專利名稱：一種能抗重茬障礙的復合微生物制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及復合微生物制劑技術領域，特別涉及一種能抗重茬障礙的復合微生物 制劑及其制備方法。
背景技術：
農作物重茬障礙是指某些農作物在一塊土地上重復種植兩年以上就會產生減產 甚至絕收的現象，對農業危害較大。其原因一種觀點認為是由于長期在同一塊地里種同一 種作物，會造成養分不平衡，或某些養分的供給不足(尤其是人們在只施用化學N、p2O5、K2O 而不施有機肥的情況下)，限制了作物生長和產量的保持；二是由于長期在同一地塊種同 一種作物，會導致與該種作物相適應的病蟲害的增加，通過種子尤其是土壤本身的傳播，導 致作物減產甚至絕收。解決作物重茬障礙問題一直為農業科技界所重視，大多是針對引起重茬的兩個原 因加以解決，如增施有機肥和某些微量元素肥料，提高土壤全效性養分含量和養分的全效 性；采用化學的、生物的或生物化學的方法來抑制土壤的病蟲害，尤其是抑制土傳病的傳播。近年來的發展表明，人們力圖找到一個既能改善土壤肥力狀況以能滿足作物生長 需要、又能抑制土壤病蟲害對作物的危害兩全其美的方法。這方面的努力也取得了一些效 果，但不理想。如采用昆蟲線蟲、昆蟲體、昆蟲代謝產物和雙糖或寡糖組成的抗重茬土壤改 良劑，采用甲殼素制成的多抗重茬保功能有機肥，采用經過強化的放線菌及功能性原料加 工而成的抗重茬生物菌劑，采用芽孢桿菌、木霉菌和粘帚霉等高效微生物菌株，采用現代高 效生物發酵技術加工制備而成的微生物制劑一向日葵重茬菌劑，采用多粘類芽孢桿菌和哈 茨木霉制成的黃瓜專用的復合抗重茬劑等。現有技術中已經采用了芽孢桿菌、木霉菌和粘帚霉等高效微生物菌株制備而成的 微生物制劑-向日葵重茬菌劑；采用多粘類芽孢桿菌和哈茨木霉制成的黃瓜專用的復合抗 重茬劑。但這些技術的共同特點是組成菌種少、可適用的作物種類少、局限性大。另外現有 技術中還采用經過強化的放線菌及功能性原料加工成的抗重茬生物菌劑。但仍然存在菌種
組成單一、功能單一等缺陷。

發明內容
為了解決上述農作物重茬問題以及現有技術中為解決重茬問題所采取的技術方 案中所存在的缺陷，在農業生態學、土壤學和作物營養學原理的指導下，本申請的研究人員 采用微生態工程技術，遵循微生態學原理和采用微生態工程技術，從自然界本來就存在的 有益(有效)微生物種群中篩選出共生性能好，抑制病原菌等有害微生物能力強，能有效分 解、活化和提高土壤有效養分含量的植物乳桿菌、釀酒酵母、沼澤紅假單胞菌、釀酒酵母菌、 白色鏈霉菌，采用厭氧和好氧相結合的發酵工藝，生產出的穩定的微生態制劑——高效抗 重茬復合菌劑。
本發明提供了一種用于抗重茬障礙的復合微生物制劑，其特征在于，所述復合微 生物制劑包括植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈霉菌、沼澤紅假單胞菌，并由 上述菌組分通過厭氧和好氧相結合的發酵工藝復合培養而成。所述各菌組分的重量百分比 (本發明中所稱“各菌組分的重量百分比”是指上述各個菌組分的重量占上述各菌組分重量 之和的比例)為植物乳桿菌為15 35%;巨大芽孢桿菌為5 25%;釀酒酵母菌為10 30% ；白色鏈霉菌為15 30% ；沼澤紅假單胞菌10 25%。優選為植物乳桿菌為20 30% ；巨大芽孢桿菌為10 20% ；釀灑酵母菌為15 25% ；白色鏈霉菌為15 25% ；沼 澤紅假單胞菌15 25%。各菌組分的重量百分比優選方案之一為植物乳桿菌為30% ；巨大芽孢桿菌為 15% ；釀酒酵母菌為20% ；白色鏈霉菌為20% ；沼澤紅假單胞菌15%。各菌組分的重量百分比優選方案之二為植物乳桿菌為25% ；巨大芽孢桿菌為 10% ；釀酒酵母菌為20% ；白色鏈霉菌為25% ；沼澤紅假單胞菌20%。各菌組分的重量百分比優選方案之三為植物乳桿菌為20% ；巨大芽孢桿菌為 20% ；釀酒酵母菌為20% ；白色鏈霉菌為20% ；沼澤紅假單胞菌20%。所述復合微生物制劑的總菌數彡2X IO8個/ml，PH值為3. 5 4. 0。