專利名稱：生物流體中細菌的檢測的制作方法
生物流體中細菌的檢測
背景技術：
通常將血液加工例如分離成成分，得到各種有價值的產品，例如輸血產品。可以在加工過程中匯集血液成分或產品，例如血沉棕黃層和血小板，例如，可以在作為輸血產品給予前匯集4-6個單位的血小板濃縮物。另外，可以在給予前貯存在封閉系統中(例如不使成分暴露于外部環境)加工的血液成分。例如,可以將紅細胞貯存幾周，并且可以將血小板貯存幾天(例如根據目前的美國實踐5天)。貯存的和/或未貯存的成分可能包括不期望的材料例如細菌。細菌可以在血液采集(包括采血樣)和/或貯存過程中污染血液或血液成分。細菌污染的一個來源可以是血液捐獻者皮膚，其可能包含一種或多種種類的細菌。由于在靜脈穿刺前擦拭捐獻者皮膚(例如用酒精)可能不足以確保無菌，所以細菌可以進入采血容器并且細菌可以在貯存血液或血液成分的同時再生。另外，靜脈采血針頭在該靜脈采血針頭插入捐獻者時可能切下一圓片皮膚，使得包含細菌的皮片與血液一起進入采血容器。 污染的其他來源包括捐獻者血液、環境(包括空氣和環境中的設備)和靜脈采血者。污染可以在捐獻血液單位和/或得到血樣的同時發生。由于將一些血樣成分(例如血小板)典型地貯存在環境溫度，所以污染問題可能被放大，因為許多種類的細菌在環境溫度更快速地再生。污染的血液產品、尤其是細菌污染的血液產品對接觸或接受這些產品的那些人形成了潛在的健康風險。例如，給予存在細菌污染的輸血產品可以對接受者產生不良反應，并且在美國，給予具有高水平細菌污染的血小板每年牽連許多嚴重的疾病或死亡病例。用于檢測細菌的一些現存的技術是耗費勞動且耗時的并且可能需要昂貴的設備。一些技術可能使得采樣受限、得到不精確的結果和/或難以檢測一些種類的細菌。另外，這些技術可能將污染從環境中導入樣品。本發明提供了用于對至少一些現有技術缺陷的改善。本發明的這些和其他優點從如下舉出的描述中顯而易見。發明概述在一個實施方案中，提供了用于檢測生物流體例如血液和血液產品中細菌的方法，該方法包括使可能包含細菌的生物流體接觸減少血細胞呼吸的清潔劑和細菌生長促進劑；和在一定時間期限內，測定和/或檢測容器中的葡萄糖水平，所述容器包含所述的生物流體、清潔劑和細菌生長促進劑。 本發明的另一個實施方案提供了檢測生物流體例如血液和血液產品中的細菌的系統，該系統包含讀取和/或測定裝置，和包含適合于裝載生物流體的容器的生物流體采樣裝置，該容器包含入口并且包含用于減少血細胞呼吸的清潔劑和細菌生長促進劑。由于血細胞呼吸(使用葡萄糖作為其代謝的底物)在清潔劑的存在下減少，且由于細菌在其代謝周期過程中利用葡萄糖(需氧菌在糖酵解過程中利用葡萄糖、厭氧菌在發酵過程中利用葡萄糖)，所以如果生物流體中存在細菌，則細菌生長將在生長促進劑的存在下得到促進，且葡萄糖的水平將隨時間減少。因此，葡萄糖的水平改變用作細菌檢測的替代I■■己 O


圖I顯示根據本發明的細菌檢測系統的實施方案，包含生物流體采樣裝置，其包含適合于裝載生物流體的容器，該容器包含葡萄糖采樣入口并且包含用于減少血細胞呼吸的清潔劑和細菌生長促進劑和葡萄糖讀取和/或葡萄糖測定裝置。圖2顯示根據本發明的細菌檢測系統的另一個實施方案，包含葡萄糖讀取和/或葡萄糖測定裝置和生物流體加工系統，其包含多個生物流體容器和如圖I中所示的生物采樣裝置。圖3顯示根據本發明的細菌檢測系統的另一個實施方案，包含葡萄糖讀取和/或葡萄糖測定裝置和生物流體加工系統，其包含多個生物流體容器、排氣口、白細胞耗盡濾器和如圖I中所示的生物采樣裝置。 