過程(1)片段處理引物濃度0. lnmol/ulVenusOln 10ulVenus02c lOulLigase buffer (10 X) 3ul
H207ul_30ul
煮沸5min，冷卻至室溫 ⑵連接 去上述體系10ul Ligase Buffer 2ul Ligase1. 5ul
H206. 5ul
20ul
室溫連接2h
(3)酶切載體 pDsRedl-NOL
載體 Xhol Hindlll Buffer 2 H20
lulg 0. 5ul 0. 5ul 2ul 16ul
20ul
37度酶切4h
(4)膠回收酶切后的載體(步驟參照天跟公司膠回收試劑盒)
(5)連接
2ul lul 2ul 1. 5ul 13. 5ul
將(2)步中連接的片段 酶切后的載體 Ligase Buffer Ligase H20
20ul
室溫連接2h
(6)轉化取10ul連接產物加入大腸桿菌感受態細胞，冰浴20min，42度熱擊90s， 5min,加入500ul LB培養基，37度溫箱溫浴1小時，涂Amp+平板。
12
(7)挑克隆PCR鑒定(8)取陽性克隆DNA測序結果載體pDsRedl-NOL中在Xhol和Hindlll酶切位點間插入的Bak+編碼基因的 核苷酸序列如SEQ ID NO :10所示，表明得到的基因序列正確及構建的載體正確，將該重組 載體記作pBak-NOLs-DsRed ；該重組載體pBak-NOLs_DsRed表達Bak_N0L_RFP融合蛋白(本 實驗在pDsRedl-NOL中N0L-RFP的N端插入了 Bak的編碼基因，構成了編碼Bak_N0L_RFP 融合蛋白的融合基因)。
(三)表達融合蛋白NOL-RFP-TIG3的表達載體的構建 人工合成得到SEQ ID NO 12所示的TIG3基因。 (l)PCR 擴增 TIG3
模板SEQ ID NO 12所示的TIG3基因lul
引物 tig3-n-primer 5' -CAAGCTCGAGATGGCTTCGCCACACCAAGA-3‘ lul 引物 tig3-125c-primer5‘ -CTAGAAGCTTTTAGGACTTGCCATATCTCAGCTGGG-3‘ Pfu mixture (天根公司) H20
lul 25ul 22ul
50ul
反應條件94度5min
94 度 40sec 30cycles 60 度 40sec 72 度 lmin 4 度 lOmin (2)酶切(1) PCR產物 PCR擴增產物40ul
Xhollul
Hindllllul
Buffer 25ul
H203ul
50ul
37度酶切4h
(3)酶切載體 pDsRedl-NOL 載體 lulg Xhol0. 5ul
Hindlll 0. 5ul Buffer 2 2ul H2016ul
20ul
37 度酶切 4h(4)膠回收酶切后的載體(步驟參照天跟公司膠回收試劑盒)(5)連接將⑵步中連接的片段 2ul酶切后的載體lulLigase Buffer2ulLigase1. 5ulH2013. 5ul_20ul室溫連接2h(6)轉化取lOul連接產物加入大腸桿菌感受態細胞，冰浴20min，42度熱擊90s， 冰浴5min，加入500ul LB培養基，37度溫箱溫浴1小時，涂Kan+平板。(7)挑克隆PCR鑒定(8)取陽性克隆DNA測序結果載體pDsRedl-NOL中在Xhol和Hindlll酶切位點間插入的TIG3編碼基因 的核苷酸序列如SEQ ID NO :12中第1-375位核苷酸所示，表明得到的基因序列正確及構 建的載體正確，將該重組載體記作pTIG3-N0L-DsRed ；該重組載體pTIG3-N0L-DsRed表達 TIG3-N0L-RFP融合蛋白(本實驗在pDsRedl-NOL中N0L-RFP的N端插入了 TIG3的編碼基 因，構成了編碼TIG3-NOL-RFP融合蛋白的融合基因)。實施例2、共定位檢測HeLa細胞購自美國模式培養物研究所(簡稱ATCC)。轉染試劑購自威格拉斯生物 技術(北京)有限公司(Vigofect)。將HeLa細胞于37°C，5%的二氧化碳的加濕孵化器中培養，培養液為含10%胎牛 血清的DMEM(Dulbecco，Modified Eagle，s medium)。然后將細胞移至24孔組織培養板， 當細胞密度達到70%，迅速將各處理組的重組表達載體轉染細胞，使用PEI轉染試劑。得到 轉染細胞后，再過24小時檢測熒光量。轉染量處理組的重組表達載體分別為300ng。數據分析方法使用DMIL熒光顯微鏡(蔡司，德國)為所有轉染細胞進行熒光 圖像拍攝，每個共轉染組分別隨機選取300組照片，然后由Imagejl. 42軟件進行分析，得 出各處理組的共定位細胞數占樣本集合的百分比和非共定位細胞數的百分比。然后用 orginpro7. 5進行顯著性差異分析。各處理組如下 a、GFP-ABL+N0L-RFP ；b、GFP-Bcl2_ABL+N0L-RFPc、GFP-ABL+Bak-N0L-RFP Peptided、GFP-Bcl2-ABL+Bak-N0L-RFP Peptidee、GFP-ABL+TIG3-N0L-RFPf、GFP-Bc12-ABL+TIG3-N0L_RFP。結果如圖3和4所示。a、b、c、e組均是細胞核內呈現紅色，細胞質中呈現綠色，即沒有出現細胞核內共定