一種制造用于抗重茬障礙的復合微生物制劑的方法，包括如下步驟(1)將植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈霉菌、沼澤紅假單胞菌在各 自培養基中進行單菌培養的步驟；(2)將植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈 霉菌在加有糖蜜的各自培養基中進行馴化培養，將沼澤紅假單胞菌在其加有糖蜜的培養基 中加入釀酒酵母菌進行復合馴化培養的步驟；(3)將馴化好的上述菌株液體種子混合，進 行復合培養的步驟。其中步驟(1)中植物乳桿菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為酪蛋 白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖5g，乳糖5g，乙酸鈉5g，檸檬酸二銨2g，Tween80 lg, K2HPO4 · 3H20 2g, MnSO4 · 4H20 0. 05g, MgSO4 · 7H20 0. 2g, CaCO3 · 7H20 20g,瓊脂 15g,蒸 餾水IOOOmL ；PH值為6. 8 ；巨大芽孢桿菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為 牛肉膏10g，蛋白胨10g，NaC15g,水lOOOmL，PH值為7. 2 7. 4 ；釀酒酵母菌的單菌株制備中 所使用的培養基的組分比例為=NaNO3 3g，K2HPO4 · 3H20 lg, MgS04 · 7H20 0. 5g，KCl 0. 5g， FeSO4 · 7H20 0. Olg,蔗糖30g，瓊脂15g，蒸餾水IOOOmL ；白色鏈霉菌的單菌株制備中所使 用的培養基的組分比例為=NaCl 0. 5g，KNO3 1. 0g, K2HPO4 · 3H20 0. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g， FeSO4 ·7Η20 IOmg,可溶性淀粉20g,瓊脂20g,水IOOOmL ；PH值為7. 2 7. 4 ；沼澤紅假單胞 菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為蛋白胨3g，酵母膏3g，MgS04*7H20 0. 5g， CaCl2 0. 3g，瓊脂 15g，蒸餾水 IOOOmL, PH 值為 6. 8。步驟(2)中植物乳桿菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為蛋白胨 10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖5g，乳糖5g，乙酸鈉5g，檸檬酸二銨2g，Tween80 lg, K2HPO4 · 3H20 2g, MnSO4 · 4H20 0. 05g, MgSO4 · 7H20 0. 2g, CaCO3 · 7H20 20g,蒸餾水 IOOOmL ； 在所述培養基中加入糖蜜調PH值至6. 8 ；巨大芽孢桿菌的馴化培養中所使用的培養基的 組分比例為牛肉膏10g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水IOOOmL ；在所述培養基中加入糖蜜調pH 值至7. 2 ；釀酒酵母菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為=NaNO3 3g，K2HPO4 · 3H20 lg, MgS04 · 7H20 0. 5g，KCl 0. 5g，FeSO4 · 7H20 0. Olg,蔗糖 30g，蒸餾水 IOOOmL ；在所述培養基中加入糖蜜，PH值自然；白色鏈霉菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為 NaCl 0. 5g, KNO3 1. 0g, K2HPO4 · 3H20 0. 5g, MgSO4 · 7H20 0. 