發明詳述有利的是，本發明不僅能夠檢測需氧菌，而且能夠檢測專門的厭氧菌并且能夠檢測對于其代謝不使用氧的兼性厭氧菌。在一個實施方案中，提供了用于檢測生物流體中的細菌的方法，該方法包括(a)將生物流體(該生物流體可能包含細菌)置于容器中，該容器包括(i)用于減少血細胞呼吸的清潔劑；和(ii)細菌生長促進劑；和(b)在一定時間期限內，測定和/或檢測容器內生物流體中的葡萄糖水平，其中在該時間期限內葡萄糖水平的下降表示存在細菌。該方法的實施方案包括測定和/或檢測容器內的第一葡萄糖水平，并且在測定和/或檢測容器內第一葡萄糖水平的約4-約15小時內，測定和/或檢測容器內的第二葡萄糖水平；或包括在一定時間期限內，連續測定和/或檢測容器內PC中的葡萄糖水平。在一個實施方案中，在最初從受試者得到生物流體的約24小時或更短時間內將加工的生物流體置于容器中。或者或另外，該方法的實施方案包括從受試者采集生物流體，并且在采集生物流體的約24小時或更短時間內，使部分生物流體進入容器，其中使該部分生物流體保持與清潔劑和細菌生長促進劑接觸，并且在適合的時間期限后，在一定時間期限內，測定和/或檢測容器中的葡萄糖水平。示例地，可以采集I單位的血液并且加工以便將血液分離成一種或多種成分，包括，例如，PC。在采血的約24小時內，可以使部分分離的PC進入容器，其中使該部分PC保持與清潔劑和細菌生長促進劑接觸，并且在適合的時間期限后，在一定時間期限內，測定和/或檢測容器中的葡萄糖水平。該方法的實施方案可以包括將清潔劑和細菌生長促進劑置于容器中，然后將生物流體置于容器中，例如，該方法可以包括將生物流體置于采樣裝置容器中，該容器包含葡萄糖采樣入口并且包含用于減少血細胞呼吸的清潔劑和細菌生長促進劑。在優選的實施方案中，生物流體包含含有血小板的流體、例如富含血小板的血漿或血小板濃縮物；包含紅細胞的流體例如白細胞或濃集紅細胞；包含臍帶血、干細胞的流體或細胞培養物。在一些實施方案中，生物流體包含白細胞耗盡的流體。在另一個實施方案中，提供了用于檢測生物流體中細菌的系統，包括(a)生物流體采樣裝置，其包含適合于包含生物流體的容器，該容器包含入口(優選葡萄糖采樣入口)，該容器包含(i)有效量的用于減少血細胞呼吸的清潔劑；和(ii)有效量的細菌生長促進劑，該系統還包含(b)葡萄糖讀取裝置和/或葡萄糖測定裝置，該裝置還包含葡萄糖采樣裝置(例如試劑墊和/或測試條)，其中讀取和/或測定裝置適合于在一定時間期限內測定和/或檢測生物流體內的第一葡萄糖水平和生物流體內的第二葡萄糖水平，其中該時間期限內葡萄糖水平的下降表示存在細菌。典型地，適合于包含生物流體的生物流體采樣裝置容器是軟包裝容器。在細菌檢測系統的一個優選的實施方案中，該系統包含生物流體加工系統，該系統包含多個容器，例如用于接收和/或采集生物流體的第一個容器(例如“源容器”)和至少第二個用于接收部分生物流體的容器(例如作為生物流體采樣裝置的組成部分，其也是所述系統的組成部分)，其中第二個容器包含清潔劑和細菌生長促進劑；和葡萄糖讀取和/或測定裝置，其檢測該時間期限內生物流體中的葡萄糖水平。生物流體加工系統典型地包括多個用于提供容器之間流體溝通的導管并且可以包括另外的部件，例如一個或多個另外的容器(例如用于另外的溶液和/或用于包含加工的生物流體成分)和/或過濾裝置(例 如白細胞耗盡過濾裝置)和/或一個或多個排氣口例如氣體入口和/或氣體出口。