專利名稱：一種控制水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育多效基因及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物基因工程領域。具體的說，涉及一種利用圖位克隆技術克隆水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育的多效基因々iF7 (Dwarf and Deformed Flower 1)，并利用轉基因互補實驗驗證了該基因的功能。同時，還涉及利用該基因調控水稻營養(yǎng)生長和生殖發(fā)育，即通過利用遺傳工程的方法調節(jié)基因的表達，從而控制水稻的株型和育性，創(chuàng)造水稻育種新種質。因此，本發(fā)明對遺傳改良水稻具有很好的應用前景。
背景技術：
植物的生長發(fā)育是一個極其復雜的過程。通常認為，生長是植物體積的增大，而發(fā)育則是在整個生活史中，植物體的構造和機能從簡單到復雜的變化過程。營養(yǎng)生長是生殖生長的基礎，如果營養(yǎng)生長不良，直接影響生殖生長或使生殖器官發(fā)育不良。因此，合理調節(jié)植物的營養(yǎng)生長與生殖發(fā)育在生產上具有重要的意義。花是植物的最顯著特征，花的形成是植物生活史上的一個重大轉折點，而且花器官的發(fā)育結果直接影響并決定農作物的產量和品質。因此，開展植物花發(fā)育研究具有重要意義。植物花器官的發(fā)育主要由花器官特征基因決定。利用大量花發(fā)育的同源異型突變體， 植物花器官發(fā)育分子遺傳機理的研究在模式雙子葉植物中取得重大突破，先后提出了花器官發(fā)育的“ABC”、“AB⑶”、“AB⑶E”以及“四因子”模型。現已明確，這些功能基因絕大多數屬于MADS-box轉錄因子基因。植物花器官發(fā)育是一個復雜的過程，是由多種類型基因共同參與調控的復雜網絡。除花器官發(fā)育特征基因外，其它花器官發(fā)育調節(jié)基因在花器官的形態(tài)建成中也發(fā)揮關鍵性的作用。近年來，越來越多的花器官發(fā)育調節(jié)基因相繼被克隆。其中，F-box基因在植物中數量多、且分布廣泛。它們通過泛素化蛋白酶體途徑(ubiquitin proteasome pathway, UPP)在細胞周期調控、轉錄調控、細胞凋亡和信號轉導等過程中發(fā)揮了重要功能。目前已從植物中鑒定出大量的F-box蛋白，它們在植物激素調控、營養(yǎng)生長和花器官發(fā)育等多種生物學過程中發(fā)揮著重要作用。其中，擬南芥的^/ {Unusual Floral Organs)是植物中鑒定出的第一個F-box基因(Levin et al.，1995 ；Ingram et al.，1997)， /ο 突變體的花發(fā)育明顯異常(Lee et al.，1997)，其生物學功能可能是“B”類花器官特征基因的正調控因子。此外，呢喃屆擬南芥的和mM突變體表型也出現明顯變異，且“B”類花器官特征基因的功能增強(Ni et al., 2004)。有趣的是，植物中部分F-box基因的生物學功能表現出多效性，這些基因同時參與植物營養(yǎng)生長與生殖發(fā)育的調控。如水稻的仍基因同時影響水稻的營養(yǎng)生長和生殖發(fā)育在營養(yǎng)生長期，apol突變體的出葉速度快，葉片數增多；在生殖生長期，apol突變體的穗明顯短小、一級枝梗數目和小穗數目變少，而且即07小穗發(fā)育明顯異常(雄蕊轉化為漿片、心皮畸形伸長、穎片心皮化)(Gonza et al. , 2007)。擬南芥M基因的表型功能與水稻A^V類似，它在調控擬南芥生長與發(fā)育過程中也起著重要作用。M基因的功能缺失導致植株過量生長，而花瓣底部邊緣出現融合；相反，M基因過量表達植株明顯矮小，而花瓣底部邊緣提前分裂(Lee et al.，1997)。而擬南芥的JiCFZi基因的點突變可導致花器官數目減少、且4個葉輪發(fā)育明顯缺陷。總之，F-box類基因廣泛參與了植物生長發(fā)育過程的調節(jié)，在均衡植物的營養(yǎng)生長與生殖發(fā)育中起關鍵性作用，對其開展深入研究具有重要的意義。