專利名稱：一種適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及真菌培養技術領域，具體涉及一種適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基及其應用。
背景技術：
漆酶是一種含銅的多酚氧化酶，其作用底物廣泛，能夠有效降解木質素及催化氧化多種酚和芳胺類化合物，在生物能源、環境保護、造紙工業、食品工業、生物檢測等領域均具有廣闊的應用前景和潛在應用價值。大部分能夠引起木本或草本植物腐化的真菌均能產生漆酶。其中，白腐真菌是一類能夠引起木質白色腐爛的絲狀真菌的統稱，具有突出的木質素降解能力，主要為擔子菌，少部分為子囊菌，包括革蓋菌屬(CbrioA/s)、臥孔菌屬 QPoria )、多孔菌屬 QPolyporus )、原毛平革菌屬 QPhanerochae e )、側耳屬 iPIeuro m )、煙管菌屬(Mjerkandera )和栓菌屬(Trametes )等。白腐真菌多為好氧微生物，培養溫度一般在^ 30°C左右，在pH3. 0 8. 0的范圍均能穩定產酶。白腐真菌的產酶能力與其培養條件密切相關。碳源、氮源、無機鹽及各類誘導物是提高漆酶產量的關鍵因素。碳源和氮源對于微生物的生長和代謝是必不可少的。然而，來源不同的微生物對培養基成分的要求有很大差異。對于白腐真菌，常見的碳源有葡萄糖、蔗糖、甘油、玉米粉、 麥草粉、麩皮等；常用的氮源為(NH4)2SO4、NH4C1等無機氮源，酵母提取物、蛋白胨等有機氮源以及玉米粉、馬鈴薯、麥麩等天然含氮物質。此外，許多金屬離子和化合物以不同的方式添加到培養基中，以誘導漆酶基因表達，提高漆酶產量。常見的金屬離子誘導物有Cu2+、Mn2+等，常見的誘導劑有香蘭素、愈創木酚和丹寧酸等。一些天然的含木質素的物質，如麩皮、麥草粉、木屑木汁、蔗渣等，不僅為培養基提供碳氮源，同時也可用于誘導漆酶的產生。目前，最常見的用于培養白腐真菌的培養基是新鮮土豆所制成的PDA液體培養， 通常于培養基中添加適量的麥麩誘導漆酶產生。然而，于PDA液體培養基中培養白腐真菌， 雖然菌體生長快速，但是漆酶產量卻十分低下，不足以用于純化利用。本發明涉及的適合白腐真菌生長和高產漆酶的液體培養基，不僅為菌體生長提供充足的營養成分，還能促進菌體分泌漆酶。與一般的PDA液體培養基相比，同種真菌的漆酶產量可提高5至50倍，足以分離純化并加以利用。

發明內容
本發明的目的在于根據現有技術中存在的上述不足，提供一種不僅適合白腐真菌的生長，還能夠促進白腐真菌分泌漆酶的液體培養基。本發明另一目的在于提供上述液體培養基的制備方法。本發明還有一個目的在于提供上述液體培養基的應用。本發明上述目的通過以下技術方案予以實現一種適合白腐真菌生長的液體培養基，由碳源、氮源、大量元素、微量元素和水組成；其中，所述碳源為甘油，所述氮源為酸水解干酪素與麥麩或麥麩水解物的混合；所述大量元素為磷酸氫二銨、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、琥珀酸鈉、五水硫酸銅、維生素Bl和吐溫-80 ；所述微量元素為氯化鈉、一水硫酸錳、氯化鈣、七水硫酸亞鐵、硫酸鋅、氯化鈷、十二水硫酸鋁鉀、鉬酸鈉和硼酸。作為一種優選方案，上述液體培養基由如下組分組成0. 00廣10% (ν/ν)甘油， 0. 00廣10% (w/v)酸水解干酵素，0. 00廣10%麥麩或麥麩水解物，0. 0ri0g/L磷酸氫二銨，0. 0ri0g/L磷酸二氫鉀，0. 0ri0g/L七水硫酸鎂，0. 0ri0g/L琥珀酸鈉，0. OflOg/ L 五水硫酸銅，0. 00ri0g/L 維生素 Β1，0· 00Γ10% (ν/ν)吐溫-80，0· 000Γ0. lg/L 氯化鈉，0. 000Γ0. lg/L—水硫酸錳，0. 000Γ0. lg/L氯化鈣，0. 000Γ0. lg/L七水硫酸亞鐵， 0. 000Γ0. lg/L 硫酸鋅，0. 0000Γ0. 01g/L 氯化鈷，0. 0000Γ0. 01g/L 十二水硫酸鋁鉀， 0. 00001 0. 01g/L 鉬酸鈉，0. 00001 0. 01g/L 硼酸。本發明上述液體培養基的制備方法是將各組分混合，攪拌均勻，調節PH至 2. (Γ8.0后，分裝滅菌而得。本發明上述液體培養基可以用于培養白腐真菌，還可以促進白腐真菌分泌漆酶。與現有技術相比，本發明具有如下有益效果