典型地，該生物流體加工系統還包括一個或多個流量控制裝置，例如夾子、轉移路徑截止器、止回閥和/或可旋轉閥。該細菌檢測系統和/或生物流體加工系統的實施方案優選包括可拆卸的(或可連接和可拆卸的)生物流體采樣裝置。例如，可以生產生物流體加工系統，包括生物流體采樣裝置，或者可以將生物流體采樣裝置(例如，通過保持無菌的無菌對接)與存在的生物流體加工系統(包括任何商購的生物流體加工系統，例如血袋組)連接。可以在流體通過后切斷能夠使第一個(源)容器與第二個容器(生物流體采樣裝置容器)之間流體溝通的導管(優選通過熱封以維持采樣裝置和源容器的內容物無菌性)，且隨后可以檢測細菌。或者或另外，細菌檢測系統和/或細菌流體加工系統可以包括通過系索、優選能彎曲的系索例如塑料索或纜連接的生物流體采樣裝置(例如連接第一個容器)。示例地，上述導管可以被切斷和密封并且單獨的系索保持分析室與源容器連接，例如直到細菌分析完成為止。由于可以根據本發明檢測細菌，所以本發明的實施方案可以適合于提供可以長于目前各國規程允許的期限貯存血液成分。例如至少部分是由于恐懼可能被細菌污染的血細胞濃縮物(PC)，所以目前的美國實踐要求當在密閉系統中加工時，各PC和匯集PC的單元需在5天內使用。然而，由于本發明的實施方案能夠檢測污染的PC，所以可以監測匯集的和未匯集的PC，且如果經測定未污染，則可以在目前要求的5天限制后使用。示例地，例如在7天貯存后，可以輸注在密閉系統中加工的各PC或匯集的PC單位。各種細菌包括革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、需氧菌和厭氧菌利用葡萄糖且由此根據本發明的實施方案，一定時間期限內生物流體中葡萄糖水平或濃度的下降反映出存在細菌。示例地，實施方案提供了檢測細菌的存在，其中存在的細菌可以是如下的一種或多種表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、路鄧葡萄球菌、粘質沙雷氏菌、解凝沙雷氏菌、小腸結腸炎耶爾森菌、肺炎克雷白氏菌、奧克西托克雷白桿菌、大腸埃希氏桿菌、陰溝腸桿菌、產氣莢膜梭狀芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、淤泥真桿菌、沙門菌屬的種類例如腸道沙門氏菌(在先的豬霍亂沙門氏菌)、芽孢桿菌屬的種類例如蠟狀芽孢桿菌、產氣莢膜梭狀芽孢菌、痤瘡丙酸桿菌、無乳鏈球菌(也稱作B組鏈球菌或GBS)、牛鏈球菌(至少一些菌株目前稱作馬腸鏈球菌)、嬰兒鏈球菌和草綠色鏈球菌。本發明的系統和方法特別適用于輸血裝置、血站和/或血庫人員。如果期望，則一旦根據本發明測定存 在細菌，則可以通過已知技術進一步進行分析以鑒定存在的特定種類的細菌。現在在下文中更具體地描述本發明的組成部分，其中類似的組成部分具有類似的參比序號。優選采樣裝置的實施方案包括具有至少兩個入口的容器和至少一個與至少入口之一流體溝通的導管。圖I示例用于本發明實施方案的生物流體采樣裝置100。所示例的采樣裝置包含用于接收部分生物流體的采樣裝置容器50 (例如“采樣容器”)，該容器包括入口 10 (例如“葡萄糖采樣入口”)和密封該入口一端的可穿刺的部件11 (例如彈性隔膜)，其中可穿刺的部件包括可穿刺的部分12 (優選位于或接近該部件的中心)以便例如能夠插入液體抽取裝置(例如注射器，典型地，其中抽取裝置還包含連接注射器的針頭或噴嘴)或葡萄糖探頭，同時維持密封；生物流體入口 20和與口流體溝通的導管30。