專利名稱：一種快速降解稻草秸稈的有機物料腐熟組合菌劑及其應用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及應用于稻草秸稈的就地還田高效穩(wěn)定成肥使用的ー種快速降解稻草秸稈的有機物料腐熟組合菌劑及其應用方法。
背景技術(shù)：
農(nóng)作物秸稈作為ー種可再生資源，我國毎年農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中要產(chǎn)生近2億噸稻草。由于自然腐解需要時間較長，焚燒處理仍在大量使用，稻草的快速腐解并用于還田處理是倍受關(guān)注的問題。所以，農(nóng)作物秸稈分解利用對于解決未來的能源危機與環(huán)境問題意義重大。湖南是農(nóng)業(yè)大省，糧食作物以雙季水稻為主。毎年總秸稈量約3200萬噸，其中稻草秸稈約2755萬噸。正值國家啟動的“秸稈還田提升土壌有機質(zhì)”項目和湖南省水稻秸稈綜合利用示范區(qū)創(chuàng)建的時期，本研究所針對南方生態(tài)、環(huán)境條件和耕作制度，擬研制出適應能力強和降解效率高的有機物料腐熟劑。該技術(shù)及其產(chǎn)品的應用可以加快秸稈的腐熟速率，提高土壌中有機質(zhì)、速效鉀等的含量，可以加速水稻營養(yǎng)供應、促進有效分蘗，從而增加株高和有效穗，提升水稻產(chǎn)量。從而有效地提高了秸稈綜合利用率，可取得較好的經(jīng)濟效益、生態(tài)效益和社會效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種適合于秸稈田間就地還田條件、能夠快速高效腐解秸稈、具有一定穩(wěn)定性的ー種快速降解稻草秸稈的有機物料腐熟組合菌劑及其應用方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案ー種快速降解稻草秸稈的有機物料腐熟組合菌劑中含有含菌量配比1 :1:1 的康寧木霉 CGMCC NO. 3.似90 ；地衣芽孢桿菌(Bacillus 1 icheniformis)CGMCC NO. 4835 ； 枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414 ；所述的菌劑由以下三種成分混合組成康寧木霉CGMCC NO. 3. 4290依次經(jīng)過液體發(fā)酵、固體發(fā)酵培養(yǎng)后的產(chǎn)物、地衣芽孢桿菌CGMCC N0. 4835液體發(fā)酵培養(yǎng)后的培養(yǎng)物和麥麩吸附的產(chǎn)物、枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414液體發(fā)酵培養(yǎng)后的培養(yǎng)物和麥麩吸附的產(chǎn)物。所述的康寧木霉CGMCC N0. 3. 4290于25_28°C固體發(fā)酵培養(yǎng)45-4 ,產(chǎn)物中菌含量不低于IO8個/g，所述的枯草芽孢桿菌在34-37°C培養(yǎng)22-24h，所述的地衣芽孢桿菌在 45-55°C培養(yǎng)36-40h后，分別將培養(yǎng)物與麥麩吸附，產(chǎn)物中菌含量均不低于IO9個/g，所述的菌含量包括菌體和芽孢總的含量。所述的菌劑中菌含量不低于2 X IO8個/g，菌劑細度不超過0. 18mm,含水量不高于 30%。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其特征在干，所述的康寧木霉CGMCC N0. 3. 4290固體發(fā)酵具體過程如下首先將所述的康寧木霉CGMCC N0. 3. 4290經(jīng)過斜面種子活化、搖瓶種子培養(yǎng)后，將搖瓶種子培養(yǎng)液接種到液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間22-Mh，溫度25-28°C，轉(zhuǎn)速 120-150rpm ；通氣量0. 4-0. 5VVM ；接種量占培養(yǎng)基體積的10-15%，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量占發(fā)酵罐體積的60-70%，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配制方法為蔗糖20g，酵母粉0. 2g，麥芽粉3. Og, NaCl 0. lg, CaCl2 · 2H20 0. lg, KH2PO4 1. 0g, MgSO4 · 7H20 0. 5g，(NH4)2SO4 0. 5g，加蒸餾水至 1L, pH6. 5，121°C,0. IMPa 高壓滅菌 30min ；然后接種占固體培養(yǎng)基重量10-15%的發(fā)酵培養(yǎng)種子液，25-觀で固體發(fā)酵培養(yǎng)45-48h ；固體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為玉米粉10g，麥麩90g, (NH4)2SO4 1. 0g, KH2PO4 0. 2g，MgSO4 · 7H20 0. 