專利名稱：一種用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的方法
技術領域：
本發明涉及一種固定化磷脂酶的方法。
背景技術：
磷脂酶Al (Lecitase Ultra)是一種羧酸酯水解酶，專一水解磷脂Sn-Ι位脂肪酸， 生成溶血磷脂和脂肪酸，在磷脂改性、油脂精煉等方面有廣泛應用。但是，游離磷脂酶Al價格昂貴，不易回收，催化水解時條件苛刻.而固定化磷脂酶Al具以下優點①容易從產品中分離；②在反應器位置固定容易；③穩定性高，可長時間連續操作；④保留活性高，并且可能獲得超高活性.所謂固定化酶就是利用物理或化學方法處理，將游離酶限定或束縛于一定范圍之內使其與整體流體分開，但仍能發揮催化作用的酶制劑。現固定化酶在化學、生物學及生物工程、醫學、生命科學等領域得到迅速發展。醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜具有一定的吸附性、化學穩定性好、疏水性、機械性能優異等優點，根據復合膜的吸附特性固定化磷脂酶，提高了酶在反應體系中的活性和穩定性，調節和控制酶的活性與選擇性，從而有利于酶的回收和產品的生產。

發明內容
本發明是針對單膜法固定化磷脂酶效果不理想的問題，而提出的用醋酸纖維素/ 聚四氟乙烯復合膜來進行固定化磷脂酶的方法。用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的方法通過以下步驟實現一、復合膜的制備。二、磷脂酶的固定化。三、酶活力的測定。四、固定化條件的優化。五、通過固定化酶膜的SEM圖像進一步解釋利用醋酸纖維素/ 聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的優勢。利用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶中，酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜具有一定的吸附性、化學穩定性好、疏水性、機械性能優異等優點，根據復合膜的吸附特性固定化脂肪酶，提高了酶在反應體系中的活性和穩定性，調節和控制酶的活性與選擇性，從而有利于酶的回收，最終得到的固定化酶活為4U/cm2，明顯高于文獻中單膜法固定化脂肪酶的活力。
具體實施例方式具體實施方式
一用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的方法通過以下步驟實現一、復合膜的制備將15g醋酸纖維素60°C下溶于85g 二甲基甲酰胺中得到鑄膜液。將聚四氟乙烯膜先用0. lmol/L的NaOH溶液和0. lmol/L的HCl溶液清洗，然后用去離子水清洗，真空干燥后，平鋪在潔凈的玻璃板上。控制厚度，將醋酸纖維素鑄膜液用特制的刮刀涂在聚四氟乙烯膜表面，在室溫下揮發適當的時間完成干相轉換后，浸入去離子水完成濕相轉換。1 后用去離子水清洗，自然干燥待用；二、磷脂酶的固定化取若干份Icm2 的醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜于三角瓶中，分別加入一定量的酶液和pH = 5. 0的磷酸氫二鈉/檸檬酸緩沖液，攪拌吸附一定時間。反應結束后取出酶膜，用去離子水沖洗，放于干燥處待其風干后測定酶活。三、酶活力的測定，四、固定化條件的優化分別在酶液濃度 0. 02g/mL 0. 07g/mL,吸附時間 Ih 6h，溫度 45 70°C，攪拌速度 80r/min ^Or/min 的條件下，通過測定固定化酶活力得到最佳的固定化條件。五、采用響應面法進行分析討論最終確定最佳固定化條件。六、通過固定化酶膜的SEM圖像進一步解釋利用醋酸纖維素/ 聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的優勢。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 04g/mL 0. 06g/mL的條件下進行磷脂酶的吸附固定。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 02g/mL 0. 07g/mL的條件下，吸附固定池 4h。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 02g/mL 0. 07g/mL,吸附時間1 Mi的條件下，溫度為陽 65°C。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 02g/mL 0. 07g/mL,吸附時間1 他，溫度 45 70°C的條件下，攪拌速度160r/min MOr/min。其它步驟與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一的不同點在于步驟五中采用響應面分析法進一步分析最佳固定化條件。其它步驟與具體實施方式
一相同。
權利要求
1.一種用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的方法，其特征在于用復合膜來固定化磷脂酶的方法通過以下步驟實現一、復合膜的制備將15g醋酸纖維素60°C下溶于8 二甲基甲酰胺中得到鑄膜液。將聚四氟乙烯膜先用0. lmol/L的NaOH溶液和0. Imol/ L的HCl溶液清洗，然后用去離子水清洗，真空干燥后，平鋪在潔凈的玻璃板上。控制厚度， 將醋酸纖維素鑄膜液用特制的刮刀涂在聚四氟乙烯膜表面，在室溫下揮發適當的時間完成干相轉換后，浸入去離子水完成濕相轉換。1 后用去離子水清洗，自然干燥待用；二、磷脂酶的固定化取若干份Icm2的醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜于三角瓶中，分別加入一定量的酶液和PH = 5.0的磷酸氫二鈉/檸檬酸緩沖液，攪拌吸附一定時間。反應結束后取出酶膜，用去離子水沖洗，放于干燥處待其風干后測定酶活。三、酶活力的測定。四、固定化條件的優化分別在酶液濃度0. 02g/mL 0. 07g/mL,吸附時間Ih 他，溫度45 70°C，攪拌速度80r/min ^Or/min的條件下，通過測定固定化酶活力得到最佳的固定化條件。五、 采用響應面法進行分析討論最終確定最佳固定化條件。六、通過固定化酶膜的SEM圖像進一步解釋利用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的優勢。
2.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 04g/mL 0. 06g/mL的條件下進行磷脂酶的吸附固定。
3.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 02g/mL 0. 07g/mL的條件下，吸附固定 4h。
4.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 02g/mL 0. 07g/mL，吸附時間1 6h的條件下，溫度為55 65°C。
5.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0. 02g/mL 0. 07g/mL，吸附時間1 6h，溫度45 70°C的條件下，攪拌速度160r/min MOr/min。
6.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟五中采用響應面分析法進一步分析最佳固定化條件。
全文摘要
本發明提供一種以醋酸纖維素和聚四氟乙烯膜為材料制備了醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜，采用物理吸附固定化方法，用該復合膜來固定化磷脂酶。研究了酶液濃度、吸附時間、溫度和攪拌速度等不同固定化條件對脂肪酶固定化效率和催化效果的影響，并采用響應面的分析方法。通過固定化酶膜的SEM圖像進一步解釋利用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的優勢。根據本發明中復合膜的吸附特性固定化磷脂酶，提高了酶在反應體系中的活性和穩定性，調節和控制酶的活性與選擇性，從而有利于酶的回收和產品的生產，最終得到的固定化酶活為4U/cm2，明顯高于文獻中單膜法固定化磷脂酶的活力。
文檔編號C12N11/08GK102304504SQ201110290429
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月20日 優先權日2011年9月20日
發明者于殿宇, 劉晶, 周曉丹, 常云鶴, 張佳寧, 時敏, 李志平, 李越, 江連洲, 王立琦, 王雪, 胡立志, 陳曉慧 申請人:東北農業大學