5g, FeSO4 · 7H20 10mg，可溶性淀 粉20g，水IOOOmL ；在所述培養基中加入糖蜜調PH值至6.8 ；沼澤紅假單胞菌的馴化培養 中所使用的培養基的組分比例為蛋白胨3g，酵母膏3g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，CaCl2 0. 3g，蒸 餾水IOOOmL ；在所述培養基中加入糖蜜調PH值至6. 8，再加入釀酒酵母菌進行復合馴化培 養；在步驟(3)的復合培養中，培養基的組分為經預處理的糖蜜和蛋白胨，其中糖蜜 和蛋白胨的重量比例為20 1，PH值調至6.8，100°C滅菌2小時；快速冷卻至40°C后，取上 述馴化好的液體種子混合，進行接種，上述馴化好的液體種子與上述糖蜜的比例為1 1， 其中在上述馴化好的液體種子中各菌組分重量比例為植物乳桿菌為15 35%，巨大芽孢 桿菌為5 25 %，釀酒酵母菌為10 30 %，白色鏈霉菌為15 30 %，沼澤紅假單胞菌10 25% ；30 35°C，72 120個小時發酵，待PH值降至3. 5 4. O時即可。本發明抗重茬障礙的復合微生物制劑主要的功能作用如下1、一方面提高作物自身的抗病能力，另一方面，能有效防止真菌性、細菌性病害， 對抑制病毒性病害有很好的作用。如黃萎病、立枯病、照斑病、根腐病、環腐病、晚疫病、黑穗 病、照粉病等幾十種都能很好的防治，為重茬作物健康生長提供了保征。2、該菌劑和畜禽糞便、餅粕、糠麩等有機原材料混合發酵制成的生物有機肥，加速 有機肥和土壤礦質養分的分解與轉化，N、P205、K2O等有效養分含量提高30% 50%，有 效提高了土壤中微量元素和微量元素的有效性。為重茬作物的生長提供了營養保征。3、微生物生長過程中產生的代謝產物，乳酸、甲酸和乙酸等有機酸、細菌素，促生 長物質等，有效調節和促進了作物生長。4、和生物有機肥相結合，能有效提高土壤有機質含量，改善土壤的物理、化學和生 物性狀，提高土壤的綜合肥力。5、提高農產品品質，藥殘少，有害物質如N2O根等明顯降低。蛋白質、糖分、干物質 含量明顯提高，促進早熟，貨架壽命延長。
具體實施例方式本發明中所涉及的菌株均來源于“中國普通微生物菌種保藏管理中心”(CGMCC)， 并從“中國普通微生物菌種保藏管理中心”直接購買獲得。植物乳桿菌(LactobacillusPlantarum)，商品編號為CGMCC1. 557巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium de Bary 商品編號為CGMCC1. 1870釀酒酵母Saccharomycescerevisiae商品編號為CGMCC 2. 168白色鏈霉菌(Streptomyces albus)，商品編號為CGMCC4. 188沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudanonas palustris)，商品編號為CGMCC1. 2352各菌株作用植物乳桿菌(Lactobacillus Plantarum)是一種乳桿菌屬益生菌，乳桿菌可以產 生有機酸、細菌素、過氧化氫、雙乙酰等多種天然抑菌物質，具有維持體內菌群平衡，提高機 體免疫力，促進營養物質吸收等多種功能。尤其是乳桿菌產生的抑菌活性代謝產物細菌素， 不僅可以改善腸道生態，還可以用于食品與飼料的防腐。植物乳桿菌素是植物乳桿菌產生的一類具有抑菌活性的肽類，可以抑制許多革蘭氏陽性菌。植物乳桿菌通過微生物奪氧及 在消化道內附著定植和對營養素的競爭，調節腸道內菌群趨于正常化，抑制致病菌和有毒 菌的生長；植物乳桿菌的代謝可產生有機酸，降低動物腸道PH值，殺死不耐酸的有害菌 ’產 生溶菌酶、過氧化氫等物質，可殺害潛在的病原菌；產生的代謝產物可以抑制腸內胺和氨的 產生；產生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，有利于物質的分解；合成B族維生素，氨基酸。巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium de Bary)解磷解鉀細菌，巨大芽孢桿菌具 有很好的降解土壤中有機磷的功效，是生產生物有機肥的常用菌種，也是制作水體處理劑 的常用菌種；在生長繁殖過程中能產生大量的有機酸，可將土壤中的難溶性有機態或無機 態含磷物質分解或溶解，轉化成易被植物吸收的磷，從而提高土壤磷素的利用率，達到提高 植物磷素營養的目的。