05g，80mL蒸餾水，121°C,0. IMPa高壓滅菌30min,固體發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝量為體積的60-70%。所述的地衣芽孢桿菌CGMCC NO. 4835經(jīng)過斜面種子活化、搖瓶種子培養(yǎng)后，將搖瓶種子培養(yǎng)液接種到液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所用液體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為淀粉 5. 0g，糊精 20g，豆餅粉 25g，酵母粉 3. 0g，CaCO3 12g，(NH4)2SO4 10g, NaCl 4. 0g, KH2PO4 0. 2g，加蒸餾水至1L，ρΗ7· 2-7. 4,121 °C,0. IMPa高壓滅菌30min ；培養(yǎng)時間36_40h，溫度 45-55°C，轉(zhuǎn)速180-200rpm，通氣量0. 8-1. 0VVM,接種量占培養(yǎng)基體積的8_10 %，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為發(fā)酵罐體積的55-65%。所述的枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414經(jīng)過斜面種子活化、搖瓶種子培養(yǎng)后，將搖瓶種子培養(yǎng)液接種到液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所用液體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為葡萄糖 5. 0g，蔗糖 3. 0g，豆餅粉 15g，酵母粉 10g，蛋白胨 5. 0g，CaCO3 1. 0g, FeCl3 · 6H20 0. lg, KH2PO4 4. 0g, MgSO4 · 7H20 0. 5g, MnSO4 · H2O 0. 062g，加蒸溜水至 1L, ρΗ7· 2，121°C,0. IMPa 高壓滅菌30min ；培養(yǎng)時間22_24h，溫度；34_37で，轉(zhuǎn)速180_200rpm，通氣量0. 8-1. 0VVM，接種量占培養(yǎng)基體積的8-10%，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為發(fā)酵罐體積的55-65%。上述菌劑制備過程中，麥麩吸附吋，其重量比例占70-80%。所述的菌劑用于提高水稻性狀和產(chǎn)量；具體是添加到稻草秸稈中，用于加速稻草秸稈腐熟、提高土壌中有機質(zhì)、速效鉀的含量，加速水稻營養(yǎng)供應、促進有效分蘗，從而增加株高和有效穗，提升水稻產(chǎn)量。本發(fā)明的組合菌株的原理及有益效果是本發(fā)明針對秸稈的組成，以多種木質(zhì)素酶活力、纖維素酶活力、半纖維素酶活力及秸稈降解率為檢測指標，特別選取康寧木霉 CGMCC N0. 3. 4290 ；地衣芽孢桿菌CGMCC N0. 4835 ；枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414。再將三種菌株培養(yǎng)的產(chǎn)物混合制備而成的菌劑應用于稻草就地還田田間小區(qū)試驗。由于在對秸稈結(jié)構(gòu)進行研究以后，人們發(fā)現(xiàn)木質(zhì)素與半纖維素以共價鍵形式結(jié)合，將纖維素分子包埋在其中，形成ー種天然屏障，使纖維素酶等不易與纖維素分子接觸，而木質(zhì)素的非水溶性、化學結(jié)構(gòu)的復雜性，導致了秸稈的難降解性。因此要徹底降解纖維素，首先必須解決木質(zhì)素的降解問題。首先利用康寧木霉針對秸稈外層難分解成分蠟質(zhì)和木質(zhì)素優(yōu)先降解；再通過結(jié)合纖維素降解菌(地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌)能動構(gòu)建出提高稻草類秸稈腐解效率的菌株組合。針對秸稈由木質(zhì)素、纖維素、半纖維素等組成，本發(fā)明將能分泌高活性的木質(zhì)素酶、纖維素酶和半纖維素酶的康寧木霉、地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌菌株進行組合。由于該菌種組合具有多種菌株，具有一定穩(wěn)定性，而且所有菌都以芽孢形式存在，生長條件適用廣，易存活繁殖，尤其在碳源利用上具有很強的協(xié)同性，因此易于提高秸稈腐熟效率。該秸稈降解菌劑組合在降解秸稈的14天內(nèi)，PH值保持穩(wěn)定，木質(zhì)素酶、纖維素酶活力及有效活菌數(shù)量始終保持在IO7個/g以上，秸稈降解率不斷増加，說明該秸稈降解菌劑對PH具有很強適應和調(diào)節(jié)能力，能夠保持性質(zhì)穩(wěn)定，同時在功能發(fā)揮上也具有一定穩(wěn)定性。該菌劑以孢子為主要存在形式，且細度在0. 18mm水平級，適應性強，在應用于稻草秸稈的就地還田成肥中，適于撒施、噴施，易于機械化操作，可以大大降低勞動強度，縮短使用周期，加速秸稈腐熟，有利于大規(guī)模使用。