在一些實施方案中，多孔膜13、優選疏水性微孔膜位于或接近口的另一端。例如，在連接注射器的針頭或噴嘴刺入隔膜(不穿透膜13)后，注射器活塞可以在注射器桶內部分被抽離，生成真空并且從容器中且通過膜進入桶拉出生物流體。典型地，入口 10由不同于容器50的材料制成。優選導管30是無菌對接的，使得該裝置可以與例如另一個導管和/或容器通過無菌對接連接，從而可以得到封閉系統。在一些實施方案中，例如如圖I中所示，該系統包含流量控制裝置35例如與導管流體溝通的單向止回閥和至少另一個與止回閥流體溝通的導管36 (優選可無菌對接導管)。采樣裝置包括清潔劑和細菌生長促進劑，且所示例的采樣裝置在容器內包括2個片劑5、5a，它們各自包含清潔劑和細菌生長促進劑。優選如圖I中所示，該裝置還包括適合于附加例如打印或侵蝕刻于其上標記的區域，或用于接收其上具有標記的標簽的區域。如果期望，則采樣裝置可以包括例如還包含魯爾連接器(未顯示)的入口，使得液體抽取裝置例如注射器與采樣裝置連接以便隨后從容器中抽取液體。圖I還顯示圖解的葡萄糖讀取裝置和/或葡萄糖測定裝置500。典型地，并且如圖2中所示例的，細菌檢測系統1000包含生物流體加工系統300，其包含多個容器，例如用于接收和/或采集生物流體的第一個容器51和至少第二個用于接收部分從第一個容器通過的生物流體的容器50 (作為圖I中所示的生物流體采樣裝置100的組成部分，其也為該系統的組成部分)，其中第二個容器包含清潔劑和細菌生長促進劑，且其中葡萄糖讀取裝置和/或葡萄糖測定裝置500檢測和/或測定該時間期限內生物流體中的葡萄糖水平。所示例的生物流體加工系統包括多個用于提供容器之間流體溝通的導管。在一些實施方案中，細菌檢測系統包含含有多個容器的生物流體加工系統和白細胞耗盡過濾器。例如，在圖3中示例的實施方案中，細菌檢測系統1000包含含有多個容器的生物流體加工系統300和白細胞耗盡過濾器250。所示例的生物流體加工系統300包含第一個容器51，例如用于接收匯集的生物流體(匯集歧管和未顯示的PC各單位的容器)，和至少第二個容器50(作為圖I中所示的生物流體采樣裝置100的組成部分，其也為所述系統的組成部分)，用于接收部分通過第一個容器的生物流體，其中第二個容器包含清潔劑和細菌生長促進劑，且其中葡萄糖讀取裝置和/或葡萄糖測定裝置500檢測和/或測定在該時間期限內生物流體中的葡萄糖水平。根據所示例的系統，生物流體從第一個容器51通過白細胞耗盡過濾器250進入第三個容器53，其可以包含貯存容器。所示例的生物流體加工系統包括多個用于提供容器之間流體溝通的導管。圖3中所示例的生物流體加工系統300還包含排氣口 225 (可以包含氣體入口和/或氣體出口)和作為本領域公知應用的排氣袋275。例如，匯集的PC可以通過進入第一個容器51，且排氣口 225可以允許空氣通過排氣口并且使排氣口與第一個容器之間的導管中的PC流入容器。然后容器51中的空氣可以通過導管和排氣口，并且導管被密封。在其中系統包括排氣袋275的那些實施方案中，在白細胞耗盡的生物流體進入第三個容器53后，容器53中的空氣可以進入排氣袋，并且可以導向容器53的導管被密封。 盡管圖3示例了與第一個容器51 (能夠在白細胞耗盡前采樣)之間流體溝通的第二個容器50 (作為生物流體采樣裝置100的組成部分)，但是在另一個實施方案中(未顯示)，第二個容器50 (作為生物流體采樣裝置100的組成部分)與第三個容器53 (例如能夠在白細胞耗盡后采樣)流體溝通。