本發(fā)明利用一個植株矮化、花器官明顯變異的突變體 / //7 {dwarf and deformed flower乃，通過圖位克隆技術克隆了水稻的々iF7基因，該基因編碼一個F-box蛋白。從 ddfl的花器官表型推斷，DDFl基因在調控花器官發(fā)育方面的功能與 /州相似，可能是“B” 類基因的正調控因子，該基因的突變導致了水稻的雄蕊的發(fā)育異常。同時，由于^/7的植株矮小、葉片短細，推測該基因可能還參與了植物生長激素的信號傳導等途徑。總之，DDFl 是維持水稻正常的生長發(fā)育、調節(jié)植株的形態(tài)建成與花器官發(fā)育的重要多效基因。目前，已在水稻中發(fā)現687個F-box蛋白基因，推測其中至少有100多個與水稻生殖發(fā)育有關(Jain et al., 2007)，但絕大多數基因的生物學功能未知。目前，水稻中尚未見有類似^/7突變體的報道。利用ddfl突變體開展深入研究， 揭示該基因在決定植物的形態(tài)建成與器官發(fā)育方面的多重作用，將具有重要理論意義。同時，本發(fā)明也為利用遺傳工程手段調節(jié)水稻等植物的營養(yǎng)生長與生殖發(fā)育之間的矛盾、創(chuàng)造植物新種質提供了新的途徑。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種控制水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育的多效基因及其應用，該基因失活造成水稻植株明顯矮化，花器官中雄蕊發(fā)育異常而不育。因此通過調節(jié)該基因在水稻不同部位或器官中的表達，利用該基因的轉基因植株改良水稻的株型和育性，從而培育出理想株型(和)或雄性不育系新種質，可作為水稻育種的新材料。本發(fā)明的控制水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育的多效基因々iF7基因具有如％(1 ID No. 1所示的DNA序列，也包括與kq ID No. 1所示的DNA序列至少有90%同源性的基因序列。本發(fā)明中的ID No. 2所編碼的蛋白質是一個F-box蛋白，其中包括進行一個或幾個氨基酸替換、插入或缺失所獲得的功能類似物。另外，也包括在^^ ID No. 1中添加、取代、插入或缺失一個或多個核苷酸而生成的突變體、等位基因或衍生物，具有相同功能的序列也能達到本發(fā)明的目的。本發(fā)明克隆的水稻々iF7基因的單堿基突變體^/7表現為植株明顯矮小、小穗的雄蕊部分或全部退化、基本不育(見實施例1)。將正常功能的基因轉化該突變體后，植株恢復正常表型(見實施例2)。本發(fā)明還提供一種用々iF7基因進行高效的植物轉化的方法，具體地說，本發(fā)明提供Tkq ID No. 1所示的序列基因或該基因類似的部分功能片段的載體，如圖4所示的 PCAMBIA1300- DDFl (見實施例2)。該載體還有一種含有以上表達載體的宿主細胞。該宿主細胞包括大腸桿菌、農桿菌和植物細胞。本發(fā)明利用反義RNA技術抑制水稻內源々iF7基因的表達，造成水稻株型不同程度矮化，同時小穗的雄蕊基本不育，可以培育水稻理想株型和(或)水稻不育系材料(見實施例 3)。具體地說，就是將々iF7基因與其它調控元件如組成型啟動子(CaMV35S啟動子)或器官特異性啟動子融合構建基因抑制表達載體，通過轉基因技術(如反義RNA或RNAi)人為控制水稻的株型和育性，創(chuàng)造新的水稻新種質，用于選育水稻新品種。實現本發(fā)明的具體技術步驟如下一.水稻ddfl突變體的分離和遺傳分析
本發(fā)明從水稻(秈稻)育種材料中獲得了一種營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育均明顯異常的突變體^/7。在營養(yǎng)生長階段，該突變體表現為營養(yǎng)器官均明顯細小，節(jié)間和葉片的細胞體積變小、數目減少；在生殖發(fā)育階段，突變體的一、二次枝梗數和小穗數明顯減少，穗長相應變短，小穗的內外稃不能完全閉合，雄蕊部分或完全轉化為雌蕊，幾乎所有小穗不能正常發(fā)育成種子。通過突變雜合體植株自交及與野生型植株正反交實驗，證明^/7是一個符合單基因控制的遺傳規(guī)律、如圖1所示的隱性突變體。二、圖位克隆控制水稻々iF7基因 1. DDFl的初步定位