本發(fā)明菌種組合中地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)保藏號為CGMCC NO. 4835，是由本申請人自己篩選的菌株，并于2011年5月9日在位于中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號的中國科學院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進行了保藏，而且申請了專利，申請?zhí)枮?01110166962.0。枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 11414和康寧木霉CGMCC NO. 3. 4290均購買于中科院微生物研究所。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例旨在進ー步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。實施例1本發(fā)明菌劑制備1)將康寧木霉CGMCC NO. 3. 4290經(jīng)過斜面種子、搖瓶種子培養(yǎng)后至液體發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)，最終在固體發(fā)酵罐中培養(yǎng)產(chǎn)抱，斜面種子培養(yǎng)所用培養(yǎng)基的配制方法為蛋白胨 6. 0g，土豆 200g，NaCl 2. 0g, MgSO4 1. 0g，蔗糖20g，KH2PO4 1. 0g，瓊脂 18_20g，加蒸餾水至 lL，pH自然，121°C,0. IMPa高壓滅菌30min。斜面種子培養(yǎng)時間30_36h，溫度25_28°C。斜面種子接種ニ至三環(huán)至搖瓶種子培養(yǎng)，在500mL三角搖瓶中培養(yǎng)基裝量為100mL。搖瓶種子所用培養(yǎng)基的配制方法為豆餅粉1. 5g，蔗糖20g, MgSO4 1. 5g，KH2PO4 3. 0g，加蒸餾水至1L， pH 自然，121°C,0. IMPa 高壓滅菌 30min，培養(yǎng)時間 22_24h，溫度 25_28°C，轉(zhuǎn)速 120_150rpm， 液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間22h，溫度觀で，轉(zhuǎn)速150rpm，通氣量0. 5VVM。液體發(fā)酵培養(yǎng)基配制方法為蔗糖20g，酵母粉0. 2g，麥芽粉3. 0g, NaCl 0. lg, CaCl2 · 2H20 0. Ig, KH2PO4 1. 0g, MgSO4 · 7H20 0. 5g，(NH4)2SO4 0. 5g，加蒸餾水至 1L，ρΗ6· 5，121°C,0. IMPa 高壓滅菌30min ；接種量占培養(yǎng)基體積的15%，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量占體積的70%。2)然后接種占固體培養(yǎng)基重量15%的液體發(fā)酵培養(yǎng)種子液，25°C固體發(fā)酵培養(yǎng)48h ；固體培養(yǎng)基的配制方法為玉米粉10g，麥麩90g，(NH4)2SO4 1. Og，KH2PO4 0. 2g, MgSO4 · 7H200. 05g,80mL蒸餾水，121°C,0. IMPa高壓滅菌30min。固體發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝量為體積的70%。產(chǎn)物中菌含量在3-6X IO8個/g，菌含量包括菌體和芽孢總的含量。幻地衣芽孢桿菌CGMCC N0. 4835先經(jīng)過斜面種子、搖瓶種子培養(yǎng)后至發(fā)酵培養(yǎng)， 其中地衣芽孢桿菌CGMCC N0. 4835斜面種子培養(yǎng)所用培養(yǎng)基的配制方法為葡萄糖4. Og, 酵母膏4. Og,麥芽粉10. 0g, CaCO3 2. Og,瓊脂20g,加蒸餾水至1L，ρΗ7· 2，培養(yǎng)時間24-26h, 溫度45-55°C。斜面種子接種ー環(huán)至搖瓶種子培養(yǎng)，在500mL三角搖瓶中培養(yǎng)基裝量為 100mL。所用培養(yǎng)基的配制方法為淀粉30. 0g，豆餅粉5. 0g，酵母膏5. 0g，CaCO3 5. 0g, (NH4)2S044. 0g, NaCl 5. 0g, KH2PO4 0. 12g，加蒸餾水至 1L，ρΗ7· 2，121°C,0. IMPa 高壓滅菌 30min。培養(yǎng)時間M-30h，溫度45-55°C，轉(zhuǎn)速200-220rpm。然后接種占發(fā)酵培養(yǎng)基體積8% 的種子培養(yǎng)液到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)36h，溫度55°C，轉(zhuǎn)速200rpm，通氣量0. 8VVM。發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為65%。