專利名稱：一種高純度光合細菌快速繁殖的方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物制劑領域，具體涉及到一種高純度光合細菌快速繁殖的方法。
背景技術：
光合細菌，是地球上最古老的具有原始光能合成體系的原核生物，光合細菌廣泛分布于沼澤、池塘、湖泊、河流、水溝、海洋及土壤中，忍耐高溫、高鹽及低溫、低鹽的能力特別強，甚至在90°C高溫的溫泉中，在含30%鹽分的鹽湖里，在深達2000米的深海里，在南極冰封的海岸上，都能找到光合細菌的蹤跡。光合細菌的應用性研究和生產性研究已有三四十年的歷史。日本研究得較早，20世紀60年代，日本科學家觀測了高濃度的糞便污水自然放置時菌數的變化，首先揭示了自然界的有機污水是通過微生物的生態學演替而被凈化的。經過進一步的研究，又發現了光合細菌的菌體對家禽、家畜及魚、蝦、蟹、貝的幼體具有明顯的促進生長和提高成活率的作用，從而為光合細菌菌體的綜合利用開拓了新的領域。我國對光合細菌的研究起步較晚，最初僅限于菌種的分離和用于高濃度污水處理，后來許多專業人員又進行了其他方面的應用研究，取得了大量的成果。1987年上海水產大學張道南等人將其應用到蝦類育苗上，結果試驗組較對照組成活率提高了 19.3%，變態率提高了 18.5%。現在，光合細菌作為一種具有特殊營養、促生長、抗病因子和高效率凈化養殖污水及對環境和水產動物無毒無害的特殊細菌而受到了人們的普遍重視與喜愛。因此，它在水產養殖、畜禽養殖及水處理有關的領域中被廣泛應用。目前，市場上的光合細菌產品繁多，而這些光合細菌產品中，生產技術工藝更是呈多樣化，申請號為0213543 5.9的“光合細菌制劑的制備方法”，根據該發明所述的工藝中，在光合細菌培養期間的80 100個小時內，每間隔25分鐘需要攪拌6分鐘，如果這些工作由人工來完成，是很難做到。申請號為03135857.8的“光合細菌高效制備方法”，該發明的實施過程中培養基是要經過高溫高壓滅菌，光合細菌的培養過程也需要專用發酵罐來完成，造價昂貴的專用設備投入及生產中大量耗能就明顯的增加了生產成本。申請號為200410048678.3的“高濃度光合細菌制劑的制備方法”，該發明所述的工藝中接種是開放式，這就增加了雜菌感染的幾率；接種量高達10 20%，菌種投入成本過高；另外，該發明在培養過程中的72 120小時內，每隔5 8小時需要搖勻一次，這樣的工作讓人工來實現也不現實。申請號為200710011997.0的“一種富集光合細菌的培養基”，該發明在實施過程中培養基需要經過高溫高壓滅菌，也就需要造價昂貴的專用設備投入及生產中大量耗能。申請號為200810137445.9的“一種光合細菌的培養方法”，根據該發明所述的工藝中，光合細菌的培養過程需要充氧，然而在充氧的過程中如果空氣流通管道沒有過濾功能，充氧時也就會往培養液輸送很多的雜菌，繼而加大培養液的感染率而影響產品的質量，相對也影響產品的使用效果。申請號為201010618451.3的“一種光合細菌簡易培養方法”，該發明需要專用蒸餾水，培養周期也需要7天之多。申請號為201010590805.8的“一種自然生態條件下的光合細菌發酵技術”，根據
該發明所述的工藝中，培養用水是經過消毒劑消毒的，但在接種時卻沒有在無菌環境下進行，同樣也就會感染其他雜菌，繼而影響產品的質量。

發明內容
本發明的目的是克服現有技術的不足而提供全新的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法。具體包括:液體培養基的優化配制，液體培養基的消毒方法，培養容器的選用，菌種的選擇，無菌環境下接種及接種量，通過旋轉式搖床培養，培養時環境的溫度、光照調控及培養周期。本發明的特點是液體培養基是經過優化制備的，液體培養基是用二氧化氯來做消毒劑，實現了液體培養基不需要經過高溫、高壓滅菌亦能達到全面滅菌的目的，不但減少了煩瑣、復雜的工藝，還減少了大量耗能；選擇高純度光合細菌做種源；接種時在無菌環境下進行，有效的避免了雜菌感染；光合細菌培養時是放置在旋轉式搖床上搖動培養，對光合細菌培養環境的溫度、光照調控進行有效的調控來達到快速繁殖出成品的目的。本發明中所用的二氧化氯，按量添加到液體培養基質后，在30分鐘內就完成整個殺菌消毒過程；再經過靜放30個小時后，二氧化氯的殺菌消毒能力就會完全消失，這時接入光合細菌菌種，不會對菌種有任何的傷害。本發明在實施過程中的光合細菌培養時是放置在旋轉式搖床上搖動培養，搖床不間斷的搖動有效的幫助沉淀的光合細菌上浮而獲得光照，繼而保持菌細胞的良好生長。本發明是通過以下技術方案來實現的:1、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中包括:液體培養基的優化配制，液體培養基的消毒方法，培養容器的選用，菌種的選擇，無菌環境下接種及接種量，通過旋轉式搖床培養，培養時環境的溫度、光照調控及培養周期。2、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中液體培養基的各種原料配比如下:(I)磷酸氫二鉀:120克。

⑵硫酸鎂:75克。⑶硫酸銨:500克。(4)酵母浸膏:500克。(5)蛋白胨:400 克。(6)硫酸亞鐵:50克。(7)氯化鈉:120 克。(8)氫氧化鈉:適量。(9)水:100 公斤。3、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中液體培養基的配制及裝瓶方法如下:
