專利名稱：一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑配方及其應用。
背景技術(shù)：
中性蛋白酶和木瓜蛋白酶目前是重要的醫(yī)藥、食品、釀酒、皮革制造等領(lǐng)域的重要 工業(yè)用酶，由于酶制劑有著作用條件溫和、專一性強等優(yōu)點，目前在已應用和未應用的領(lǐng)域 有著巨大的潛力。但目前中性蛋白酶和木瓜蛋白酶仍已粉狀酶為主，粉狀酶要在生產(chǎn)過程 中將發(fā)酵、濃縮、精制后的液體酶經(jīng)噴霧干燥后才能成為粉狀酶，由于酶制劑是生物活性物 質(zhì)，在噴霧干燥過程中由于溫度過高，一般會損失10-20%的活力，所以造成了活力的很大 損失，從而導致成品價格較高。而且粉狀酶使用不方便，粉狀固體酶的粉塵粘到皮膚上會對 皮膚造成燒傷，粉狀酶在應用時必須用水溶解后才能使用，由于粉狀酶在噴霧干燥時，選用 的截體不同，容易造成吸潮結(jié)塊或者載體不能完全溶于水，而造成蛋白酶不能均勻地與底 物接觸。目前液體蛋白酶產(chǎn)品在貯存過程中，由于蛋白酶自身的水解作用造成了酶的失活 量隨時間的延長而增加，穩(wěn)定性極差。貯存一周活力基本喪失，從而嚴重影響了液體濃縮蛋 白酶制劑的廣泛應用。因此，研究開發(fā)一種質(zhì)優(yōu)價廉、穩(wěn)定性良好的液體中性蛋白酶和木瓜 蛋白酶具有重大的產(chǎn)業(yè)化意義。如國家知識產(chǎn)權(quán)局公布的CN200710060594. 5( —種液體堿性蛋白酶復合穩(wěn)定 劑)專利方法，該該穩(wěn)定劑主要組分及重量份數(shù)分別為CaCl2 5-10硼砂5-10 4-FPBA 0. 05-0. 1甘油與丙二醇混合物5-10，該方法將這些穩(wěn)定劑按一定比例混合，加入液體堿性 蛋白酶中，通過多元醇及新型蛋白酶活性穩(wěn)定劑將蛋白酶活力暫時抑制，待酶液的環(huán)境改 變時，活力再重新恢復，但是這種方法的缺點是蛋白酶活力的恢復不是完全可逆的，液體堿 性蛋白酶活力不能完全恢復，只能恢復80%左右的活力，酶活損失還是較大，不具有產(chǎn)業(yè)化 應用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為工業(yè)用液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶提供了一種優(yōu)良的防腐劑配方及應用。本發(fā)明是采用如下方案實現(xiàn)的一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑，其特征在于其構(gòu)成組分及重量 份數(shù)分別為硼砂0. 5-1甘油0. 5-1乙二醇 0. 5-1硫酸鎂0.01-0. 05復合氨基酸0.5-1將上述各組分充分溶解、混合后，即可制得一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑成品。所述的構(gòu)成組分的最優(yōu)重量份數(shù)分別為硼砂0.5甘油1乙二醇 1硫酸鎂0.05復合氨基酸1所述述復合氨基酸中酪氨酸纈氨酸=8 2本發(fā)明的顯著效果是1、本發(fā)明的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶防腐劑是根據(jù)蛋白酶本身的性質(zhì)，選用 活性保護劑，并根據(jù)實驗，確定活性保護劑的最佳配方及用量，在液體中性蛋白酶和木瓜蛋 白酶周圍形成膠束，降低液體酶在溶液中的游離范圍，并且這種復合防腐劑對溫度不敏感， 溫度升高對復合防腐劑不能起到破壞作用。2、本液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑性質(zhì)穩(wěn)定，成本低廉，加入該防 腐劑后液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶在25°C條件下可保存3個月，且3個月后的相對酶活 力在90%以上。3、鎂離子能夠屏蔽蛋白酶分子表面的負電荷，并且鎂離子可以和液體蛋白酶的 活性中心相結(jié)合，使有活性的構(gòu)象能夠穩(wěn)定存在。4、甘油和乙二醇能夠起到增稠的作用，并且在酶蛋白受熱時，保護分子的氫鍵不 發(fā)生變形，從而可代替水作為溶劑對蛋白分子的氫鍵起到保護作用。5、硼砂硼砂本身可以起到殺菌作用，硼砂對液體蛋白酶里的菌類起到隔離作用， 避免雜菌與酶制劑的活性中心結(jié)合，起到延長酶活保質(zhì)期的作用。6、復合氨基酸蛋白酶降解的最終產(chǎn)物為氨基酸，加入一定量的復合氨基酸，可以 起到提前達到酶制劑反應的動態(tài)平衡，保護蛋白酶自身的降解。
