專利名稱：用于生活污水高效處理菌株的篩選方法
技術領域：
本發明涉及一種處理菌株的方法，尤其是篩選用于生活污水處理的菌株的方法。
背景技術：
隨著生活污水處理技術的發展與進步，固定化微生物技術在生活污水處理中已得到廣泛應用，現已成為生活污水處理技術中的主流。該技術所用菌株的性能對其處理污水的能力和效果有作巨大的影響，然而，目前污水處理菌株的篩選多是采用LB培養基或在其基礎上進行改進的培養基進行篩選。這些培養基均外加了豐富的營養物質，用這些培養基在進行篩選時，一些對生活污水處理不具優勢的菌株可能成為優勢菌而大量、快速地生長繁殖，使很多生活污水處理性能優異的菌株被抑制或被淹沒，從而流失以至篩選失敗。

發明內容
本發明的目的是為了解決目前生活污水處理工程菌的篩選方法會使很多對生活污水處理能力優異的菌株流失的問題，而提供的一種生活污水處理工程菌菌株的篩選方法，直接采用生活污水配制培養基及從生活污水排放地取樣分離篩選優勢菌種。該方法按如下步驟進行1)篩選用固體培養基的制備在需處理的生活污水中加15_20g瓊脂，經滅菌處理后分置于培養皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養基平板；2)原混合菌的采集與稀釋取生活污水的污泥，用滅菌水按1 10的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密閉后振蕩5-15min，澄清后取上清液進行梯度稀釋制得不同稀釋度的混合菌液；3)混合菌液的涂布從各個稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養箱中，于30°C培養 3-7 天；4)菌株的分離與純化挑選出菌落數為30-150個的平板，把其中不同性狀的菌逐一取出，轉移到固體培養基平板上，放入生化培養箱中于30°C培養，使其在培養皿上最后一區形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重復挑選，即可得到分離純化后的菌株；5)菌株降解活性的鑒定用接種環將分離純化后的菌接種到經滅菌處理后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養箱中于30°C、120r/min下培養Mh，定時取樣測定培養液的化學耗氧量(COD)，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。進一步的，所述滅菌處理為在115_130°C下滅菌10-30min。其中步驟2中澄清后取上清液進行梯度稀釋，優選每次稀釋10倍，制得稀釋倍數為IO4-IO8的原混合菌液；步驟3中將每個稀釋度的混合菌液進行三個重復。另外，更具體的情況為，步驟4中使用接種環把菌取出，并采用分區劃線法轉移到固體培養基平板上。本發明采用的更具體的步驟如下1、固體培養基的制備取所需處理的生活污水IOOOmL,加15_20g瓊脂，經 115-130°C滅菌10-30min，然后分置于培養皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養基平板。2、原混合菌的采集與稀釋從生活污水的排水溝取污泥，然后用滅菌水按1 10 的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密閉后振蕩5-15min，澄清后取上清液進行梯度稀釋制得不同稀釋度的混合菌液。3、混合菌液的涂布從各個稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養箱中于30°C培養3-7天)每個稀釋度三個重復)。4、菌株的分離與純化挑選出菌落數為30-150個的平板，并用接種環把其中不同性狀的菌逐一取出并用分區劃線法轉移到固體培養基平板上，放入生化培養箱中于30°C培養，使其在培養皿上最后一區形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法再挑一次，反復2-3次，即可得到分離純化后的菌株。5、菌株降解活性的鑒定用接種環將分離純化獲得的菌接種到經115_130°C滅菌 10-30min后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養箱中于30°C、120r/min下培養Mh，每 4h取樣測定培養液的C0D，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。本發明通過直接以生活污水加瓊脂為固體培養基進行篩選，在平板上生長的均為能分解生活污水中污染物的菌株，與現有方法相比，具有簡便，獲得的優良菌株多，分離效果好的特點，避免了對生活污水處理能力優異的菌株流失的問題。
具體實施例方式下面將描述本發明的實施例，更進一步了解本發明。實施例1 從城市生活污水排污管取生活污水，分出IOOOmL于2000mL燒瓶中，加18g瓊脂， 加熱使瓊脂溶解，然后放入IOOOmL三角燒瓶中，蓋好后經121°C滅菌20min，然后分置于培養皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養基平板。從十個地段城市生活污水排污溝各取污泥約100g，混合均勻后取5g左右放入250mL三角瓶中，加入IOOmL無菌水并放入Φ 4玻璃珠約10顆，密閉后振蕩lOmin，澄清后取上清液進行梯度稀釋，每次稀釋10倍，制得稀釋倍數為IO4-IO8的原混合菌液。從各個稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養箱中于30°C培養(每個稀釋度三個重復)。7天后，稀釋倍數為IO6倍的平板上落數符合菌落數在30-150的標準，把稀釋倍數為IO6倍的三個平板選出，用接種環把其中不同性狀的菌逐一取出并用分區劃線法轉移到固體培養基平板上，然后放入生化培養箱中于30°C 培養5天，然后把培養皿上最后一區形成的孤立菌落按照上述方法再挑一次，反復2-3次， 即可得到分離純化后的菌株。