(I)液體培養基的配制:先用10公斤70 80°C的熱水將上述原料進行稀釋后，再混入90公斤余水并攪拌均勻，接著用氫氧化鈉將液體培養基的PH調整至7 8后即得液
體培養基。(2)裝瓶:將液體培養基分裝至各培養容器，裝入量為培養容器實際容量的2/3。4、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中培養容器選用透明、白色的玻璃瓶。5、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中液體培養基的消毒方法如下:(I)用含量為10%二氧化氯的穩定性二氧化氯粉劑來做消毒劑。(2)按I升液體培養基添加0.5 I克二氧化氯粉劑對液體培養基進行消毒，消毒同時用兩個一次性口罩對培養容器進行封口。(3)液體培養基按量投放二氧化氯粉劑進行消毒后，需要靜放36個小時以后才能接入囷種。6、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中是選擇顏色鮮紫紅，濃度為30億/毫升的光合細菌成品做菌種。7、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中接種的方法及接種量如下:(I)接種環境消毒:把經過消毒的液體培養基及菌種移至接種室(箱)內，并對接種室(箱)進行消毒。(2)接種及接種量:在無菌環境下的接種室(箱)內按照接種濃度為4 5%接種于液體培養基里。8、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中光合細菌培養時是放置在旋轉式搖床培養，培養時搖床旋轉速度為100 120轉/分鐘。9、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中光合細菌培養時環境的溫度、光照調控及培養周期如下:(1)培養溫度:培養環境的溫度控制在28 36°C。(2)光照強度:在搖床上方安置有日光燈，保持培養環境的光照強度為3000 4000勒克斯(LX)。(3)培養周期:光合細菌在溫度是28 36°C、光照強度為3000 4000勒克斯(LX)的環境下培養3 4天，即繁殖成成品。與現有的技術相比，本發明既有如下優點:1、本發明所提出的方法工藝簡單、易實施。2、本發明中所述的液體培養基是經過優化制備的，液體培養基營養配比全面、合理。3、本發明在實施過程中液體培養基是用二氧化氯來做消毒劑，實現了液體培養基不需要經過高溫、高壓滅菌亦能達到全面滅菌的目的，不但減少了煩瑣、復雜的工藝，還減少了大量耗能；接種時是在無菌環境下進行，有效的避免了雜菌感染。4、本發明在實施過程中的光合細菌培養時是放置在旋轉式搖床上搖動培養,搖床不間斷的搖動有效的幫助沉淀的光合細菌上浮而獲得光照，繼而保持菌細胞的良好生長。5、本發明在實施過程中對光合細菌培養環境的溫度、光照調控進行有效的調控來達到快速繁殖出成品的目的，培養時間縮短了 3 5天，提高生產效率。6、經過本發明培育出來的光合細菌都保持優質、高純度，這樣的光合細菌在以后的繁殖擴大生產時即可生產出質量穩定、活力強的生產用光合細菌，同時也保障生產用光合細菌的使用效果。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明的方法進一步說明。一種高濃度光合細菌快速繁殖的方法，具體實施方法如下:1、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中包括:液體培養基的優化配制，液體培養基的消毒方法，培養容器的選用，菌種的選擇，無菌環境下接種及接種量，通過旋轉式搖床培養，培養時環境的溫度、光照調控及培養周期。2、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中液體培養基的各種原料配比如下:(I)磷酸氫二鉀:120克。⑵硫酸鎂:75克。⑶硫酸銨:500克。(4)酵母浸膏:500克。(5)蛋白胨:400 克。(6)硫酸亞鐵:50克。(7)氯化鈉:120 克。(8)氫氧化鈉:適量。(9)水:100 公斤。3、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中液體培養基的配制及裝瓶方法如下:(I)液體培養基的配制:先用10公斤70 80°C的熱水將上述原料進行稀釋后，再混入90公斤余水并攪拌均勻，接著用氫氧化鈉將液體培養基的PH調整至7 8后即得液
體培養基。(2)裝瓶:將液體培養基分裝至各培養容器，裝入量為培養容器實際容量的2/3。4、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中培養容器選用透明、白色的玻璃瓶。5、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中液體培養基的消毒方法如下:(I)用含量為10%二氧化氯的穩定性二氧化氯粉劑來做消毒劑。(2)按I升液體培養基添加0.5 I克二氧化氯粉劑對液體培養基進行消毒，消毒同時用兩個一次性口罩對培養容器進行封口。(3)液體培養基按量投放二氧化氯粉劑進行消毒后，需要靜放36個小時以后才能接入囷種。6、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中是選擇顏色鮮紫紅，濃度為30億/毫升的光合細菌成品做菌種。