清潔劑和/或細菌生長促進劑可以是干燥形式(例如粉末或片劑)或液體形式。在任一形式中，可以包括其它成分、組分和/或添加劑。如果期望，例如，其中清潔劑和/或細菌生長促進劑是干燥形式，例如片劑形式，則可以包括其它成分、組分和/或添加劑，例如，惰性材料，例如一種或多種如下成分麥芽糖、甘露糖醇和鹽，例如氯化鈣，例如用于提供整體和/或易于結合。本發明的清潔劑顯著地減少了血細胞(血小板、血細胞和白細胞)呼吸，但對細菌呼吸幾乎沒有或無影響。優選的清潔劑是磺酸多聚對苯烯基茴香醚鈉(SPS)。各種細菌生長促進劑適用于本發明。一種優選的促進劑是胰蛋白酶解酪蛋白大豆肉湯(TPB)。其他適合的促進劑包括、但不限于肉湯例如溶源性肉湯(LB肉湯)、甘露糖醇肉湯、M9最小培養基(可以補充例如一種或多種如下成分葡萄糖、鈣和鎂)或其他肉湯，包括補充的肉湯。檢測液體中的葡萄糖水平。例如，可以從采樣裝置容器中取出小體積的生物流體(通過入(葡萄糖采樣)口，使用液體抽吸裝置，典型地包含注射器)，并且典型地置于插入葡萄糖讀取裝置和/或葡萄糖測定裝置的試劑墊或測試條上，且在適合的時間期限后將該過程重復至少一次。或者，例如，可以將探頭放入采樣裝置容器，其中該容器至少部分填充了生物流體，將探頭放入液體，并且可以取得探頭讀數，取出探頭并且在適合的時間期限后插入探頭(相同或不同探頭)，且取得另一個探頭讀數。或者，探頭可以保留在容器內，從而能夠多次和/或連續讀取。一定時間期限內葡萄糖水平的下降表示存在細菌。各種設備、裝置和/或方案適合于檢測生物流體中的葡萄糖水平或濃度。本領域中已知示例的適合的裝置500 (包括葡萄糖讀取裝置和葡萄糖測定裝置)并且包括商購裝置，例如購自 LifeScan, Inc. (Milpitas, CA,例如 Glucometer SureStep Flexx Meters,OneToUCh Blood Glucose Meters)、Roche Diagnostics Corp. (Indianapolis, IN,例如 ACCU—CHEK 計量器)、Abbott Laboratories (Abbott Park，IL,例如 OptimumOmega )、Nipro Diagnostics，Inc. (Fort Lauderdale, FL，例如TriieTrack⑧產品)和Bayer (Terrytown, NY,例如 1265 Rapidlab Blood Gas Analyzer)。可以設定葡萄糖讀取裝置和葡萄糖測定裝置以提供例如“通過”和“失敗”結果，例如，其中設定葡萄糖閾值，且一旦檢測到低于該閾值的值，則生物流體單位“失敗”，而如果未檢測到低于該閾值的值，則生物流體單位“通過”。或者或另外，可以設定葡萄糖讀取裝置和葡萄糖測定裝置以測定葡萄糖水平，其中該水平與細菌污染或未污染相關。可以使用一個或多個探頭、傳感器或液體抽取裝置，例如將其置于生物流體容器內或其上。在一些實施方案中，部件例如液體抽取裝置、探頭和/或傳感器是自我包含的并且適合于一次性使用。本發明系統的實施方案可以包括這些預裝配和/或預連接的部件，例如在生物流體進入容器之前。或者或另外，可以在生物流體進入容器過程中或之后裝配、連接和/或使用一種或多種這些部件。
