專利名稱：抗腫瘤抗氧化抗缺氧的含硒肽合劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種“含硒肽合劑”藥物及其制備方法，具體的說是一種抗腫瘤抗氧化抗缺氧的含硒肽合劑及其制備方法。
二.
背景技術：
腫瘤是威脅人類生命健康的重大難治性疾病，人類在腫瘤的治療過程中經歷了漫長的歷史變遷?？鼓[瘤藥物是重要的治療手段之一，隨著研究的深入與科學技術的發展，抗腫瘤藥物隨著新靶點的發現而不斷進步。近年，科學家對腫瘤的深入研究發現，盡管腫瘤發生和發展的原因十分復雜，但歸根結底都與基因表達及基因表達產物活性異常密切相關。同時，由于基因表達異常所形成的原發和繼發的腫瘤周圍環境(如血管生成、免疫系統功能變化異常等)的惡化，促進腫瘤細胞惡性表觀的進一步發展，并產生體內擴散和轉移。而且近年來國內外的研究結果清晰地表明，表觀遺傳改變在腫瘤的發生和發展中具有普遍的意義。因此，針對以組蛋白去乙?；?HDAC)這一類影響表觀遺傳的重要分子靶標開展的小分子藥物研發已經成為國際腫瘤靶向治療領域的熱點之一。由于HDAC在基因表達中起著關鍵作用，所以，它們與許多細胞功能密切相關，包括細胞周期調控、細胞增殖、免疫調控、分化和基因程序化表達，同時有與傳統化療藥物對腫瘤耐藥性基因表達完全不同的調節模式等。試驗表明，HDAC抑制劑能夠抑制人體及動物體內的腫瘤的生長，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等。HDAC抑制劑在作用機制上既區別于傳統細胞毒類藥物(即在對增殖快速的腫瘤細胞殺傷的同時，也累及正常細胞的傳統化療藥物)，也不同于典型的靶向藥物。但是，現在的研制工作出現了新的問題(一)、現有的抑制劑單一使用，效能低；(二)、大部分抑制劑在體內易降解、半衰期短，不穩定；(三)、對造血因子GATA-I和10的轉錄抑制，可引起血小板減少等不良反應；(四)、還有微量元素硒抗腫瘤功能肯定，但是硒離子在小腸的中性和偏堿性環境中沉淀，嚴重影響作用效果。
三.

發明內容
本發明的目的是要提供一種抗腫瘤、抗氧化、抗缺氧的含硒肽合劑。本發明的另一目的是提供該合劑的制備方法。本發明是根據中醫藥學對“腫瘤”及其并發的抗氧化抗缺氧能力降低的發病機理的認識以及治療原則，參考現代“硒”、“肽”及“HDA C抑制劑”的藥理研究成果，從我國衛生部審定的可用于保健食品的中藥材中篩選出益氣養陰、活血通脈、抗腫瘤，又能提高血液微循環和免疫力的藥材，由人參、丹參、蘆薈、枸杞子、薏苡仁、茯苓、大棗、葛根、茜草及微量元素等組成原材料，用現代生物工程技術酶法或微生物發酵法提取出含硒環肽、短鏈脂肪酸、親電酮類等純天然HDAC抑制劑化合物，具有高效協同抗腫瘤及抗氧化抗缺氧的功效。含硒肽合劑是具有全新化學結構的亞型選擇性蛋白去乙?；讣兲烊唤M合抑制劑，屬于新型抗腫瘤作用機制的腫瘤表觀遺傳調控藥物，與傳統的腫瘤治療藥物不同，它以癌細胞異常的表觀遺傳作為靶點進行飽和攻擊，并通過誘導患者自身的免疫監測和免疫殺傷作用而發揮整體抗腫瘤作用，純天然無化學污染。本發明的物品是由下列組分制成的(用量為重量)
人參10-30份枸杞子10-25份葛根20-30份硒 0. 01-0. 2 份
丹參10-20份薏苡仁20-50份大棗10-25份
蘆薈10-30份茯苓20-30份茜草10-20份制備本發明的配方優選重量配比范圍是
人參2-10份丹參5-20份
枸杞子6-15份葛根715份硒 0. 0005-0. 01
本發明物品的最佳重量配比是
薏苡仁10-30份大棗4-15份
蘆薈3-15份
茯苓6-15份茜草6-15份
乃參10份薏苡仁12份大棗5份
蘆薈4份茯苓8份茜草10份
人參5份枸杞子8份葛根8份硒0. 001份本發明物品上述配方中可添加其它微量元素，如添加鋅、鉻等，生成多肽金屬螯合物，來提高功能效果。將上述各組分組成本發明物品的生產方法是以上述配方藥材為原料，采用常規制藥加工方法可生產出含硒中成藥合劑，采用制備肽的常規方法能生產出含硒肽合劑?，F重點說明選用微生物發酵法制備肽化合物。具體方法有兩種(一)、將上述配方藥材混合粉碎，用水煎提取方法得到水煎藥液(預處理)，加入肽菌株，進行液體深層發酵培養，調PH值，加熱滅酶，冷卻，過濾純化，既得，再按常規方法制成藥物劑型。