具體實施例方式1、本發(fā)明的生產(chǎn)工藝流程發(fā)酵生產(chǎn)的中性淀粉酶或木瓜蛋白酶，過濾，除去濾 渣，經(jīng)膜濃縮至所需活力，加入硼砂0. 5-1，甘油0. 5-1，乙二醇0. 5-1，硫酸鎂0. 01-0. 05，復 合氨基酸0. 5-1，混合均與，檢測活力，定量灌裝，最后成品入庫。2、本發(fā)明應用小試情況如下，常規(guī)方法作為對照組進行對比試驗，中性蛋白酶檢 測方法按照國標GBT23527-2009附錄C紫外分光光度法；木瓜蛋白酶的檢測方法按照廣西 科學院生物研究所制定的方法檢測，活力定義分別如下蛋白酶活力定義Ig固體酶粉(或ImL液體酶)，在一定溫度和pH值下，Imin水 解酪蛋白產(chǎn)生Iyg酪氨酸，即為ι個酶活力單位，以μ/g或y/mL表示。木瓜蛋白酶活力定義在測定條件下，每分鐘水解酪蛋白釋出的三氯乙酸可溶物， 在280nm的吸光度與1 μ g的酪氨酸吸光度相當時，所需要的酶量為1個酶活力單位，以μ / g或μ /mL表示。試驗中各取剛生產(chǎn)出的中性蛋白酶和木瓜蛋白酶原液IOOOmL,在25°C的恒溫器 中恒溫保存，每隔10天檢測兩種液體酶的活力，分別以空白為對照。
3、實驗結(jié)果如下
權(quán)利要求
一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑，其特征在于其構(gòu)成組分及重量份數(shù)分別為硼砂0.5 1甘油0.5 1乙二醇0.5 1硫酸鎂0.01 0.05復合氨基酸0.5 1將上述各組分充分溶解、混合后，即可制得一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑成品。
2.如權(quán)利要求1所述的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑，其特征在于所述 的構(gòu)成組分的最優(yōu)重量份數(shù)分別為硼砂0. 5 甘油1 乙二醇1 硫酸鎂0. 05 復合氨基酸1
3.如權(quán)利要求1所述的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑，其特征在于上述 復合氨基酸構(gòu)成組分及重量份數(shù)分別為酪氨酸纈氨酸=8 全文摘要
本發(fā)明涉及一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的復合防腐劑，其構(gòu)成組分及重量份數(shù)分別為硼砂0.5-1；甘油0.5-1；乙二醇0.5-1；硫酸鎂0.01-0.05；復合氨基酸0.5-1；將上述各組分充分溶解、混合后，即可制得一種液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑成品。本發(fā)明制備方法簡單，成分合理，成本低廉液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶穩(wěn)定性強(在25℃恒溫保存3個月，酶活仍然在90％以上)，此方法是是一種高效的液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的防腐劑，對目前高活力液體中性蛋白酶和木瓜蛋白酶制劑的產(chǎn)業(yè)化具有重大意義。
文檔編號C12N9/96GK101974506SQ201010291310
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月26日
發(fā)明者劉寶龍, 劉金花, 吳鵬, 宋宵因, 幸芬, 王剛, 趙巖, 趙路, 郭峰, 馬清真 申請人:吳鵬;郭峰