在土壤中繁殖后，同時還產生植物激素，還能抑制其他病原菌的生 長。釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)酵母菌將葡萄糖、果糖、甘露糖等單糖吸 入細胞內，在無氧的條件下，經過內酶的作用，把單糖分解為二氧化碳和酒精。此作用即發 酵。酵母菌富含維生素B、蛋白質和多種酶，可從酵母菌中提取生產核酸類衍生物、輔酶A、 細胞色素C、谷胱甘肽和多種氨基酸的原料。白色鏈霉菌(Str印tomyces albus)可產生大量抗生素及多種酶，抑制土壤病原 微生物的繁殖。促進有氧微生物的生長，調節土壤酸堿度的平衡。可在高溫下分解纖維素等 復雜的有機質。在自然界分布很廣，絕大多數為腐生，少數寄生。產生種類繁多的抗生素， 能利用葡萄糖。有較強的淀粉和蛋白質水解能力。對土壤中復雜有機物的礦化發揮重要作用。沼澤紅假單胞菌(Rhodoop seudanonas palustris) :B族維生素極為豐富，Vb2、 葉酸、泛酸、生物素的含量也較高，同時還含有大量的類胡蘿卜素、輔酶Q等生理活性物質。 因此，光合細菌具有很高的營養價值。通過微生物酶的作用，分解和合成有機質。其中起主 要作用的是細菌，空氣中一些可溶性的有機物在胞內酶的作用下被菌體選擇性地吸收；顆 粒、膠體等難溶或不溶性的有機物先附著在菌體外，由菌細胞分泌的胞外酶分解成脂溶性 和水溶性物質，再被菌體吸收。通過微生物體內的生化作用，將一部分有機物同化成自身， 另一部分被異化成水分子有機物、二氧化碳、水等，從而使污染物質得到降解。例如光合細 菌(莢膜紅假單胞菌)可將致癌物亞硝胺轉化為無毒的化合物，快速降解氨氮、亞硝酸鹽和 硫化氫等有害物質，調節PH值。分解有機物。促進有益菌類的生長繁殖，維持菌群平衡，防 止有害菌類過度繁殖。本發明的復合微生物制劑的制造方法包括以下步驟(1)將植物乳桿菌、巨大芽 孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈霉菌、沼澤紅假單胞菌在各自培養基中進行單菌培養的步驟； (2)將植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈霉菌在加有糖蜜的各自培養基中進 行馴化培養，將沼澤紅假單胞菌在其加有糖蜜的培養基中加入釀酒酵母菌進行復合馴化培 養的步驟；(3)將馴化好的上述菌株液體種子混合，進行復合培養的步驟。各步驟具體描述 如下①單菌株制備植物乳桿菌的制備培養基(MRS培養基)酪蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g， 葡萄糖 5g,乳糖 5g，乙酸鈉 5g，檸檬酸二銨 2g，Tween80 lg，K2HPO4 · 3H202g, MnSO4 · 4H20
70. 05g, MgSO4 · 7H20 0. 2g, CaCO3 · 7H20 20g，瓊脂 15g，蒸餾水 1000ml, pH6. 8。將購買的植物乳桿菌安培管接種于培養基斜面中，厭氧37°C培養36 48小時活 化，如有需要，可連續活化2次。用接種針取出在培養基平板上劃線分離，厭氧37°C培養 36 48小時。選取長勢良好的單菌落經鏡檢確認無污染后，用接種針選取單菌落接種至液 體培養基中，以密閉的玻璃瓶厭氧37°C培養24 36小時。巨大芽孢桿菌的制備培養基牛肉膏10g，蛋白胨10g，NaCl 5g，瓊脂15g，自來水 1000ml, pH 值為 7. 2 7. 4。將購買的巨大芽孢桿菌安培管接種于培養基斜面中，好氧25 30°C培養18 24 小時活化，如有需要，可連續活化2次。用接種針取出于培養基平板上劃線分離，好氧25 30°C培養18 24小時。選取長勢良好的單菌落經鏡檢確認無污染后，用接種針選取單菌 落接種至液體培養基中，以三角瓶25 30°C好氧振蕩培養18 24小時。釀酒酵母的制備培養基，NaNO33g，K2HPO4. 3H20 lg，MgS04 · 7H20 0. 