(二)、(1)將人參、丹參、薏苡仁、蘆薈、茯苓、茜草、硒按上述配方比例混合粉碎，用乙醇回流提取，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；( 將枸杞子、大棗、葛根按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進行水煎處理；C3)醇提藥液、水煎藥液混合后，加入肽菌株，進行液體深層發酵培養；(4)調PH值，加熱滅酶，冷卻，過濾純化，既得，再按常規方法制成藥物劑型。本發明抗腫瘤原理是通過下列機制(一)純天然增效性HDAC抑制劑靶向作用，直接殺傷腫瘤細胞；(二)提升免疫力及抗氧化抗缺氧能力，抑制腫瘤細胞生存；(三)截斷腫瘤區的血液供應，阻止腫瘤繼續擴大；(四)分化，能是一部分腫瘤細胞轉化為非腫瘤細胞。本發明的主要特點是(一)配方中的藥材含有黏附劑(多糖)、果膠、脂肪酸、氨基酸衍生物、植物多糖、多元醇等，均為肽吸收促進劑、修飾劑和穩定劑，所以本發明性能較穩定，對人體更安全，藥理活性更強；(二)活性肽結合硒離子，由小腸腸壁細胞吸收后再釋放進入血液，從而避免了硒離子在小腸的中性和偏堿性環境中沉淀，提高抗腫瘤的整體效果；(三)所含的人參肽具有活化血小板間黏附作用；(四)所含的皂苷類黃酮類化合物同時具有抗氧化抗缺氧作用。為了證實本發明對抗腫瘤及抗氧化抗缺氧作用的效果，我們分別做了以下試驗。(一)抗腫瘤藥效學試驗(1)、藥物來源與配制含硒肽合劑，20毫升口服液，按生藥1 1提取。用前以蒸餾水配制成試驗所需濃度的混懸液。(2)、試驗動物試驗采用體重18_22g昆明小鼠，雌雄兼用，但每批試驗性別相同，由中國醫學科學院動物中心提供。(3)、試驗方法取生長良好的小鼠可移植腫瘤Lewis肺癌、肝癌H22及肉瘤S180，按抗癌藥藥效學實驗技術要求常規接種小鼠，于接種后M小時分組給藥。試驗共分五組，每組10只鼠，設對照組，環磷酰胺陽性藥組(常規方法)，含硒肽合劑1. 25,2. 5,3. 75g/kg三劑量組。環磷酰胺60mg/kg腹腔注射一次，含硒肽合劑灌胃給藥連續9次。停藥后對小時處死動物，剝瘤稱重，計算抑瘤率，并進行統計學處理。、試驗結果1、對小鼠Lewis肺癌的療效試驗三批試驗結果，含硒肽合劑1.25g/kg組的抑瘤率分別為31.0%、26. 3%、25. 2%(P < 0. 01、ρ < 0. 05、ρ < 0. 05) ；2. 5g/kg 組的抑瘤率分別為 36. 3%、31. 6%、41. 0% (ρ
<0.01、ρ < 0.01、ρ < 0.001) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 51. 0 % ,38. 3 % ,41. 2 % (ρ
<0. OOUp < 0. OUp < 0. 001)。2、含硒肽合劑對小鼠肝癌Η22的療效試驗三批試驗結果，1.25g/kg組的抑率分別為 16. 7%、36. 1%、23.9% (ρ < 0. 05、ρ < 0. 001、ρ < 0. 01) ；2. 5g/kg 組的抑瘤率分別為 22. 5%,35. 6%,22. 4% (ρ < 0. 05、ρ
<0. 001、ρ < 0. 05) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 29. 6 % ,41. 4 % ,34. 2 % (ρ < 0. 01、ρ
<0. OOUp < 0. 001)。3、含硒肽合劑對小鼠肉瘤S180的療效試驗三批試驗結果，含硒肽合劑1. 25g/kg組的抑瘤率分別為33. 7%、24. 1^^29.7% (ρ均< 0. 05) ；2. 5g/kg組的抑瘤率分別為 35. 2%,32. 7%,21. 8% (口均< 0.05) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 45. 9%,40. 6%,33. 6% (ρ < 0. 05、p < 0. 01、p < 0. 05)。(5)、試驗結論含硒肽合劑1. 25,2. 5,3. 75g/kg三劑量組對小鼠肉瘤S180有明顯抑瘤作用，對小鼠Lewis肺癌、肝癌H22均表現了明顯抑瘤作用，且呈劑量關系。其中對小鼠Lewis肺癌療效更明顯，含硒肽合劑大劑量4. 74g/kg組平均抑瘤率達63. 8%。( 二)抗氧化試驗含硒肽合劑有總黃酮成分，具有抗氧化抗缺氧功效。對此我們進行了試驗。方法如下以含硒肽合劑(20毫升口服液一1 1原藥材提取)、給以老齡BAL B/C小鼠灌胃45d后測定與抗氧化延緩衰老有關的生化指標。結果含硒肽合劑能使肝超氧化物歧化酶(SOD)活性顯著增強；全血谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)活性顯著提高。結論含硒肽合劑具有較明顯的抗氧化作用。(三)抗缺氧試驗我們對含硒肽合劑的抗缺氧作用進行了動物實驗，現報告如下。
