專利名稱：一種解淀粉產(chǎn)乳酸固氮的酵母菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種新的酵母菌，特別涉及一種產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
酵母菌是一群單細胞真核微生物，以其可以在富糖環(huán)境生長、兼性好氧、在缺氧環(huán)境中可產(chǎn)生酒精和二氧化碳而著稱。常見用于酒類發(fā)酵和面包、饅頭制作。本發(fā)明酵母可在厭氧條件下以淀粉為碳源分泌乳酸、可以在好氧條件下自生固氮，具有廣泛的應(yīng)用價值。乳酸是一種無毒無污染的天然化合物，用途十分廣泛。目前用于乳酸發(fā)酵的生產(chǎn)菌種主要是乳酸細菌和米根霉。在乳酸發(fā)酵過程中，PH值會隨著乳酸的生成而逐漸降低，而低PH值會抑制細菌和根霉菌的生長和發(fā)酵能力(張勤等，代謝工程改造野生耐酸酵母生產(chǎn)L-乳酸.生物工程學報，2011.27(7):1024-1031)。酵母菌具備更好的耐酸特性，可在強度更高的酸性條件下生存和 生長，因此近些年來，科學家開始了用基因工程方法構(gòu)建乳酸產(chǎn)生酵母菌的研究(崔黎等，乳酸酵母菌的研究現(xiàn)狀及其在飼料添加劑中的功能.食品與發(fā)酵工業(yè)，2009 (5): 118-121)，但還處于實驗研究階段，尚未見有酵母用于乳酸生產(chǎn)的報道。已發(fā)現(xiàn)個別酵母菌可以水解利用淀粉(Chi, Z.，et al., Saccharomycopsis fibuligera andits applications in biotechnology.Biotechnology Advances, 2009.27(4):423-431),但卻未見既解淀粉又產(chǎn)乳酸酵母菌的報道。有研究稱解淀粉乳酸細菌可降低乳酸生產(chǎn)成本(趙國振等，解淀粉乳酸細菌在L -乳酸發(fā)酵生產(chǎn)中的應(yīng)用.中國生物工程雜志，2009.29(7):134-139.)，類似地，解淀粉產(chǎn)乳酸酵母的應(yīng)用，也將大大降低乳酸發(fā)酵中因淀粉預(yù)糖化工序所帶來的高成本。單細胞蛋白，亦稱微生物蛋白或菌體蛋白，是指通過人為方式選擇性培養(yǎng)適宜種類的微生物而獲得的微生物來源的蛋白質(zhì)。由于單細胞蛋白的蛋白質(zhì)含量高、且含有人或動物的多種限制性或必需氨基酸，因此具有比一般糧食更高的生物學效價(齊銀霞等，利用廢棄資源發(fā)酵生產(chǎn)單細胞蛋白的研究進展.食品工業(yè)科技，2009 (5): 366-369)，是目前公認的最具前景的蛋白質(zhì)新資源，對解決世界蛋白質(zhì)資源不足問題有重要的補充作用(董婷婷等，可食性單細胞蛋白的研究進展.食品工業(yè)科技，2012.33(3):417-421)。酵母菌由于其高度安全的可食性、細胞體積大易于分離等優(yōu)勢，因而成為細胞蛋白生產(chǎn)的最主要的菌種(劉寧等，單細胞蛋白概況及其應(yīng)用的探討.農(nóng)業(yè)科技與裝備，2007(6): 50-52)。但卻未見有固氮酵母用于單細胞蛋白生產(chǎn)的任何報道。本發(fā)明酵母來源于果蔬發(fā)酵，是天然可食酵母。已發(fā)現(xiàn)其可以固氮，無需添加有機氮或無機氮就可良好生長，因此比起普通酵母菌將會因培養(yǎng)成本降低而在單細胞蛋白生產(chǎn)中具有更強的競爭優(yōu)勢。微生物肥料是指含有活體微生物的制品，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，能夠獲得特定的肥料效應(yīng)，其中活體微生物起關(guān)鍵作用。目前應(yīng)用于微生物肥料的活體微生物均為原核生物，如根瘤菌、固氮菌、固氮藍藻等(吳建峰，林先貴，我國微生物肥料研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢.土壤，2002.34(2):68-73.)，尚未見真核生物如酵母菌固氮的報道，本發(fā)明提供的酵母菌填補了這個空白。