專利名稱：一種芽孢八疊球菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種芽孢八疊球菌及其應用。
背景技術：
現代農業大規模家禽養殖和加工過程中產生的大量羽毛等角蛋白廢棄物每年在全球范圍內可至上千萬噸，我國也達幾十萬噸。一方面，這些羽毛成為自然界中最豐富的角蛋白來源，但同時也成為環境治理中一個亟待解決的問題。而另一方面，研究人員發現，角蛋白富含有大量的蛋白質和氨基酸，對其營養成分的研究表明羽毛中含粗蛋白超過80 %， 各種氨基酸總量超過70 %。可見，若加以恰當處理，羽毛等角蛋白廢棄物可達到生物轉化的目的。自然界中角蛋白并未有聚積的現象，其原因就在于某些特殊微生物能分泌一類酶，稱為角蛋白酶(keratinase，EC 3. 4. 21/24/99. 11 )，它能夠特異性地分解角蛋白，使其降解為多肽和氨基酸。最早發現的能分解角蛋白的微生物是1899年Ward報道的馬爪甲團囊菌(Pnygerm，之后相繼發現了 30余種可降解角蛋白的微生物，主要包括真菌、放線菌和細菌3類。其中，產生蛋白酶的細菌多來自芽孢桿菌，其中研究最為深入的是地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，個別菌株所產角蛋白酶已進行了商業化生產，如地衣芽孢桿菌PWD-I (.Bacillius licheniforrmis PWD-1)純化后角蛋白酶活性很高，商品名稱為 Versazyme 0我國在羽毛角蛋白分解菌的培養和篩選的研究領域落后于國外，分離與篩選出的高效菌種并不多，且多是真菌與放線菌，因而篩選高產而且具較好穩定性角蛋白酶新的菌群也是一個研究熱點，不僅充分利用了蛋白資源，同時也大大減少了由此造成的環境污染， 具有顯著的經濟利益和深遠的社會效益。

發明內容
本發明的目的在于針對現有技術中的上述不足，提供一種芽孢八疊球菌。本發明的另一目的是提供上述芽孢八疊球菌的應用。本發明通過以下技術方案實現上述目的
一種芽孢八疊球菌，分類命名為 Sporosarciim guangzhouensis GIMN 1. 015T=47，本發明中簡稱廣州芽孢八疊球菌，該菌于2011年10月27日保藏于中國典型培養物保藏中心 (CCTCC)，地址中國.武漢·武漢大學，保藏編號為CCTCC NO: M2011367。該菌的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO: 1所示。該菌在平板上培養24h后的菌落呈淡黃色，圓形，表面光滑半透明，邊緣整齊；革蘭氏染色為陽性，菌體桿狀，具有周身纖毛，運動，無莢膜，芽孢端生，橢圓形。經生理生化測定，本發明的廣州芽孢八疊球菌的脲酶試驗為陽性，氧化酶試驗為陰性；能水解酪蛋白，對明膠、淀粉、吐溫80及酪氨酸不具水解性；硝酸還原測定為陽性，苯丙氨酸測定為陰性；不能利用D-葡萄糖、D-甘露糖及D-木糖。生長溫度范圍15、5 °C，以
3及生長pH值范圍為5. 5 11.5。該菌株具有分解羽毛的功能，能夠產生角蛋白酶，經測定，該菌培養48小時后，蛋白酶活性達105U/ml，因此可用于生產角蛋白酶的工業生產中，對角蛋白酶的研究和利用具有重要價值。


圖1.廣州芽孢八疊球菌的透射電子顯微鏡照片(6000倍)。圖2.廣州芽孢八疊球菌及部分相關菌株依據16S rDNA序列構建的系統發育樹。圖3.廣州芽胞八疊球菌降解羽毛的效果圖，其中試管47為加入廣州芽胞八疊球菌的實驗組，CK為空白對照組。
具體實施例方式以下結合具體實施例進一步解釋本發明，但不對本發明構成任何限定。以下實施例中除特殊說明外，均為本領域常規試劑和方法步驟。實施例1廣州芽孢八疊球菌的分離