5g，KCl 0. 5g，FeSO4 · 7H20 0. Olg，蔗糖 30g，瓊脂 15g，蒸餾水 1000ml, pH 自然。將購買的釀酒酵母安培管接種于培養基斜面中，好氧25 28°C培養18 24小時 活化，如有需要，可連續活化2次。用接種針取出于培養基平板上劃線分離，好氧25 28°C 培養18 24小時。選取長勢良好的單菌落經鏡檢確認無污染后，用接種針選取單菌落接 種至液體培養基中，以三角瓶25 28°C好氧振蕩培養18 24小時。白色鏈霉菌的制備培養基(高氏合成一號瓊脂)=NaCl 0. 5g, KNO3 1. 0g, K2HPO4 · 3H20 0. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，FeSO4 · 7H20 10mg，可溶性淀粉 20g，瓊脂 20g，冷開 水 1000ml, pH 值為 7. 2 7. 4。將購買的白色鏈霉菌安培管接種于培養基斜面中，好氧25 30°C培養72 144 小時活化，如有需要，可連續活化2次。用接種針取出于培養基平板上劃線分離，好氧25 30°C培養72 144小時。選取長勢良好的單菌落經鏡檢確認無污染后，用接種針選取單菌 落接種至液體培養基中，以三角瓶25 30°C好氧振蕩培養72 144小時。沼澤紅假單胞菌的制備培養基蛋白胨3g，酵母膏3g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，CaCl2 0. 3g，瓊脂15g，蒸餾水 1000ml, pH 值為 6. 8。將購買的沼澤紅假單胞菌安培管接種于培養基斜面中，光照厭氧37°C培養120 168小時活化，如有需要，可連續活化2次。經鏡檢確認無污染后，用無菌移液管接種至液體 培養基中，以密閉的玻璃瓶光照厭氧37°C培養120 168小時。②馴化培養植物乳桿菌的馴化在200升厭氧種子罐內加入培養基(組分比例為蛋白胨 10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖5g，乳糖5g，乙酸鈉5g，檸檬酸二銨2g，Tween80 lg, K2HPO4 · 3H20 2g, MnSO4 · 4H20 0. 05g, MgSO4 · 7H20 0. 2g, CaCO3 · 7H20 20g,蒸餾水 IOOOmL) 20 升、5公斤糖蜜(糖蜜經預處理)調pH值至6. 8，100°C滅菌2小時，快速冷卻至40度后，接 入10升液體植物乳桿菌，在種子罐內進行馴化培養。培養條件為厭氧，30 35°C，偶爾攪 拌，攪拌速度為40rpm，36 48小時。巨大芽孢桿菌的馴化在200升好氧種子罐內加入培養基(組分比例為牛肉膏 10g，蛋白胨10g，NaC15g，水IOOOmL) 20升、5公斤糖蜜(糖蜜經預處理)調pH值至7. 2，100°C滅菌2小時，快速冷卻至35度后，接入5升液體巨大芽孢桿菌，在種子罐內進行馴化 培養。培養條件為好氧，25 30°C，持續攪拌，攪拌速度為80rpm，18 24小時。釀酒酵母的馴化在200升好氧種子罐內加入培養基(組分比例為=NaNO3 3g， K2HPO4 · 3H20 lg, MgS04 · 7H20 0. 5g, KCl 0. 5g, FeSO4 · 7H20 0. Olg，蔗糖 30g,蒸餾水 1000mL)20升、5公斤糖蜜(糖蜜經預處理)，PH值自然，100°C滅菌2小時，快速冷卻至35 度后，接入5升液體釀酒酵母，在種子罐內進行馴化培養。培養條件為好氧，25 28°C，持 續攪拌，攪拌速度為40rpm，18 24小時。白色鏈霉菌的馴化在200升好氧種子罐內加入培養基(組分比例為NaC10. 5g， KNO3 1. 0g, K2HPO4 · 3H20 0. 5g, MgSO4 · 7H20 0. 5g, FeSO4 · 7H20 10mg，可溶性淀粉 20g，水 IOOOmL) 20升、5公斤糖蜜(糖蜜經預處理)調pH值至6. 8，100°C滅菌2小時，快速冷卻至 35度后，接入10升液體白色鏈霉菌，在種子罐內進行馴化培養。培養條件為好氧，25 30°C，持續攪拌，攪拌速度為40rpm，120 144小時。