為了分離々iF7基因，本發(fā)明采用圖位克隆的方法，首先創(chuàng)建了一個F2定位群體，由 ddfl突變雜合體(基因型為/ ^^/"/)為母本，選用DZ60為父本雜交獲得的F2中的ddfl 突變體組成。利用水稻RM系列微衛(wèi)星標記對基因進行初步定位。定位結果如圖2所示,DDFl基因初步定位在第6染色體短臂上的RM588和RM587之間兩個標記之間。2. DDFl基因的精細定位
通過對RM588和RM587兩個標記之間的BAC/PAC序列分析，開發(fā)出新的水稻SSR微衛(wèi)星標記和InDel標記，將々iF7基因精細定位于如圖3所示的BAC克隆AP003708上的DF7 和DF9之間約45 1Λ的范圍內，通過分析此區(qū)段開放閱讀框(ORF)推測侯選基因。進一步通過比對突變體與野生型的基因組序列，確定候選基因。3.々iF7基因的鑒定和功能分析
構建了一個如圖4所示的互補實驗載體。本發(fā)明通過轉基因技術將互補載體轉入^/7 突變體后獲得了如圖5所示的表型恢復正常的轉基因水稻，證明了本發(fā)明正確克隆了々iF7 基因；氨基酸序列分析表明，/ ^編碼一個F-box蛋白。三、抑制水稻內源々iF7的表達，培育理想株型的不育系材料
利用反義RNA技術抑制水稻內源々iF7基因的表達，造成水稻株型不同程度矮化，同時小穗雄蕊產生的花粉粒基本不育、部分雄蕊退化，可以培育出理想株型的水稻不育系材料 (見實施例3)
水稻是我國乃至世界的主要糧食作物。水稻生產在我國國民經濟中占有舉足輕重的地位，是我國第一大栽培作物，約占我國糧食總產量的40%。目前主要是利用雜交水稻的雜種優(yōu)勢來培育高產水稻品種。而株型改良對提高水稻產量具有重要的作用，并一直是品種選育的重要指標。從我國水稻產量的兩次突破來看，矮稈品種比高稈品種增產、雜交稻比矮稈品種增產的主要原因是在株型改良中不斷取得進步的結果。株型改良的第一階段是矮化育種，第二階段是理想株型育種，它的發(fā)展方向是形態(tài)與機能兼顧，理想株型與優(yōu)勢利用相結合。所以，理想株型的研究越來越受到育種家的重視和關心。基因工程技術使得應用々iF7 基因培養(yǎng)理想株型的水稻成為可能。本發(fā)明獲得的水稻株型矮小、雄蕊退化而不育的突變體^/7，是單基因隱性突變， 符合孟得爾遺傳規(guī)律。本發(fā)明通過圖位克隆技術獲得了々iF7基因，并通過功能互補實驗鑒定了該基因的功能。氨基酸序列分析表明，該基因編碼一個F-box蛋白，同時參與了水稻營養(yǎng)生長與生殖發(fā)育的調控，其生物學功能表現出多效性。因此，可以利用基因工程技術有目的地調節(jié)它在水稻中的表達，進而可培育出理想株型的水稻不育系新種質，從而可提高水稻的產量、提高雜交制種質量、降低生產成本。因此，該基因具有非常重要的應用價值和廣闊的應用前景。


圖1水稻野生型與對應突變體W/7的表型。圖IA 野生型與對應突變體ddfl的植株表型。圖IB 野生型與對應突變體 / //7的小穗表型。圖IC -.ddfl突變體的小穗表型(張開內、外稃片)。圖ID ,ddfl突變體小穗的表型(去除內、外稃片)。圖2 ,DDFl基因在水稻第6染色體上的初步定位圖。圖3 ,DDFl基因精細定位及候選基因確定圖。圖4 互補實驗載體pCAMBIA1300-々iF7圖譜。圖5 野生型、 / //7突變體與轉基因水稻Ttl代互補株系的表型圖。圖5Α 野生型(wild)、W/7突變體與一個Ttl代互補株系(line 1)的表型圖。圖5B 野生型(wild)、ddfl突變體與一個Ttl代互補株系(line 1)的一次枝梗的表型圖。圖5C 野生型小穗的形態(tài)結構。
圖5D ,ddfl突變體小穗的形態(tài)結構。圖5E =Ttl代互補株系的小穗形態(tài)結構。圖6 反義表達載體pTCK303 -.DDFl-cMk圖譜。圖7 野生型(wild)與4個轉反義表達載體獲得的Ttl株系(line 1 line 4)表達水平對比分析圖。圖8 野生型與轉反義表達載體的Ttl代轉基因植株的表型圖。圖8A 野生型與4個轉基因的Ttl代株系表型圖。圖8B 野生型(左)與轉反義表達載體的Ttl代植株(右)的一次枝梗形態(tài)圖。圖8C 野生型小穗的花器官(去除內、外稃片)。圖8D 轉反義表達載體的Ttl代植株的小穗外形。圖8E和圖8F 轉反義表達載體的Ttl代植株小穗的花器官(去除內、外稃片)。圖8G 野生型植株產生的正常發(fā)育的花粉粒。圖8H 轉反義表達載體的Ttl代植株產生的不育花粉粒。