14位的現象。d和f 組全部為細胞核內同時出現紅色和綠色且綠色會在核內核仁處聚集，即細 胞核內共定位。表明，本發明的檢測方法檢測結果準確可靠。
權利要求
一種用于檢測待測蛋白是否相互作用的融合蛋白組，為如下1)和2)1)由熒光蛋白A、待測蛋白A和核輸出信號組成的融合蛋白；2)由熒光蛋白B、待測蛋白B和核定位信號組成的融合蛋白；所述熒光蛋白A與所述熒光蛋白B為發不同顏色熒光的熒光蛋白；所述1)所示融合蛋白與2)所示融合蛋白分別獨立包裝；所述待測蛋白A和待測蛋白B是待檢測是否相互作用的兩個蛋白。
2.根據權利要求1所述的融合蛋白組，其特征在于所述1)所示融合蛋白中，熒光蛋 白A、待測蛋白A和核輸出信號順次連接；所述2)所示融合蛋白中，待測蛋白B、核定位信號和熒光蛋白B順次連接。
3.根據權利要求1或2所述的融合蛋白組，其特征在于所述熒光蛋白A為紅色熒光 蛋白或綠色熒光蛋白；所述熒光蛋白B為紅色熒光蛋白或綠色熒光蛋白。
4.根據權利要求1-3中任一所述的融合蛋白組，其特征在于所述綠色熒光蛋白的氨 基酸序列如SEQ ID NO :1所示；所述紅色熒光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO :3所示；所 述核輸出信號的氨基酸序列如SEQ ID NO :5所示；所述核定位信號的氨基酸序列如SEQ ID NO :7所示。
5.權利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因；權利要求1-4中任一所述 2)所示融合蛋白的編碼基因。
6.如下I、II或III所示的重組表達載體、重組菌、轉基因細胞系或表達盒I、含有權利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達載體、重組 菌、轉基因細胞系或表達盒；II、含有權利要求1-4中任一所述2)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達載體、重組 菌、轉基因細胞系或表達盒；III、含有權利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因和權利要求1-4中任一 所述2)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達載體、重組菌、轉基因細胞系或表達盒。
7.根據權利要求6所述的重組表達載體、重組菌、轉基因細胞系或表達盒，其特征在于所述I中所述重組表達載體為如下a所示；所述II中所述重組表達載體為如下b所示；所述III中所述轉基因細胞系是將a所示重組表達載體和b所示重組表達載體轉入宿主 細胞得到的；a、按照如下方法得到的重組表達載體在載體pmWasabi-C的多克隆位點間插入所述 核輸出信號的編碼基因和待測蛋白A的編碼基因，使綠色熒光蛋白的編碼基因、待測蛋白A 的編碼基因和核輸出信號的編碼基因順次連接為融合基因；b、按照如下方法得到的重組表達載體在載體pDsRedl-Nl的多克隆位點間插入所述 核定位信號的編碼基因和待測蛋白B的編碼基因，使待測蛋白B的編碼基因、核定位信號的 編碼基因和紅色熒光蛋白的編碼基因順次連接為融合基因。
8.根據權利要求7所述的轉基因細胞系，其特征在于所述宿主細胞為Hela細胞系。
9.如下物質中的至少一種在檢測蛋白是否相互作用中的應用1)權利要求1-4中任一 所述的融合蛋白組，2)權利要求5所述編碼基因，3)權利要求6-8中III所述重組表達載體，4)權利要求6-8中III所述重組菌，5)權利要求6-8中III所述轉基因細胞系。
10. 一種檢測蛋白是否相互作用的方法，包括如下步驟檢測權利要求6-8中III所述轉 基因細胞系的熒光發光情況，根據檢測結果判別待測蛋白是否相互作用； 所述根據檢測結果判別待測蛋白是否相互作用的方法如下 若所述轉基因細胞系中細胞核中同時具有兩種顏色熒光，則所述待測蛋白相互作用， 若所述轉基因細胞系中細胞核中具有一種顏色熒光，而細胞質中具有另一個種顏色熒 光，則所述待測蛋白不能相互作用。
全文摘要
本發明提供了一種基于綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的雙熒光共定位系統。該組用于檢測待測蛋白是否相互作用的融合蛋白，為如下1)和2)1)由熒光蛋白A、待測蛋白A和核輸出信號組成；2)由熒光蛋白B、待測蛋白B和核定位信號組成；所述熒光蛋白A與所述熒光蛋白B為發不同顏色熒光的熒光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段與2)所示融合蛋白片段分別獨立包裝；所述待測蛋白A和待測蛋白B是待檢測是否相互作用的兩個蛋白。本發明方法檢測結果可靠，操作簡單，一目了然地看到共定位現象，易于判別，方便快捷。
文檔編號C12N1/21GK101863983SQ201010183669
公開日2010年10月20日 申請日期2010年5月25日 優先權日2010年5月25日
發明者周軍, 夏斌, 林堅 申請人:北京大學