沼澤紅假單胞菌的馴化在200升厭氧種子罐內加入培養基(組分比例為蛋白 胨 3g，酵母膏 3g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，CaCl2 0. 3g，蒸餾水 1000mL)20 升、5 公斤糖蜜(糖蜜 經預處理)調pH值至6. 8，100°C滅菌2小時，快速冷卻至40度后，接入20升液體沼澤紅假 單胞菌、5升液體釀酒酵母菌在種子罐內進行復合馴化培養。培養條件為光照厭氧，30 35°C, 120 168 小時。③復合培養經過在多個農業主產區的反復試驗，各菌組分的重量百分比在如下范圍內時，本 發明的復合微生物制劑能達到最優效果其中植物乳桿菌為15 35%，優選為20 30%; 巨大芽孢桿菌為5 25%，優選為10 20%;釀酒酵母菌為10 30%，優選為15 25%; 白色鏈霉菌為15 30 %，優選為15 25 % ；沼澤紅假單胞菌10 25 %，優選為15 25 %。在2噸的發酵罐內加入培養基，培養基的組成為200公斤糖蜜(糖蜜經預處理)、 10公斤蛋白胨，調pH值至6. 8，100°C滅菌2小時。快速冷卻至40°C后，取上述馴化好的 液體種子混合，進行接種，馴化好的液體種子各菌組分的質量之和與上述糖蜜的重量比例 為1 1，其中在上述馴化好的液體種子中每個菌組分的重量占各個菌組分的重量之和的 比例為植物乳桿菌30 70公斤，優選40 60公斤；巨大芽孢桿菌10 50公斤，優選 20 40公斤；釀酒酵母菌20 60公斤，優選30 50公斤；白色鏈霉菌30 60公斤， 優選30 50公斤；沼澤紅假單胞菌20 50公斤，優選30 50公斤。厭氧，30 35 °C， 72 120小時。72小時開始檢測pH，每4小時一次，待pH降至3. 5 4. 0之間時，即可出 罐。其中所獲得的抗重茬障礙微生態制劑產品①顏色液體呈半透明紅棕色；②氣味發 酵型酸味；③pH :3. 5 4. 0 ；菌數彡2. 0 X IO8個/ml。配方方案一在2噸的發酵罐內加入培養基，培養基的組成為200公斤糖蜜(糖蜜 經預處理)、10公斤蛋白胨，調pH值至6. 8，100°C滅菌2小時。快速冷卻至40度后，取馴化 好的液體種子混合，進行接種，植物乳桿菌60公斤，巨大芽孢桿菌30公斤，釀酒酵母菌40 公斤，白色鏈霉菌40公斤，沼澤紅假單胞菌30公斤。厭氧，30 35°C，72 120小時。72 小時開始檢測PH，每4小時一次，待pH降至4. 0以下時，即可出罐。①顏色液體呈半透明 紅棕色；②氣味發酵型酸味；③PH 3. 8 ；④總菌數2. 7 X IO8個/ml。配方方案二 在2噸的發酵罐內加入培養基，培養基的組成為200公斤糖蜜(糖蜜經預處理)、10公斤蛋白胨，調pH值至6. 8，100°C滅菌2小時。快速冷卻至40度后，取馴化 好的液體種子混合，進行接種，植物乳桿菌50公斤，巨大芽孢桿菌20公斤，釀酒酵母菌40 公斤，白色鏈霉菌50公斤，沼澤紅假單胞菌20公斤。厭氧，30 35°C，72 120小時。72 小時開始檢測PH，每4小時一次，待pH降至3. 8以下時，即可出罐。其中所獲得的抗重茬障 礙微生態制劑產品①顏色液體呈半透明紅棕色；②氣味發酵型酸味；③PH 3. 6 ；④總 菌數:2· 4X IO8 個/ml。配方方案三在2噸的發酵罐內加入培養基，培養基的組成為200公斤糖蜜(糖蜜 經預處理)、10公斤蛋白胨，調PH值至6. 8，100°C滅菌2小時。快速冷卻至40度后，取馴化 好的液體種子混合，進行接種，植物乳桿菌40公斤，巨大芽孢桿菌40公斤，釀酒酵母菌40 公斤，白色鏈霉菌40公斤，沼澤紅假單胞菌40公斤。厭氧，30 35°C，72 120小時。72 小時開始檢測PH，每4小時一次，待pH降至3. 6以下時，即可出罐。其中所獲得的抗重茬障 礙微生態制劑產品①顏色液體呈半透明紅棕色；②氣味發酵型酸味；③PH 35 ；④總菌 數2. 2X IO8 個/ml。經在農業主產區反復試驗發現，在上述的可選范圍內，本發明的復合微生物制劑 發酵時間、產品PH值都比較穩定，產品抗重茬障礙效果較好。當本發明中的復合微生物 制劑中植物乳桿菌占菌株總重量小于15%或大于35%時，巨大芽孢桿菌小于5%或大于 25%，釀酒酵母菌小于10 %或大于30 %時，復合微生物制劑的抗重茬效果相比自然狀態下 無顯著的改善，或者雖然抗重茬效果有所改善，但會對其它農作物造成損害，效果不佳，無 法達到實用目的。因此本發明的復合微生物制劑中各菌組分的重量百分比含量優選在上述 范圍內。配方方案表