具體實施例方式實施例1 水稻DDFl基因的圖位克隆 1.水稻材料
水稻(ftrza sativa L.)突變體W/7，原始野生型親本為秈型水稻。該突變體為本發(fā)明者從秈型水稻育種中間材料中獲得。2.分析和定位群體
突變雜合體0 ^^/"/ )與野生型品種DZ60進行雜交，F1代自交，得到F2群體，在水稻分蘗盛期選出3632個^/7突變表型的植株作為定位群體，每株取1克左右的葉片，用來提取總DNA。
3.利用水稻微衛(wèi)星標記(RM與SSR)和InDel標記定位々iF7基因
采用水稻微量法快速抽提水稻的總DNA。取大約0. 3克水稻葉片，放入1. 5ml離心管中經液氮快速冷凍，用小塑料研棒研成粉末后提取DNA，獲得的DNA溶于100 ul超純水中。 每一個20 ul的反應體系中加入1 ul DNA樣品。IDDFl基因的初步定位實驗中，利用DNA池的定位方法，選175個F2群體中的突變體個體用水稻RM系列微衛(wèi)星進行分析。根據公布的水稻SSR遺傳圖譜，按照一定的遺傳距離，均勻選取分布于各條染色體上的RM引物進行PCR擴增，然后在6%的非變性聚丙烯酰胺凝膠上分離和硝酸銀染色，檢測PCR產物的多態(tài)性，將々iF7基因初步定位在水稻第6染色體短臂上的RM588和RM587兩個標記之間。在精細定位々iF7基因時，對F2群體中的3632個突變體個體進行SSR標記和InDel 標記的連鎖分析。根據分子標記RM588和RM587之間的BAC序列分析，利用已公布的水稻基因組序列，設計了 20對SSR引物和6對hDel引物用于精細定位々iF7基因，其中有6 對SSR引物和1對hDel引物(引物序列見表1)在兩個親本間有多態(tài)。用這7個有多態(tài)的標記對F2群體中的3632個突變體個體進行了連鎖分析。表1用于精細定位DDFl基因的引物序列
根據精細定位的結果，々々Ζ7/基因位于BAC克隆ΑΡ003708上的DF7和DF9之間約45 kb 的范圍內。根據TIGR (http://rice, plantbiology. msu. edu/)網站上提供的基因注釋信急、，DDFl基因所在的451Λ區(qū)間內共有8個基因，包括如圖3所示的2個F_box蛋白基因(分別命名為F-boxl和F-box2)、1個轉座子基因和5個假設蛋白基因(分別命名為H1—H5)。 基因組序列分析結果表明，該區(qū)域內的一個F-box基因(F-box 2)發(fā)生了單堿基(A — Τ)突變，導致其中的Arg251變?yōu)門yr251，而其余7個基因的基因組序列在突變體和野生型中完全一致。因此，將該F-box基因作為DDFl的候選基因。
實施例2 互補實驗
1.構建互補實驗載體
根據秈稻明恢86基因的序列，利用pCAMBIA1300載體構建了如圖4積示DDFl侯選基因的互補實驗載體PCAMBIA1300- DDFl0載體構建的具體過程是在候選的F_box基因區(qū)和啟動子區(qū)設計一對帶有酶切位點的引物，利用高保真酶進行高保真PCR擴增并測序，挑選序列完全正確的克隆，經酶切和連接，構建成如圖4所示的表達載體，再將其轉入農桿菌中。該互補載體的DNA序列為8869bp，包括起始密碼前3740bp和終止密碼后609bp片段。 擴增互補實驗的DNA序列所用引物是(下劃線部分為酶切位點與保護堿基) 上游引物5，-AACTGCAGGCAACGCATGGGCATTCAGC-3‘ 下游引物5，-TCCCCCGGGACGGACCGGTCTCAAACTGAACACT-3‘
2.互補實驗