1.本發明所涉及的一種適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基，含有多種營養成分和金屬離子，不僅能為白腐真菌的生長繁殖提供足夠的營養，而且促進白腐真菌分泌漆酶，同一來源的白腐真菌在本發明所涉及的液體培養基中生長比在一般的PDA液體培養基中生長，漆酶活力提高5 50倍。2.本發明所涉及的液體培養基，原料獲取方便、配制簡單。
具體實施例方式以下結合具體實施例來進一步解釋本發明，但實施例并不對本發明做任何形式的限定。
實施例1.量取 10 mL 甘油、0. 5 mL 吐溫-80。2.稱量15 g酸水解干酪素、2 g磷酸氫二銨、1 g磷酸二氫鉀、1.5 g七水硫酸鎂、 1.3 g琥珀酸鈉、2 g五水硫酸銅、0. Olg維生素Bi。3.將上述成分混合，加入500mL水充分溶解。4.分別配制微量元素各個成分的母液，按比例加入上述溶液中，加水至大約800 mL,充分混勻，調節pH至5. 0，定容1000mL。5.往上述培養基中加入10目的麥麩15g，混勻，分裝，滅菌，待用。6.將栓菌屬白腐真菌按接種量5%接種于上述培養基中，培養13天。7.上述培養物胞外漆酶活力達50U/mL。分別采用PDA液體培養基以及上述方法制得的液體培養基培養栓菌屬真菌11天， 從第5天起每隔一天收集粗酶液，用ABTS法測定漆酶酶活力，產酶情況如下(酶活力單位 U/mL)
權利要求
1.一種適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基，其特征在于由碳源、氮源、大量元素、微量元素和水組成；其中，所述碳源為甘油，所述氮源為酸水解干酪素與麥麩或麥麩水解物的混合；所述大量元素為磷酸氫二銨、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、琥珀酸鈉、五水硫酸銅、維生素Bl和吐溫-80 ；所述微量元素為氯化鈉、一水硫酸錳、氯化鈣、七水硫酸亞鐵、硫酸鋅、氯化鈷、十二水硫酸鋁鉀、鉬酸鈉和硼酸。
2.根據權利要求1所述的適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基，其特征在于由如下組分組成0. 00Γ10% (ν/ν)甘油，0. 00Γ10% (w/v)酸水解干酵素，0. 00廣10%麥麩或麥麩水解物，0. onog/L磷酸氫二銨，o. onog/L磷酸二氫鉀，o. onog/L七水硫酸鎂，0. 0廣10g/L琥珀酸鈉，0. 0廣10g/L五水硫酸銅，0. 00ri0g/L維生素Bi，0. 00廣10% (ν/ν)吐溫-80，0.0001 0. lg/L 氯化鈉，0. 0001 0. lg/L—水硫酸錳，0. 000廣0. lg/L 氯化鈣，0. 000Γ0. lg/L七水硫酸亞鐵，0. 000Γ0. lg/L硫酸鋅，0. 00001 0. 01g/L氯化鈷， 0. 00001 0. 01g/L十二水硫酸鋁鉀，0. 00001 0. 01g/L鉬酸鈉，0. 00001 0. 01g/L硼酸和水。
3.權利要求1或2所述適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基的制備方法，其特征在于是將各組分混合，攪拌均勻，調節PH至2. (Γ8. 0后，分裝滅菌而得。
4.權利要求1或2所述液體培養基在培養白腐真菌中的應用。
5.權利要求1或2所述液體培養基在促進白腐真菌分泌漆酶中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基及其應用。本發明所述液體培養基由碳源、氮源、大量元素、微量元素和水組成。該液體培養基不僅適合白腐真菌的生長，還能夠促進真菌分泌漆酶，與普通PDA液體培養基相比，同種真菌的漆酶產量提高了4~50倍。本發明所述液體培養基還具有配制方便、發酵周期短等優點，適合推廣應用。
文檔編號C12N9/02GK102399704SQ201110385809
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月29日 優先權日2011年11月29日
發明者馮蕾, 張愛萍, 徐曉立, 羅思施, 謝君 申請人:華南農業大學