權利要求
一種用于抗重茬障礙的復合微生物制劑，其特征在于，所述復合微生物制劑包括植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀灑酵母菌、白色鏈霉菌、沼澤紅假單胞菌，并由上述菌組分通過厭氧和好氧相結合的發酵工藝復合培養而成。
2.如權利要求1所述的復合微生物制劑，其特征在于所述各菌組分的重量百分比為 植物乳桿菌為15 35% ；巨大芽孢桿菌為5 25% ；釀酒酵母菌為10 30% ；白色鏈霉 菌為15 30% ；沼澤紅假單胞菌10 25%。
3.如權利要求2所述的復合微生物制劑，其特征在于所述各菌組分的重量百分比為 植物乳桿菌為20 30% ；巨大芽孢桿菌為10 20% ；釀酒酵母菌為15 25% ；白色鏈霉 菌為15 25% ；沼澤紅假單胞菌15 25%。
4.如權利要求3所述的復合微生物制劑，其特征在于所述各菌組分的重量百分比為 植物乳桿菌為30% ；巨大芽孢桿菌為15% ；釀酒酵母菌為20% ；白色鏈霉菌為20% ；沼澤 紅假單胞菌15%。
5.如權利要求3所述的復合微生物制劑，其特征在于所述各菌組分的重量百分比為 植物乳桿菌為25% ；大芽孢桿菌為10% ；釀酒酵母菌為20% ；白色鏈霉菌為25% ；沼澤紅 假單胞菌20%。
6.如權利要求3所述的復合微生物制劑，其特征在于所述各菌株組分的重量百分比 為植物乳桿菌為20% ；巨大芽孢桿菌為20% ；釀酒酵母菌為20% ；白色鏈霉菌為20% ；沼 澤紅假單胞菌20%。
7.如權利要求1至6之一所述的復合微生物制劑，其特征在于，所述復合微生物制劑的 總菌數彡2 X IO8個/ml，PH值為3. 5 4. 0。
8.—種制造如權利要求1至6之一所述的用于抗重茬障礙的復合微生物制劑的方法， 包括如下步驟(1)將植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈霉菌、沼澤紅假單胞菌在各自培 養基中進行單菌培養的步驟；(2)將植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈霉菌在加有糖蜜的各自培養基 中進行馴化培養，將沼澤紅假單胞菌在其加有糖蜜的培養基中加入釀酒酵母菌進行復合馴 化培養的步驟；(3)將馴化好的上述菌株液體種子混合，進行復合培養的步驟。
9.如權利要求8所述的制造復合微生物制劑的方法，其特征在于步驟(1)中植物乳 桿菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為酪蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g， 葡萄糖 5g,乳糖 5g，乙酸鈉 5g，檸檬酸二銨 2g，Tween801g, K2HPO4 · 3H20 2g，MnSO4 · 4H20 0. 05g，MgSO4 · 7H20 0. 2g，CaCO3 · 7H20 20g，瓊脂 15g，蒸餾水 IOOOmL ；PH 值為 6. 8 ；巨大芽孢桿菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為牛肉膏I0g，蛋白胨 10g, NaCl 5g,水 IOOOmLPH 值為 7. 2 7. 4 ；釀酒酵母菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為=NaNO3 3g，K2HPO4. 3H20 lg，MgS04 · 7H20 0. 5g，KCl 0. 5g，FeSO4 · 7H20 0. Olg，蔗糖 30g，瓊脂 15g，蒸餾水 IOOOmL ；白色鏈霉菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為=NaCl 0. 