突變體愈傷組織的培養(yǎng)由于突變體不育，無法收獲種子，因此突變基因只能由雜合體種子0 ^/ 保存，其自交后代會分離出突變體。同時，由于^/7為秈稻品種，通過農桿菌介導進行遺傳轉化比較困難，所以互補試驗所用種子是以突變雜合體0 ^ ddfl) 與粳稻品種中花15雜交后再與中花15連續(xù)回交2代后，從中鑒定出雜合體植株上收獲的種子，按單粒培養(yǎng)成熟胚愈傷組織，以保證每一粒種子形成的愈傷互不混雜。突變體愈傷組織基因型的鑒定因 / //7的表型由單堿基突變引起，采用J^fNI內切酶進行酶切的方法可以將單粒種子培養(yǎng)的愈傷組織基因型加以區(qū)分。具體方法是，提取單粒種子的少量愈傷組織DNA，用1對引物擴增出1174bp的基因組序列；用J^rNI內切酶對PCR產物進行酶切后電泳。結果是野生型UJDF 1 DDFl)有857bp和317bp兩條帶，雜合基因型UJDFl ddfl)有1174bp、857bp和317bp三條帶，而突變體DNA不能被切開而只有 1174bp的條帶。PCR擴增所用的引物序列為上游引物5’ -TTATGCCATTGAATAACATGC-3’
下游引物5’ -GCCTATCATTAGTGTGTCAGGT-3，。遺傳轉化利用愈傷侵染法技術轉化^/7突變體的愈傷組織。挑選生長迅速、 顏色鮮黃、表面光滑、質地致密、直徑大小為2-3mm的胚性愈傷組織顆粒作轉化的受體。用含有雙元質粒載體的農桿菌EHA105菌株浸染水稻愈傷，置25°C條件下暗培養(yǎng)3天后，在含有30 mg/L Hygromycin的篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天，后再重復篩選培養(yǎng)一次；30天后，將篩選出的愈傷組織轉至含有50 mg/L Hygromycin的篩選培養(yǎng)基上繼續(xù)篩選一周。將繼續(xù)增生分裂的抗性愈傷轉入分化培養(yǎng)基上于光照條件下培養(yǎng)，一周后愈傷開始轉綠，三周后開始長出幼芽和根，當芽長至2-3cm時，移至1/2MS培養(yǎng)基上，待幼苗在生根培養(yǎng)基上生長 10天后，在水中煉苗三天，移至大田。對突變體胚性愈傷轉基因后所獲得的14個再生植株進行鑒定和連續(xù)的觀察，顯示轉基因水稻植株生長發(fā)育狀況如圖5所示，所有轉基因植株營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育正常，與野生型比較沒有明顯區(qū)別，說明該侯選的F-box蛋白基因 MMlDDFI。實施例3抑制水稻內源DDFl的表達培育理想株型和育性的新種質首先提取野生型水稻葉片總RNA，然后反轉錄成cDNA，以cDNA為模板PCR擴增出
的cDNA序列；PCR產物經回收、純化后連接到pGEMT-easy載體上；經測序確認完全正確后， 同時用Bamm和feci雙酶切pGEMT-easy載體及pTCK303載體，酶切產物分別回收后，利用 T4 DNA連接酶進行連接，將々iF7的cDNA反向連接到pTCK303載體W^iquitin啟動子的下游，構建成如圖6所示的表達載體，再將其轉入農桿菌中。T^DDFl的cDNA所用引物序列為(下劃線分別為酶切位點Sacl和漢3 H1)上游引物5’ -CGAGCTCGGAGAGAGATCCCCTCACC ACCATG-3’
下游引物5，-CGGGATCCCAGAATCATCATCAGCAGCAGCACG-3。利用愈傷侵染法技術將構建好的反義RNA載體轉化水稻品種中花種子誘導的愈傷組織中，獲得轉反義RNA的轉基因植株(轉化方法同實施例2的第二部分)。以轉化 PTCK303空載體分化出的植株作對照。通過本實施例申請人共獲得36個獨立的轉化苗。進一步用定量PCR 'Mf^DDFl在部分干擾植株中的表達水平與轉基因植株的表型之間的關系，結果如圖7和圖8所示，隨著干擾程度的增強，干擾植株的株高逐漸降低。而且，所有干擾植株的花器官均表現出發(fā)育異常，如圖8所示，雄蕊畸形，并產生干癟且數量減少的花粉，花粉完全不育。可見，利用反義 RNA抑制水稻內源々iF7的表達后，轉基因植株顯示出與^/7類似表型。因此，可以利用遺傳工程的方法，通過控制水稻內源i^H的表達，以培育理想株型和雄性不育系的新種質。以上所述僅為本發(fā)明的若干個具體實施方式
，應當指出，對與本領域的普通技術人員能從本發(fā)明公開的內容直接導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發(fā)明的保護范圍。參考文獻