所用發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為淀粉5. 0g，糊精20g，豆餅粉25g， 酵母粉 3.0g，CaCO3 12g，(NH4)2SO4 10g, NaCl 4. 0g, KH2PO4 0. 2g，加蒸餾水至 1L，ρΗ7· 2， 121°C,0. IMPa 高壓滅菌 30min。將發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)物與麥麩吸附，產(chǎn)物中菌含量均在4-6X IO9個/g，菌含量包括菌體和芽孢總的含量。4)枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414先經(jīng)過斜面種子培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)后至發(fā)酵培養(yǎng)，所用斜面種子培養(yǎng)基的配制方法為牛肉膏3. 0蛋白胨10. 0氯化鈉5. 0，加蒸餾水至1L, pH7. 2,121 °C, 0. IMPa高壓滅菌30min ；培養(yǎng)時間22_Mh，溫度;34-37 °C。斜面種子接種ー環(huán)至搖瓶種子培養(yǎng)，在500mL三角搖瓶中培養(yǎng)基裝量為100mL。搖瓶種子培養(yǎng)所用培養(yǎng)基的配制方法為牛肉膏5. 0酵母提取物5. 0蛋白胨10. 0葡萄糖5. 0氯化鈉5. 0 蒸餾水 1000mlpH7. 0,121 °C,0. IMPa 高壓滅菌 30min。培養(yǎng)時間 22_24h，溫度 34_37°C，轉(zhuǎn)速200-220rpm。接種8%的搖瓶種子培養(yǎng)液至發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為 65 %。所用發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為葡萄糖5. Og,蔗糖3. Og,豆餅粉15g，酵母粉10g， 蛋白胨 5. 0g, CaCO3L 0g, FeCl3 · 6H20 0. lg, KH2PO4 4. 0g, MgSO4 · 7H20 0. 5g, MnSO4 · H2O 0. 062g，加蒸餾水至1L，ρΗ7· 2，121°C，0. IMPa高壓滅菌30min。培養(yǎng)時間22h，溫度37°C，轉(zhuǎn)速200rpm，通氣量0. 8VVM。將發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)物與麥麩吸附，產(chǎn)物中菌含量均在6_8X IO9 個/g，菌含量包括菌體和芽孢總的含量。5)將上述康寧木霉CGMCC N0. 3. 4290依次經(jīng)過液體發(fā)酵、固體發(fā)酵培養(yǎng)后的產(chǎn)物；與地衣芽孢桿菌CGMCC N0. 4835液體發(fā)酵培養(yǎng)后的培養(yǎng)物和麥麩吸附的產(chǎn)物、枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414液體發(fā)酵培養(yǎng)后的培養(yǎng)物和麥麩吸附的產(chǎn)物混合后得到的菌劑。 麥麩吸附的重量比例為70%，含菌量配比1 1 1的康寧木霉CGMCC N0. 3.似90;地衣芽孢桿菌CGMCC N0. 4835 ；枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414 ；菌劑中菌含量為2X108個/g ；菌劑細度為0. 18mm，含水量不高于30%。實施例2菌劑制備方法同實施例1，只是康寧木霉CGMCC N0. 3. 4290液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)時的培養(yǎng)時間為Mh，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，通氣量0. 4VVM，。接種量占培養(yǎng)基體積的10%，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量是60%。然后接種占固體培養(yǎng)基重量10%的液體培養(yǎng)種子液，28°C固體發(fā)酵培養(yǎng)45h;固體發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝量為體積的60%。產(chǎn)物中菌含量在 3-6 X IO8個/g，菌含量包括菌體和芽孢總的含量。地衣芽孢桿菌CGMCC N0. 4835，接種占發(fā)酵培養(yǎng)基體積10 %的種子培養(yǎng)液到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)40h，溫度45°C，轉(zhuǎn)速180rpm，通氣量1. 0VVM,。發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為 55 %。將培養(yǎng)物與麥麩吸附，產(chǎn)物中菌含量均在4-6 X IO9個/g，菌含量包括菌體和芽孢總的含量。枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414，接種10%的搖瓶種子培養(yǎng)液至發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時間Mh，溫度35°C，轉(zhuǎn)速180rpm，通氣量1. 0VVM，。發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為55%。 將發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)物與麥麩吸附，產(chǎn)物中菌含量均在6-8X IO9個/g，菌含量包括菌體和芽孢總的含量。麥麩吸附的重量比例為80%，最后得到的菌劑中菌含量為2X108個/g，菌劑細度為0. 18mm，含水量不高于30%。
實施例3菌劑秸稈降解率對比稻草秸稈降解率測定培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法為新鮮稻草秸稈剪成Icm長的短稈，稱取20g加入500mL的三角瓶，每瓶再加入50g的以下菌劑和IOOmL蒸餾水，混合均勻，自然 PH 值，于 121°C、0. IMPa 下滅菌 30min。首先將纖維素降解菌(即本發(fā)明的兩種芽孢桿菌)分別于34°C培養(yǎng)24h后麥麩吸附制成濃度為IO8個/g的孢子粉劑，按照1 1體積比混合，秸稈降解率為39.6%，高于單株菌；而本發(fā)明將兩種纖維素降解菌和木質(zhì)素降解菌復配，秸稈降解率提高到50. 2%。說明這種組合中的菌株存在著一定的協(xié)同性，他們之間沒有拮抗性。本發(fā)明菌種組合菌劑以稻草秸稈降解率為指標，其對稻草秸稈的降解率比單菌種有明顯提高，達到了 50.2%。實施例4本發(fā)明菌劑在縮短稻草秸稈腐熟時間中的應用試驗設5個處理，3次重復。處理1 常規(guī)施肥+稻草還田+合緣牌牌有機物料腐熟劑；處理2 常規(guī)施肥+稻草還田+本發(fā)明的菌劑；處理3 常規(guī)施肥+稻草還田+谷霖牌有機物料腐熟劑；處理4 常規(guī)施肥+稻草還田；處理5 常規(guī)施肥；晚稻試驗區(qū)隨機排列，小區(qū)面積33. 3M2。試驗結(jié)果為處理2比處理4縮短腐熟時間，較處理1和處理3為優(yōu)(見表 1)。表1不同處理稻草腐熟程度記載表
權(quán)利要求
1.ー種快速降解稻草秸稈的有機物料腐熟組合菌劑，其特征在干，所述的菌劑中含有含菌量配比1 ι 1的康寧木霉CGMCC NO. 3.似90 ；地衣芽孢桿菌CGMCC NO. 4835 ； 枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414 ；所述的菌劑由以下三種成分混合組成康寧木霉CGMCC NO. 3. 4290依次經(jīng)過液體發(fā)酵、固體發(fā)酵培養(yǎng)后的產(chǎn)物、地衣芽孢桿菌CGMCC NO. 4835液體發(fā)酵培養(yǎng)后的培養(yǎng)物和麥麩吸附的產(chǎn)物、枯草芽孢桿菌CGMCC NO. 1. 1414液體發(fā)酵培養(yǎng)后的培養(yǎng)物和麥麩吸附的產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其特征在干，所述的康寧木霉CGMCCNO. 3. 4290于 25-觀で固體發(fā)酵培養(yǎng)45-4 ，產(chǎn)物中菌含量不低于IO8個/g，所述的枯草芽孢桿菌在 34-37°C培養(yǎng)22-24h，所述的地衣芽孢桿菌在45_55°C培養(yǎng)36_40h后，分別將培養(yǎng)物與麥麩吸附，產(chǎn)物中菌含量均不低于IO9個/g，所述的菌含量包括菌體和芽孢總的含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其特征在干，所述的菌劑中菌含量不低于2XIO8個/ g，菌劑細度不超過0. 18mm,含水量不高于30 %。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其特征在干，所述的康寧木霉CGMCCN0. 3. 4290固體發(fā)酵具體過程如下首先將所述的康寧木霉CGMCC N0. 3. 4290經(jīng)過斜面種子活化、搖瓶種子培養(yǎng)后，將搖瓶種子培養(yǎng)液接種到液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間22-Mh，溫度25-28°C，轉(zhuǎn)速 120-150rpm ；通氣量0. 4-0. 5VVM ；接種量占培養(yǎng)基體積的10-15%，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基裝量占發(fā)酵罐體積的60-70%，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配制方法為蔗糖20g，酵母粉0. 2g，麥芽粉3. Og, NaCl 0. lg, CaCl2 · 2H20 0. lg, KH2PO4 1. 