專利名稱：16個基因座快速復合pcr擴增熒光檢測試劑盒及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測人類基因組DNA中多個STR基因座的試劑盒，具體涉及一種檢測15個STR基因座和1個性別鑒定基因座的快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，屬于生物檢測技術領域。
背景技術：
短串聯重復序列基因座(STR)是目前普遍應用的遺傳標記。90年代初STR基因座多態性的發現，特別是由于STR基因座的片段小、容易擴增，適宜于檢驗微量和降解檢材，而且各基因座的擴增條件相似而能夠復合擴增，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優點。尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優越性，因此法醫學界以及一些大的公司均投入大量的資金對其進行了開發性的研究。90年代中后期以美國 ABI公司為代表的研發商建立起了熒光復合擴增體系。目前最具代表性的是ABI (Applied Biosystems, USA)公司的 Identif iler 和 Promega (USA)公司的 PowerPlex-16 熒光檢測試劑盒。法醫DNA分析就是利用DNA分型技術，確定現場法醫物證的DNA基因型，并應用同樣技術確定犯罪嫌疑人的DNA基因型，通過兩者的比對，從而認定犯罪事實或排除犯罪嫌疑。隨著法醫DNA分型技術的發展，目前已經能對類似血痕、精斑、唾液斑、毛發、骨骼等進行DNA分型，達到認定水平，成為刑事技術中科技含量最高、實用性最強的方法之一，檢驗結果得到了司法機關特別是審判機關的普遍采信，DNA分型技術成為刑事偵查和法庭審判的最重要依據之一。目前的STR分型技術，往往包括樣本檢材的DNA提取、PCR擴增和分型檢測三項主要操作步驟，獲得一個樣本的最終分型結果往往需要8個小時以上。縮短樣本DNA檢驗時間，在實際檢案中將有利于快速鎖定犯罪嫌疑人，或排除無辜人員，在案件偵破過程中具有重要意義，已經成為科研攻關的一個新的重點，是法庭科學DNA分型技術發展的必然方向。
發明內容
本發明實施例的目的是針對上述現有技術的缺陷，提供了一種能夠縮短獲得樣本最終分型結果時間的16基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒。為了實現上述目，采取的技術方案
一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括PCR 緩沖液、MgCl2, dNTPs和牛血清蛋白的混合物，熱啟動快速Taq酶，16對引物混合物以及超純水；
其中16對引物混合物為
權利要求
1. 一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括 PCR緩沖液、MgCl2, dNTPs和牛血清蛋白的混合物，熱啟動快速Taq酶，16對引物混合物以及超純水；其中16對引物混合物為
2.根據權利要求1所述的一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，其特征在于所述的16個基因座分為4組，并其對應的引物對分別用4種不同的顏色的熒光染料進行標記，所述的四種熒光染料為藍色熒光染料6-FAM、綠色熒光染料HEX;黃色熒光染料 TAMRA、紅色熒光染料標記ROX ；內標選用橙色熒光SIZ。
3.根據權利要求2所述的一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，其特征在于所述的16個基因座分為4組，其對應的引物分別用4中不同的顏色的熒光染料進行標記，分組方式為Amelogenin, D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539 和 D6S1043 為一組， 采用藍色熒光染料標記，熒光標記物為6-FAM ；TP0X、TH01、D2S1338和CSFlPO為一組，采用綠色熒光染料標記，熒光標記物為HEX ；vWA、D5S818和FGA為一組，采用黃色熒光染料標記， 熒光標記物為TAMRA ；D8S1179、D21S11和D18S51為一組，采用紅色熒光染料標記，熒光標記物為ROX ；內標選用橙色熒光標記，熒光標記物為SIZ。
4.根據權利要求1-3任一項所述的一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，其特征在于使用所述試劑盒的PCR擴增體系的pH值為8. 0-9.0，鎂離子濃度為 1. 5-3. 5mM，4種dNTP的終濃度各為200-300 μ M，牛血清蛋白在所述PCR擴增體系中的終濃度為0. 1-lmg/ml,以及熱啟動快速Taq酶的用量為0. 1-0. 4U/ μ L, 16對引物混合物中的單對引物終濃度如下表所示
5. 一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒的應用，其特征在于其用于DNA 分型。
全文摘要
本發明公開了一種檢測人類基因組DNA16個基因座的快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，該試劑盒包括擴增前試劑和擴增后試劑；所述擴增前試劑包括PCR緩沖液、MgCl2、dNTPs和牛血清蛋白的反應混合物，熱啟動快速Taq酶，16對引物混合物以及超純水；所述擴增后試劑包括用于基因分型的等位基因混合物和內標。本發明只需對人基因組DNA樣本進行約40-50min的核酸擴增，即可進行STR分型檢測，單管擴增檢測可以同時獲得15個STR基因座和1個性別鑒定基因座的分型結果，大大縮短了獲得樣本最終分型結果的時間。
文檔編號C12Q1/68GK102424834SQ20111024373
公開日2012年4月25日 申請日期2011年8月24日 優先權日2010年9月10日
發明者倪崢飛, 周懷谷, 夏子芳, 杜蔚安, 楊輝, 鄭衛國, 陶莉 申請人:上海市公安局物證鑒定中心, 無錫中德美聯生物技術有限公司