1.Ingram et al. Dual role for fimbriata in regulating floral homeotic genes and cell division in Antirrhinum. EMBO J, 1997, 16(21), 652 廣6534.
2.Gonza'ez-Carranza G H, Rompa U, Peters J L, et al. HAWAIIAN SKIRT: An F-Box Gene That Regulates Organ Fusion and Growth in Arabidopsis. Plant Physiology, 2007，(144) : 1370 1382
3.Jain et al. F-Box Proteins in Rice. Genome—Wide Analysis, Classification, Temporal and Spatial Gene Expression during Panicle and Seed Development, and Regulation by Light and Abiotic Stress. Plant Physiology, 2007，143, 1467 - 1483.
4.Lee et al. A LEAFY co-regulator encoded by UNUSUAL FLORAL ORGANS. Curr Biol, 1997， 7(2): 95 104
5.Levin et al. UFO: An Arabidopsis gene involved in both floral meristem and floral organ development. Plant Cell, 1995, 7(5): 529 548
6.Ni et al. Regulation of flower development in Arabidopsis by SCF complexes. Plant Physiol. 2004，134(4) : 1574 158權利要求
1.DDF1基因在控制水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育、特別是雄蕊發(fā)育中的應用，其特征在于，所述的々iF7基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO. 1所示。
2.DDF1基因在控制水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育、特別是雄蕊發(fā)育中的應用，其特征在于，所述的^5 基因編碼的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO. 2所示。
3.權利要求1或2所述的基因在培育水稻理想株型和水稻雄性不育系中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物基因工程技術領域，公開了一種控制水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育多效基因DDF1及其應用。具體涉及一個控制水稻營養(yǎng)生長與花器官發(fā)育多效基因的定位、克隆、功能驗證和應用。所述的DDF1基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.1所示，其編碼的氨基酸序列如序列表SEQIDNO.2所示。DDF1決定水稻的營養(yǎng)生長和花器官發(fā)育，特別是雄蕊的發(fā)育。利用基因工程技術有目的地調控該基因在水稻中的表達，可以調節(jié)水稻的株型和育性，創(chuàng)造水稻育種新種質。因此，本發(fā)明對遺傳改良水稻具有很好的應用前景。
文檔編號C12N15/84GK102321633SQ20111029478
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月28日 優(yōu)先權日2011年9月28日
發(fā)明者蘭濤, 吳為人, 周元昌, 官華忠, 李生平, 段遠霖, 鄭蕾蕾, 陳志偉 申請人:福建農林大學