5g, KNO3L Og, K2HPO4 · 3H20 0. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，FeSO4 · 7H20 10mg，可溶性淀粉 20g，瓊脂 20g，水 IOOOmL ；PH 值為 7. 2 7. 4 ；沼澤紅假單胞菌的單菌株制備中所使用的培養基的組分比例為蛋白胨3g，酵母膏 3g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，CaCl2 0. 3g，瓊脂 15g，蒸餾水 lOOOmL，PH 值為 6. 8。
10.如權利要求9所述的制造復合微生物制劑的方法，其特征在于步驟(2)中植物乳 桿菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄 糖 5g，乳糖 5g，乙酸鈉 5g，檸檬酸二銨 2g，Tween80 lg，K2HPO4 ·3Η20 2g, MnSO4 ·4Η20 0. 05g, MgSO4 · 7H20 0. 2g，CaCO3 · 7H20 20g,蒸餾水IOOOmL ；在所述培養基中加入糖蜜調pH值至 6. 8 ；巨大芽孢桿菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為牛肉膏I0g，蛋白胨10g， NaCl 5g，水IOOOmL ；在所述培養基中加入糖蜜調pH值至7. 2 ；釀酒酵母菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為=NaNO3 33g，K2HPO4 · 3H20 lg, MgS04 · 7H20 0. 5g，KCl 0. 5g，FeSO4 · 7H20 0. 01g，蔗糖 30g，蒸餾水 IOOOmL ；在所述培養基 中加入糖蜜，PH值自然；白色鏈霉菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為=NaCl 0. 5g, KNO3L 0g, K2HPO4 · 3H20 0. 5g, MgSO4 · 7H20 0. 5g, FeSO4 · 7H20 10mg，可溶性淀粉 20g，水 IOOOmL ；在所 述培養基中加入糖蜜調PH值至6. 8 ；沼澤紅假單胞菌的馴化培養中所使用的培養基的組分比例為蛋白胨3g，酵母膏3g， MgSO4 ·7Η20 0. 5g，CaCl2 0. 3g，蒸餾水IOOOmL ；在所述培養基中加入糖蜜調PH值至6. 8，再 加入釀酒酵母菌進行復合馴化培養；在步驟(3)的復合培養中，培養基的組分為經預處理的糖蜜和蛋白胨，其中糖蜜和蛋 白胨的重量比例為20 1，PH值調至6.8，100°C滅菌2小時；快速冷卻至40°C后，取上述 馴化好的液體種子混合，進行接種，上述馴化好的液體種子與上述糖蜜的比例為1 1，其 中在上述馴化好的液體種子中各菌組分重量比例為植物乳桿菌為15 35%，巨大芽孢桿 菌為5 25%，釀酒酵母菌為10 30%，白色鏈霉菌為15 30%，沼澤紅假單胞菌10 25% ；30 35°C，72 120個小時發酵，待PH值降至3. 5 4. 0時即可。
全文摘要
一種用于抗重茬障礙的復合微生物制劑，所述復合微生物制劑包括植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、釀酒酵母菌、白色鏈霉菌、沼澤紅假單胞菌，并由上述菌組分通過厭氧和好氧相結合的發酵工藝復合培養而成，其中所述各菌組分的重量百分比為植物乳桿菌為15～35％；巨大芽孢桿菌為5～25％；釀酒酵母菌為10～30％；白色鏈霉菌為15～30％；沼澤紅假單胞菌10～25％。
文檔編號C12R1/11GK101974428SQ20101029766
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月30日 優先權日2010年9月30日
發明者倪永珍, 李維炯, 李翎 申請人:北京意科樂生態科技有限公司