土樣取自廣東省廣州市華南農業大學校內，混入雞羽毛，待羽毛分解后收集土樣，自然陰干，4°C保存備用。取IOg上述土樣放入裝有90mL無菌水的三角瓶中(帶玻璃珠)，在180 rpm轉速下振蕩30分鐘，靜置10分鐘后，取上層液稀釋10倍后，依次制成10-4、10_5、10-6 土壤稀釋液，取0. ImL均勻涂布在NA瓊脂培養基平板上，翻轉平板置于30°C培養箱中培養2天。對每個菌落形態不同的菌株做2個平行純化平板。挑取初篩單菌落于羽毛補給性培養基中， 置于30°C搖床，120rpm培養，以未接種的培養基作對照，觀察羽毛降解情況。NA瓊脂培養基配方蛋白胨10. 0g，牛肉膏粉3. 0g，氯化鈉5g，瓊脂20. 0g，水 IOOOml ；pH 7. 4士0. 2。羽毛補給性培養基配方蛋白胨10. 0g，牛肉膏粉3. 0g，氯化鈉5. OgjK 1000ml， 0. 1% 天然羽毛，pH 7. 4士0. 2。經過羽毛補給性培養基的進一步培養，篩選出分解羽毛效率最高的菌株，經過形態學及生理生化和DNA鑒定后，命名為分orosarciaa guangzhouensis GIMN 1.015τ=47，簡稱廣州芽孢八疊球菌。實施例2廣州芽孢八疊球菌的生物學性狀及生理生化和分子鑒定 1.形態特征
廣州芽孢八疊球菌在電鏡下的形態見于圖1，該芽孢八疊球菌在平板上培養24h后的菌落呈淡黃色，圓形，表面光滑半透明，邊緣整齊；革蘭氏染色為陽性，菌體桿狀，具有周身纖毛，運動，無莢膜，芽孢端生，橢圓形。2.生理生化特征
經生理生化測定，本發明的廣州芽孢八疊球菌的脲酶試驗為陽性，氧化酶試驗為陰性； 能水解酪蛋白，對明膠、淀粉、吐溫80及酪氨酸不具水解性；硝酸還原測定為陽性，苯丙氨酸測定為陰性；不能利用D-葡萄糖、D-甘露糖及D-木糖。生長溫度范圍15 45°C，以及生長PH值范圍為5. 5 11.5。
將實施例1篩選出的廣州芽孢八疊球菌(5 guangzhouensis GIMN1. 015 τ=47)和與其同源性最高的芽孢八疊球菌菌株(具體名稱見表1)進行微生物學特性分析，結果見表 1.
表1.廣州八疊球菌和與其同源性最高的芽孢八疊球菌菌株微生物學特征比較
權利要求
1.一種芽孢八疊球菌,分類命名為分orosarciaa guangzhouensis GIMN 1. 015τ=47, 該菌于2011年10月27日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: M2011367。
2.根據權利要求1所芽孢八疊球菌，其特征在于該菌的16SrDNA核苷酸序列如SEQ ID N0:1所示。
3.權利要求1或2所述芽孢八疊球菌在分解角蛋白中的應用。
4.權利要求1或2所述芽孢八疊球菌在生產角蛋白酶中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種芽孢八疊球菌及其應用。該芽孢八疊球菌(SporosarcinaguangzhouensisGIMN1.015T=47)于2011年10月27日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M2011367。該菌株的16SrDNA核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。本發明的廣州芽孢八疊球菌能夠產生角蛋白酶，經測定，該菌培養48小時后，蛋白酶活性達105U/ml，因此可用于生產角蛋白酶，對角蛋白酶的研究和利用具有重要的價值。
文檔編號C12R1/01GK102399726SQ201110371310
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月21日 優先權日2011年11月21日
發明者姚青, 朱紅惠, 歐文韻, 羊宋貞, 顧振紅 申請人:華南農業大學