0g, MgSO4 · 7H20 0. 5g，(NH4)2SO4 0. 5g，加蒸餾水至 1L, pH6. 5，121°C,0. IMPa 高壓滅菌 30min ；然后接種占固體培養(yǎng)基重量10-15%的發(fā)酵培養(yǎng)種子液，25- °C固體發(fā)酵培養(yǎng) 45-48h ；固體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為玉米粉10g，麥麩90g，(NH4)2SO4 1. 0g, KH2PO4 0. 2g，MgSO4 · 7H20 0. 05g，80mL蒸餾水，121°C,0. IMPa高壓滅菌30min,固體發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝量為體積的60-70%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其特征在干，所述的地衣芽孢桿菌CGMCCN0. 4835經(jīng)過斜面種子活化、搖瓶種子培養(yǎng)后，將搖瓶種子培養(yǎng)液接種到液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所用液體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為淀粉5. 0g，糊精20g，豆餅粉25g，酵母粉3. 0g, CaCO3 12g， (NH4)2SO4 10g，NaCl 4. 0g, KH2PO4 0. 2g，加蒸餾水至 1L，ρΗ7· 2-7. 4，121°C,0. IMPa 高壓滅菌30min ；培養(yǎng)時間36_40h，溫度45_55°C，轉(zhuǎn)速180_200rpm，通氣量0. 8-1. 0VVM，接種量占培養(yǎng)基體積的8-10%，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為發(fā)酵罐體積的55-65%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其特征在干，所述的枯草芽孢桿菌CGMCCNO. 1. 1414經(jīng)過斜面種子活化、搖瓶種子培養(yǎng)后，將搖瓶種子培養(yǎng)液接種到液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所用液體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法為葡萄糖5. 0g，蔗糖3. 0g，豆餅粉15g，酵母粉10g，蛋白胨 5. 0g, CaCO3 1. 0g, FeCl3 · 6H20 0. lg, KH2PO4 4. 0g, MgSO4 · 7H20 0. 5g, MnSO4 · H2O 0. 062g, 加蒸餾水至1L，ρΗ7· 2，121°C,0. IMPa高壓滅菌30min ；培養(yǎng)時間22_24h，溫度34_37°C，轉(zhuǎn)速180-200rpm，通氣量0. 8_1. 0VVM，接種量占培養(yǎng)基體積的8_10 %，發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的裝液量為發(fā)酵罐體積的55-65%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌劑，其特征在干，麥麩吸附吋，其重量比例占70-80%。
8.權(quán)利要求1-7任意一項所述的菌劑的應用方法，其特征在干，用于提高水稻性狀和產(chǎn)量。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應用方法，其特征在干，添加到稻草秸稈中，用于加速稻草秸稈腐熟、提高土壌中有機質(zhì)、速效鉀的含量，加速水稻營養(yǎng)供應、促進有效分蘗，從而增加株高和有效穗，提升水稻產(chǎn)量。
全文摘要
本發(fā)明公開了應用于稻草的就地還田高效穩(wěn)定成肥使用的一種快速降解稻草秸稈的有機物料腐熟組合菌劑及其應用方法。所述的菌劑中含有含菌量配比1∶1∶1的康寧木霉CGMCC NO.3.4290；地衣芽孢桿菌CGMCC NO.4835；枯草芽孢桿菌CGMCC NO.1.1414；所述的菌劑是將所述的康寧木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)后的產(chǎn)物；與兩種芽孢桿菌液體培養(yǎng)后的培養(yǎng)物和麥麩吸附的產(chǎn)物混合后得到的菌劑。其細度不超過0.18mm，含水量低于30％。由于本發(fā)明的菌劑以孢子為主要存在形式，適應性強，適于噴施、撒施，易于機械化操作，可以大大降低勞動強度，縮短使用周期，加速秸稈腐熟，有利于大規(guī)模使用。
文檔編號C12N1/14GK102533553SQ20111045005
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者吳迎奔, 尹紅梅, 王震, 許麗娟, 賀月林, 陳薇 申請人:湖南省微生物研究所