原核固氮微生物不能耐高溫和干燥處理，在存儲和運輸上十分不便；而酵母菌可以形成子囊孢子抗熱抗干燥，可以制成粉劑而方便儲運，因此在生產(chǎn)中具有更大優(yōu)勢。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題在于一種新的產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌及其應(yīng)用，該酵母不僅產(chǎn)乳酸，且可解淀粉作為碳源和能源，同時可以固定大氣氮；可應(yīng)用于乳酸發(fā)酵而降低乳酸發(fā)酵成本，或者可以作為單細胞蛋白的生產(chǎn)菌種，或者可以作為微生物氮肥的活體微生物種源，具有廣泛的應(yīng)用價值。本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn):—種產(chǎn)乳酸解淀粉固氮的酵母菌，該酵母菌屬于熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC M2011495。所述的酵母菌可以發(fā)酵糖類分泌胞外乳酸。所述的酵母菌可以可溶性淀粉作為唯一的碳源和能源生長。所述的酵母菌可自生固氮。所述的酵母菌作為發(fā)酵生產(chǎn)乳酸的菌株的應(yīng)用。所述的酵母菌作為固氮菌肥中的微生物活體種源的應(yīng)用。所述的酵母菌作為單細胞蛋白生產(chǎn)菌株的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果:本發(fā)明提供的產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌，是一株具有特殊能力的新型酵母，其菌落顏色乳白色，具有肥厚濕潤粘稠不透明等酵母菌特有的菌落特點；細胞個體橢圓到球形可以出芽繁殖，具有酵母菌特有的形態(tài)。序列比對分析發(fā)現(xiàn)該新型菌株與已知的熱帶假絲酵母的相應(yīng)序列的相似性為99.0%,初步認定其屬于熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)。本發(fā)明提供的產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌，在玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上可以形成假菌絲，是假絲酵母的特征之一；在該培養(yǎng)基上還可以形成子囊孢子，說明該菌株具有有性生殖能力，是子囊菌的特點之一。本發(fā)明提供的產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌，能以淀粉作為唯一的碳源和能源生長且在無氧條件下分泌乳酸。這一特點若用于乳酸發(fā)酵，較之于只能發(fā)酵低分子糖的乳酸細菌，可以降低花在淀粉糖化工序上所產(chǎn)生的成本。本發(fā)明提供的產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌，具有自生固氮能力，這一特點若用于單細胞蛋白生產(chǎn)，較之于普通酵母菌，無需添加氮源從而降低生產(chǎn)成本；同時該特點也可用于微生物氮肥的生產(chǎn)。本發(fā)明提供的產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌，在厭氧條件下可以向細胞外分泌酸性物質(zhì)，使含有溴甲酚紫PH指示劑的培養(yǎng)基變黃。收集其分泌的胞外酸，采用特異性的乳酸脫氫酶法和對羥基聯(lián)苯法進行鑒定，表明胞外酸中含有乳酸。這表明該酵母菌可應(yīng)用于乳酸發(fā)酵的生產(chǎn)。保藏說明本發(fā)明所述的解淀粉產(chǎn)乳酸熱帶假絲酵母菌進行了下述保藏:保藏時間:2011年12月31日，保藏地點:中國.武漢.武漢大學，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，CCTCC ;保藏號為CCTCC NO:M2011495。保藏的培養(yǎng)物名稱:熱帶假絲酵母解淀粉產(chǎn)乳酸新變種ALAY-1 ；