本發明的實施方案適合于各種應用，且所述的生物流體可以來自許多來源，優選哺乳動物。生物流體可以來自受試者例如人(例如提供血液單位或血液成分提取產品的捐獻者)或動物。在一些實施方案中，例如在其中將生物流體作為輸注產品給予或生物流體是臍帶血或包含干細胞的一些實施方案中，該方法優選在維持封閉系統的同時進行。該方法的實施方案可以在任何適合的時間期限內和在任何適合的溫度下進行。例如，可以從受試者中采集生物流體(且如果期望，則加工以便將生物流體分離成一種或多種成分)并且示例地維持在室溫，距采集至多約24小時期限，然后將生物流體保持與清潔劑和細菌生長促進劑，并且測定和/或檢測第一葡萄糖水平。典型地，采集生物流體(例如血液)并且加工以得到分離的成分，例如其中一種分離的成分是PC單位，并且將PC單位(或匯集的PC)維持在第一個容器中，且使部分PC通過第一個容器到達第二個容器，其中它被保持與清潔劑和細菌生長促進劑接觸，優選其中第二個容器包含清潔劑和細菌生長促進齊U，然后使生物流體進入第二個容器。在適合的時間期限后，例如在至少約4小時后(例如在約采集血液24小時內生物流體、例如PC保持與清潔劑和細菌生長促進劑接觸，且適合的時間期限是再經過4小時)，測定和/或檢測第二葡萄糖水平。優選在那些其中生物流體是包含血小板的流體(例如匯集或單一單位的PC)的實施方案中，將與清潔劑和細菌生長促進劑接觸的包含血小板的流體維持在高于室溫的溫度下，持續該適合的時間期限，例如將其維持在約35 °C的溫度。可以在任何適合的時間期限內測定和/或檢測生物流體中的葡萄糖水平或濃度。典型地，在測定和/或檢測第一水平與測定和/或檢測第二水平之間的時間期限是約4-約15小時的范圍，更優選約5-約13小時。優選在一些其中采樣裝置與源容器分離的那些實施方案中，例如源容器不再與采樣容器彼此進行流體溝通，源容器可以以不同于采樣容器的方式加工。例如，在源容器與采樣容器之間插入的導管被密封和切斷后，采樣容器在更有益于使微生物快速生長的條件下(例如貯存在高于環境溫度，例如約35-約37°C的溫度)加工，且源容器可以以更常規的方式加工(例如貯存在約22°C的環境溫度)。下列定義用于本發明。生物流體。生物流體包括任何處理或未處理的與活生物體相關的流體，特別是血液，包括全血、溫血或冷血、臍帶血和貯存或新鮮的血液、處理的血液例如用至少一種生理溶液包括、但不限于鹽水、營養物、添加劑和/或抗凝劑溶液稀釋的血液；血液成分例如血小板濃縮物(PC)、富含血小板的血漿(PRP)、貧血小板血漿(PPP)、不合血小板的血漿、血漿、鮮凍血漿(FFP)、獲自血漿的成分、紅細胞壓積(PRC)、過渡區材料或血沉棕黃層(BC)；來源于血液或血液成分的或來源于骨髓的血液產品；干細胞；分離自血漿和再混懸于生理溶液或冷凍防護的紅細胞流體的；和分離自血漿和再混懸于生理溶液或冷凍防護的流體的血小板。生物流體還包括細胞培養物和包含骨髓抽吸物的生理溶液。生物流體可以已經被處理以除去一些白細胞，然后根據本發明加工。本文所用的血液產品或生物流體指上述成分和通過其他方式得到并且具有類似特性的類似血液產品或生物流體。“單位”是來自捐獻者或來源于一個全血單位的生物流體的量。還可以指單一捐獻過程中抽取的量。典型地，單位的體積是變化的，在患者與患者之間以及捐獻與捐獻之間是有區別的。典型地，可以通過合并4個或4個以上單位匯集或合并多個單位的一些血液成分，特別是血小板和血沉棕黃層。本文所用的術語“封閉的”指能夠采集和加工(且如果期望是操作，例如分離部 分、分離成成分、過濾、貯存和防腐)生物流體,例如捐獻者血液、血樣和/或血液成分,而不危害系統的無菌完整性的系統。最初可以制備封閉系統，或是使用所謂的“無菌對接”裝置連接系統部件得到。