材料與方法含硒肽合劑20毫升規格、原藥材1 1提取。動物選擇昆明種小鼠，鼠齡40-50天(大連醫學院動物室提供)。①抗常壓下致小鼠缺氧試驗，取昆明種小鼠20只，雌雄各半，鼠齡40-50天，體重21. 2士3. 49，隨機分為2組，每組10只，分別由腹腔注射含硒肽合劑2ml/5公斤(體重)和等容量生理鹽水，15min后，將其放入10只250mm廣口瓶，口內密閉，每瓶2只，每組各1只，瓶內放鈉石灰109，觀察小鼠存活時間(以呼吸停止為指標)。②抗氰化鉀致小鼠缺氧試驗，取昆明種小鼠20只，雌雄各半，鼠齡40-50天，體重19.4 土 1.69，隨機分為2組，每組10只，分別由腹腔注射含硒肽合劑^iil/公斤(體重)和等容量生理鹽水，15min后，兩組小鼠均腹腔注射氰化鉀溶液0 ·1πι1/109(體重)，觀察小鼠存活時間(以呼吸停止為指標)。兩次試驗結果，含硒肽合劑組抗缺氧能力明顯強于生理鹽水組，說明含硒肽合劑具有抗缺氧功效。
四.
具體實施例方式實施例按下述配方比稱取原料
人參5份丹參10份蘆薈4份
枸杞子8份薏苡仁12份茯苓8份
葛根8份大棗5份茜草10份
硒0. 001份。生產方法(1)將人參、丹參、薏苡仁、蘆薈、茯苓、茜草、硒按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取1.5小時，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；(二)將枸杞子、大棗、葛根按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進行水煎2次(8倍水)，每次1. 5小時處理，藥液過濾；(3)把醇提藥液、水提藥液混合后接入高產肽菌株，供壓縮空氣(供養氣)，在溫度2548°C、pH6. 5-7條件下進行液體深層發酵培養72小時；(4)調pH值，加熱滅酶，將藥液濃縮到每人每天服用3次、每次20毫升的濃度(藥材水為1 1)，冷卻，過濾純化，及時灌裝扎封，105°C流通蒸汽滅菌30分鐘，既得含硒肽合劑。
權利要求
1.一種抗腫瘤抗氧化抗缺氧的含硒肽合劑，其特征在于它是由下述重量配比的原料和方法制成的合劑人參2-10份丹參5-20份蘆薈3-15份枸杞子6-15份薏苡仁10-30份茯苓6-15份葛根7-25份大棗4-15份茜草6-15份硒 0. 0005-0. 01將上述配比的原料混合后粉碎制成粗粉，用制備肽的常規方法生產出含硒肽合劑。
2.根據權利要求1所述的合劑，其中各原料的重量配比是人參5份丹參10份蘆薈4份枸杞子8份薏苡仁12份茯苓8份葛根8份大棗5份茜草10份硒0.001份。
3.根據權利要求1或2所述的合劑，其特征在于所說的制備方法包括以下步驟(1)將人參、丹參、薏苡仁、蘆薈、茯苓、茜草、硒按上述配方比例混合粉碎，用乙醇回流提取，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；( 將枸杞子、大棗、葛根按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進行水煎處理；C3)醇提藥液、水煎藥液混合，加入肽菌株，進行液體深層發酵培養；(4)調PH值，加熱滅酶，冷卻，過濾純化，既得，再按常規方法制成藥物劑型。
4.根據權利要求3所述的合劑的制備方法，其特征在于步驟(3)的培養條件是供壓縮空氣(供養氣)，在溫度2548°C、pH6. 5-7條件下培養72小時。
5.根據權利要求1或2所述的合劑，其特征在于所說的合劑可加工成保健食品。
全文摘要
“含硒肽合劑”是以中藥人參、丹參、蘆薈、枸杞子、薏苡仁、茯苓、大棗、葛根、茜草、硒等為基原，利用現代微生物發酵技術制備的，具有全新化學結構的組蛋白去乙酰化酶純天然增效性組合抑制劑，包括含硒環肽、短鏈脂肪酸、親電黃酮等組合化合物，屬于新型抗腫瘤作用機制的腫瘤表觀遺傳調控藥物，與傳統的腫瘤治療藥物不同，它以癌細胞異常的表觀遺傳作為靶點進行飽和攻擊，并通過誘導患者自身的免疫監測和免疫殺傷作用而發揮整體抗腫瘤作用，并且抗氧化抗缺氧，純天然無化學污染。
文檔編號A23L1/29GK102552739SQ20111045553
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月29日 優先權日2011年12月29日
發明者楊京潤, 楊吉星 申請人:北京港生藥業科技有限公司