7、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中接種的方法及接種量如下:(I)接種環境消毒:把經過消毒的液體培養基及菌種移至接種室(箱)內，并對接種室(箱)進行消毒。(2)接種及接種量:在無菌環境下的接種室(箱)內按照接種濃度為4 5%接種于液體培養基里。8、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中光合細菌培養時是放置在旋轉式搖床培養，培養時搖床旋轉速度為100 120轉/分鐘。9、一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，技術方案中光合細菌培養時環境的溫度、光照調控及培養周期如下:(I)培養溫度:培養環境的溫度控制在28 36°C。(2)光照強度:在搖床上方安置有日光燈，保持培養環境的光照強度為3000 4000勒克斯(LX)。(3)培養周期:光合細菌在溫度是28 36°C、光照強度為3000 4000勒克斯(LX)的環境下培養3 4天，即繁殖成 成品。
權利要求
1.一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征包括液體培養基的優化配制，液體培養基的消毒方法，培養容器的選用，菌種的選擇，無菌環境下接種及接種量，通過旋轉式搖床培養，培養時環境的溫度、光照調控及培養周期。
2.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是液體培養基的各種原料配比如下 (1)磷酸氫二鉀120克。
(2)硫酸鎂75克。
(3)硫酸銨500克。
(4)酵母浸膏500克。
(5)蛋白胨400克。
(6)硫酸亞鐵:50克。
(7)氯化鈉120克。
(8)氫氧化鈉適量。
(9)水100公斤。
3.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是液體培養基的配制及裝瓶方法如下 (1)液體培養基的配制先用10公斤70 80°C的熱水將上述原料進行稀釋后，再混入90公斤余水并攪拌均勻，接著用氫氧化鈉將液體培養基的PH調整至7 8后即得液體培養基。
(2)裝瓶將液體培養基分裝至各培養容器，裝入量為培養容器實際容量的2/3。
4.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是培養容器選用透明、白色的玻璃瓶。
5.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是液體培養基的消毒方法如下 (1)用含量為10%二氧化氯的穩定性二氧化氯粉劑來做消毒劑。
(2)按I升液體培養基添加O.5 I克二氧化氯粉劑對液體培養基進行消毒，消毒同時用兩個一次性口罩對培養容器進行封口。
(3)液體培養基按量投放二氧化氯粉劑進行消毒后，需要靜放36個小時以后才能接入菌種。
6.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是選擇顏色鮮紫紅，濃度為30億/毫升的光合細菌成品做菌種。
7.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是接種的方法及接種量如下 (1)接種環境消毒把經過消毒的液體培養基及菌種移至接種室(箱)內，并對接種室(箱)進行消毒。
(2)接種及接種量在無菌環境下的接種室(箱)內按照接種濃度為4 5%接種于液體培養基里。
8.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是光合細菌培養時是放置在旋轉式搖床培養，培養時搖床旋轉速度為100 120轉/分鐘。
9.根據權利要求I中所述的一種高純度光合細菌快速繁殖的方法，其特征是光合細菌培養時環境的溫度、光照調控及培養周期如下 (1)培養溫度培養環境的溫度控制在28 36°C。
(2)光照強度在搖床上方安置有日光燈，保持培養環境的光照強度為3000 4000勒克斯(LX)。
(3)培養周期光合細菌在溫度是28 36°C、光照強度為3000 4000勒克斯(LX)的環境下培養3 4天，即繁殖成成品。
全文摘要
本發明涉及一種微生物制劑領域，具體涉及到一種高純度光合細菌快速繁殖的方法。具體包括液體培養基是經過優化制備的，液體培養基是用二氧化氯來做消毒劑，實現了液體培養基不需要經過高溫、高壓滅菌亦能達到全面滅菌的目的；選擇高純度光合細菌做種源，接種時在無菌環境下進行，有效的避免了雜菌感染；光合細菌培養時是放置在旋轉式搖床上搖動培養，對光合細菌培養環境的溫度、光照調控進行有效的調控來達到快速繁殖出成品的目的。經過本發明培育出來的光合細菌都保持優質、高純度。
文檔編號C12N1/20GK103255073SQ20121003438
公開日2013年8月21日 申請日期2012年2月15日 優先權日2012年2月15日
發明者何寒 申請人:何寒