Candida tropicalis var.Amlolytic Acidum Lacteolus ALAY—1。


圖1為CCTCC M 2011495在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)圖；圖2為CCTCC M 2011495在淀粉培養(yǎng)基上的細胞和芽殖子在顯微鏡下的照片；圖3為CCTCC M 2011495玉米淀粉培養(yǎng)基上形成的假菌絲在顯微鏡下的照片；圖4為CCTCC M 2011495玉米淀粉培養(yǎng)基上形成的子囊孢子在顯微鏡下的照片；圖5為基于ITS-5.8S rDNA序列的系統(tǒng)進化樹；圖6為CCTCC M 2011495以淀粉為唯一碳源和能源的菌苔生長測試結(jié)果；圖7為CCTCC M 2011495固氮能力的單菌落生長測試結(jié)果；圖8為CCTCC M 2011495厭氧發(fā)酵液的乳酸脫氫酶檢測結(jié)果；圖9為CCTCC M 2011495厭氧 發(fā)酵液的對羥基聯(lián)苯法顯色結(jié)果；圖10為CCTCC M 2011495厭氧發(fā)酵液的對羥基聯(lián)苯法顯色溶液的波長掃描曲線。
具體實施例方式下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。以下對本發(fā)明的CCTCC M 2011495菌株的篩選和鑒定過程作進一步詳細描述，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。1.所用培養(yǎng)基特征、用途和配方基本無機鹽:作為下述相關(guān)合成培養(yǎng)基的共同組分，其組成為(質(zhì)量比)=K2HPO4
0.2% ；CaCl2 0.02% ；MgS04.7H20 0.02% ；NaCl 0.005%,自來水配制。I)菌源富集培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基，模仿我國傳統(tǒng)漿水發(fā)酵模式設(shè)計培養(yǎng)基，用于自然界解淀粉酵母的富集；其組成為(質(zhì)量比):普通小麥面粉2%，食鹽1%，自來水配制，自然pH。2)淀粉合成培養(yǎng)基:以可溶性淀粉為唯一碳源和能源，以溴甲酚紫作PH指示劑，微生物一旦發(fā)酵產(chǎn)酸，其菌落周圍的培養(yǎng)基顏色則變黃；用于解淀粉產(chǎn)酸酵母菌的篩選，即解淀粉乳酸菌的初篩。其組成為(質(zhì)量比):基礎(chǔ)無機鹽；可溶性淀粉2% ；NH4Cl 0.3% ;瓊脂2% ；自來水配制；自然pH ;添加0.1%溴甲酚紫溶液200ul。3)加富培養(yǎng)基:含有最適碳源和銨鹽并添加酵母膏，用于菌株一般形態(tài)觀察和厭氧產(chǎn)酸驗證。其組成為(質(zhì)量比):基礎(chǔ)無機鹽；蔗糖2% ;酵母膏0.2% ；NH4Cl 0.3%，瓊脂2% ；自來水配制；pH 6。4)無氮合成培養(yǎng)基本培養(yǎng)基為不含任何含氮化合物的合成培養(yǎng)基，目的在于檢驗新型酵母菌是否具有固定大氣氮的能力。其組成為，基礎(chǔ)無機鹽；蔗糖2%，瓊脂2% ；自來水配制；pH 6。5)玉米淀粉培養(yǎng)基:按照常規(guī)方法，用此培養(yǎng)基誘導(dǎo)假絲和子囊孢子的形成。其組成為(質(zhì)量比):玉米粉6%，瓊脂2%，自來水配制，自然pH。2.菌源采集和富集培養(yǎng):取市售葡萄用自來水清洗后晾干水分，剝?nèi)?0-20顆葡萄皮置于無菌廣口瓶內(nèi)；采取新鮮的胡蘿卜葉子250g左右，自來水清洗、晾干后置于同一廣口瓶內(nèi)作為解淀粉產(chǎn)乳酸菌的混合菌源。配制菌源富集培養(yǎng)基，充分混勻后煮沸糊化，自然冷卻至80°C左右，注入含有菌原的廣口瓶，淹沒廣口瓶中的混合菌源，加蓋并密封，于25 28°C室溫下自然發(fā)酵，直至蔬菜葉變?yōu)辄S棕色，面粉漿水變清亮。歷時約3周，得到富集的培養(yǎng)物。