示例的無菌對接裝置公開在例如美國專利US 4，507，119,4, 737,214和 4，913，756 中。如果期望，則本發明的實施方案可以包括自動化追蹤和/或自動化檢測方案和設備。例如，一個或多個容器和采樣裝置可以包括具有例如一種或多種如下的信息的標記(例如條形碼標簽)生物流體的來源、血型、所用添加劑、是否達到規定的葡萄糖水平的指示、溫育溫度；且可以追蹤信息、合并測定或檢測的結果并且以無論何種適合的方式提供，例如在至少一種采樣裝置、源容器和貯存容器上指示的(如果期望，以機器可讀形式)和/或作為打印輸出提供。可以將該信息添加到使用者或使用者機構的電子記錄/數據庫中，例如通過當地或通過基于網絡的形式。生物流體采樣裝置優選包含軟包裝容器，典型地由例如常用于生產血袋(例如采集袋和/或隨體袋)的材料制成。本發明的生物流體加工系統的實施方案典型地包含多個導管和容器，優選軟包裝容器，例如血袋(例如采集袋、隨體袋和/或貯存袋)和排氣(空氣或氣體)小袋或袋。在一個實施方案中，本發明的系統包含封閉系統。各種適合的容器和導管是本領域公知的。例如，血液采集和隨體袋以及導管可以由增塑的聚氯乙稀制成。袋和/或導管還可以由例如乙烯丁基丙烯酸酯共聚物(EBAC)樹脂、乙烯甲基丙烯酸酯共聚物(EMAC)樹脂、增塑的超高分子量PVC樹脂和乙烯乙烯基乙酸酯(EVA)制成。袋和/或導管還可以由例如聚烯烴、聚氨基甲酸酯、聚酯和聚碳酸酯制成。本領域中還已知適合的入口、可穿刺隔膜、流量控制裝置(包括夾子、轉移路徑截止器、止回閥和可旋轉閥)和采樣歧管并且可以是商購的。在那些包括白細胞耗盡過濾器的實施方案中，各種白細胞耗盡過濾器適用于本發明，例如，如美國專利US4, 880，548,4, 925，572,5,152, 905和6，074，869中所述。在那些包括排氣口例如氣體入口和/或氣體出口(例如包含居留室和至少一個包含排列在居留室內的多孔膜的排氣口部件)的實施方案中，各種材料適合于用作排氣口部件。適合的部件包括親水性微孔膜和疏水性多孔膜，且排氣口公開在例如美國專利US 5，126，054和5，451，321中。優選當根據封閉的系統使用時，氣體入口和/或氣體出口防止了細菌通過其中，例如氣體入口和氣體出口包括具有細菌封閉孔等級的排氣口部件。下列實施例進一步示例本發明，當然，其不以任何方式限定本發明的范圍。實施例I本實施例顯示葡萄糖測量值可以用于檢測存在的需氧菌和厭氧菌。得到一般如圖I中所示的采樣裝置100。具有約IOmL體積的采樣裝置容器50包含2個片劑，每個片劑包括I. 75mg SPS、TSB、氯化鈣和制備加工試劑。可彎曲的管道30和36各自約2英寸長。將全血采集入包括抗凝劑的采集裝置組并且加工(包括過濾)以得到各容器 中的白細胞耗盡的血細胞濃縮物(PC)單位。24小時后，使用如下細菌以1-lOCFU/mL或100-250CFU/ML的靶接種物接種PC單位。
需氧菌/兼性厭氧菌ATCC# II厭氧菌ATCC#
蠟狀芽孢桿菌7064 產氣莢膜梭狀芽孢桿菌 13124
陰溝腸桿菌29005 粘液真桿菌8486~
大腸埃希氏桿菌25922 痤瘡丙酸桿菌11827
肺炎克雷白氏菌8045 路鄧葡萄球菌49576
銅綠假單胞菌27853 牛鏈球菌33317
豬霍亂沙門氏菌8326 溫和鏈球菌903
粘質沙雷氏菌43862
無乳鏈球菌12927
金黃色葡萄球菌27217