把生活污水放入容器中蓋好后放入高壓滅菌鍋內經121°C滅菌20min，然后分裝在250mL的三角瓶中，每個瓶加入IOOmL,用接種環將分離純化獲得的菌接種到其中(每個菌株接三瓶，每批用三個不接種的為空白對照)，放入振蕩培養箱中于 300C、120r/min下培養Mh，每4h取樣測定培養液的C0D，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。實施例2 從某旅游區賓館污水排污溝取生活污水，分出IOOOmL于2000mL燒瓶中，加20g瓊脂，加熱使瓊脂溶解，然后放入IOOOmL三角燒瓶中，蓋好后經115°C滅菌30min，然后分置于培養皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養基平板。從這個賓館的污水溝5個不同段各取污泥約100g，混合均勻后取大約5g放入250mL三角瓶中，加入IOOmL無菌水并放入Φ 4玻璃珠約15顆，密閉后振蕩lOmin，澄清后取上清液進行梯度稀釋，每次稀釋10倍，制得稀釋倍數為IO4-IO8的原混合菌液。從各個稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養箱中于30°C培養(每個稀釋度三個重復)。7天后，稀釋倍數為IO5倍的平板上落數符合菌落數在30-150的標準，把稀釋倍數為IO5倍的三個平板選出，用接種環把其中不同性狀的菌逐一取出并用分區劃線法轉移到固體培養基平板上，然后放入生化培養箱中于30°C培養6天，使其在培養皿上最后一區形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法再挑一次，反復2-3次，即可得到分離純化后的菌株。把賓館污水放入容器中蓋好后放入高壓滅菌鍋內經115°C滅菌30min，然后分裝在250mL的三角瓶中，每個瓶加入IOOmL,用接種環將分離純化獲得的菌接種到其中(每個菌株接三瓶，每批用三個不接種的為空白對照)， 放入振蕩培養箱中于30°C、120r/min下培養Mh，每4h取樣測定培養液的C0D，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。
權利要求
1.一種用于生活污水高效處理菌株的篩選方法，主要包括如下步驟1)篩選用固體培養基的制備在需處理的生活污水中加15-20g瓊脂，經滅菌處理后分置于培養皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養基平板；2)原混合菌的采集與稀釋取生活污水的污泥，用滅菌水按1 10的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密閉后振蕩5-15min，澄清后取上清液進行梯度稀釋制得不同稀釋度的混合菌液；3)混合菌液的涂布從各個稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養箱中，于30°C培養3-7 天；4)菌株的分離與純化挑選出菌落數為30-150個的平板，把其中不同性狀的菌逐一取出，轉移到固體培養基平板上，放入生化培養箱中于30°C培養，使其在培養皿上最后一區形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重復挑選，即可得到分離純化后的菌株；5)菌株降解活性的鑒定用接種環將分離純化后的菌接種到經滅菌處理后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養箱中于30°C、120r/min下培養Mh，定時取樣測定培養液的C0D，選出降解速率快、COD 去除率高的菌株。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述滅菌處理為在115-130°C下滅菌 10_30mino
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟3中每個稀釋度的混合菌液進行三個重復。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟4中使用接種環把菌取出，并采用分區劃線法轉移到固體培養基平板上。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟4中孤立的菌落重復挑選2-3次。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟2中澄清后取上清液進行梯度稀釋， 每次稀釋10倍，制得稀釋倍數為IO4-IO8的原混合菌液。
全文摘要
本發明涉及一種分離篩選用于處理生活污水的高效菌株的方法，首先取生活污水制成固體培養基，然后取生活污水的污泥，經梯度稀釋后涂布在固體培養基上，待表面水分稍干后倒置放入生化培養箱中培養，在形成的菌落中挑取單菌落到固體培養基平板上劃線純化得到純菌，最后將純菌菌苔接種于經滅菌后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養箱中培養，定時取樣測定培養液的COD，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。該法直接以生活污水加瓊脂為固體培養基進行篩選，在平板上生長的均為能分解生活污水中污染物的菌株，避免了對生活污水處理能力優異的菌株流失的問題。
文檔編號C12N1/02GK102443541SQ20111014725
公開日2012年5月9日 申請日期2011年6月2日 優先權日2011年6月2日
發明者彭清靜 申請人:吉首大學