表皮葡萄球菌49134在PC容器與采樣裝置無菌對接后，將約5_6mL的各接種單位置于一般如圖I中所示的采樣裝置內，該過程使用用于厭氧菌的氣體不可滲透容器和用于需氧菌的氣體滲透容器進行，并且取樣以測定氧百分比和葡萄糖水平。在35°C在厭氧和需氧條件下將相應的采樣裝置在攪拌下接種18和24小時，并且取樣以測定18和24小時時的氧百分比和葡萄糖水平。使用根據制造商說明運行的Bayer 1265 Rapidlab Blood GasAnalyzer (Terrytown, NY)測定葡萄糖水平。另外，接種后2小時取樣，并且測定氧百分比和葡萄糖水平。未接種的PC的單位用作對照組。
對接種單位而言在0小時和2小時采樣時間時的葡萄糖水平在約12_28mmol/L的范圍，而在18小時和24小時采樣時間時的葡萄糖水平在約0-約3mmol/L。對對照組而言在0小時和2小時采樣時間時的葡萄糖水平在約12-28mmo 1/L的范圍，而在18小時和24小時采樣時間時的葡萄糖水平在保持在近似的那些范圍。本實施例顯示在接種的單位中，葡萄糖水平隨時間下降，反映出需氧菌和厭氧菌生長。實施例2本實施例顯示葡萄糖測量值可以用于檢測在6-24小時的不同樣品裝置接種時間內需氧菌和厭氧菌的存在。將全血采集入包括抗凝劑的采集裝置組并且加工(包括過濾)以得到各容器中的 白細胞耗盡的血小板濃縮物(PC)單位。24小時后，使用如下細菌以1-lOCFU/mL的靶接種 物接種PC單位。
權利要求
1.用于檢測生物流體中的細菌的方法，該方法包括 (a)將可能包含細菌的生物流體置于容器中，其中該容器包括(i)用于減少血細胞呼吸的清潔劑；和(ii)細菌生長促進劑；和 (b)在一定時間期限內，測定和/或檢測容器內生物流體中的葡萄糖水平，其中在該時間期限內葡萄糖水平的下降表示存在細菌。
2.權利要求I的方法，其中生物流體包含含有血小板的流體。
3.權利要求I的方法，其中生物流體包含含有干細胞的流體。
4.權利要求I的方法，其中生物流體包含細胞培養物。
5.權利要求1-4任一項的方法，包括測定和/或檢測容器中的第一葡萄糖水平，和在測定和/或檢測該第一水平的約4-約15小時內；測定和/或檢測容器中的第二葡萄糖水平。
6.權利要求1-5任一項的方法，包括從受試者得到生物流體；和在從受試者得到生物流體的約24小時或更短時間內使部分生物流體進入容器，其中使該部分生物流體保持與清潔劑和細菌生長促進劑接觸。
7.權利要求1-6任一項的方法，其中生物流體包含白細胞耗盡的流體。
8.用于檢測生物流體中的細菌的系統,包括 (a)包含適合于包含生物流體的容器的生物流體采樣裝置，所述容器包含葡萄糖入口，其中該容器包含(i)有效量的用于減少血細胞呼吸的清潔劑；和(ii)有效量的細菌生長促進劑；和 (b)葡萄糖測定裝置和/或葡萄糖讀取裝置，其中所述裝置適合于在一定時間期限內測定或檢測生物流體中的第一葡萄糖水平和生物流體中的第二葡萄糖水平，其中在該時間期限內葡萄糖水平的下降表示存在細菌。
全文摘要
提供了檢測生物流體中的細菌的方法，該方法包括將可能包含細菌的生物流體置于容器中，該容器包括用于減少血細胞呼吸的清潔劑和細菌生長促進劑；和在一定時間期限內，測定和/或檢測容器內生物流體中的葡萄糖水平。還提供了實施該方法的系統。
文檔編號C12Q1/04GK102747136SQ20121011892
公開日2012年10月24日 申請日期2012年4月20日 優先權日2011年4月21日
發明者C·L·C·關 申請人:帕爾公司