所得到的富集的培養(yǎng)物中包含了富集得到的乳酸菌源、酵母菌源，在此期間，不排除乳酸菌和酵母菌之間可能會發(fā)生基因重組。3.解淀粉酵母菌的初篩將富集培養(yǎng)物稀釋涂布在淀粉合成培養(yǎng)基的平板上，用石蠟?zāi)っ芊馀囵B(yǎng)皿四周，28°C培養(yǎng)，不定時觀察培養(yǎng)基顏色變化。挑取使培養(yǎng)基變黃的菌落進行顯微鏡檢查，從中檢出了一株具有芽殖子的菌株，確定為酵母菌。并在蔗糖酵母膏加富培養(yǎng)基上對該酵母菌進行劃線法分離，獲得了該酵母菌的純培養(yǎng)。該酵母菌即為CCTCC M 2011495。4.酵母菌CCTCC M 2011495的形態(tài)學鑒定為了對該菌進行分類，首先對分離的酵母菌進行了基本的形態(tài)學鑒定。具體方法和結(jié)果如下:4.1菌落形態(tài)和細胞形態(tài)按照常規(guī)操作，稀釋涂布法接種CCTCC M 2011495于加富培養(yǎng)基(培養(yǎng)基3))上，28°C培養(yǎng)3天后觀察單菌落形態(tài)如圖1所示，可見該菌菌落呈乳白色，直徑3 5mm左右，菌落肥厚飽滿，濕潤不透明，符合酵母菌菌落特征。顯微鏡下觀察培養(yǎng)物的形態(tài)，結(jié)果如圖2所示。可見該菌株細胞呈球形至橢圓形，有芽殖子生成。可以進行單邊和多邊芽殖。4.2子囊孢子和假菌絲的觀察鑒定按照經(jīng)典試驗方法(李明霞，付秀輝，盧鄉(xiāng)懷.現(xiàn)代酵母菌分類鑒定方法與新技術(shù).微生物學通報，1992，19:56-57)，在玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上采用蓋玻片法培養(yǎng)該菌，顯微鏡下觀察形態(tài)，結(jié)果如圖3所示。可見該菌株產(chǎn)生了假菌絲，是假絲酵母的特征之一。同樣地，發(fā)現(xiàn)該菌株在玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上也形成了子囊孢子，如圖4所示，說明該菌株具有有性生殖能力，是子囊菌的特征之一。5.菌株的分子生物學分類鑒定:ITS_5.8S rDNA序列分析在編碼rRNA的rDNA轉(zhuǎn)錄區(qū)中有3個區(qū)域，18S、5.8S和28S，依序串聯(lián)在一起組成一個大的轉(zhuǎn)錄單元。每個區(qū)域之間由間隔序列(ITS)相連，連接18S-5.8S和5.8S-28S的ITS分別稱為ITSl和ITS2。5.8S rDNA位于2個ITS之間。由于ITS區(qū)不加入成熟核糖體，所以受到的選擇壓力較小，進化速率快，在絕大多數(shù)的真核生物中表現(xiàn)出極為廣泛的序列多態(tài)性，因而廣泛用于真核生物親緣關(guān)系和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的分析。將菌株CCTCC M 2011495送北京三博遠志生物技術(shù)公司進行ITS-5.8SrDNA序列擴增和測序分析，獲得序列如SEQ.1D.N0.1所示。該序列已提交至NCBI數(shù)據(jù)庫，并獲得GenBank 序列號(accession number)為 JQ951603。借用NCBI的BLAST分析工具，將JQ951603序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的其他DNA序列進行序列比對分析，發(fā)現(xiàn)該序列與多株已知的熱帶假絲酵母對應(yīng)序列覆蓋率高達96%以上，且相似性高達99%。 借用mega軟件構(gòu)建依賴于ITS-5.8S rDNA序列的系譜樹狀圖，并計算菌株間的序列相似性，結(jié)果如圖5所示。該結(jié)果表明，菌株CCTCC M 2011495，即圖中命名為 CCTCC M 2011495 (JQ951603)的比對 lanxianyong79@yaho0.com.cn 菌株，與已知的熱帶假絲酵母(Candida tropicalis voucher MCCC2E00325 (EF196807))的 ITS-5.8S rDNA 序列相似性高達99.0%，沒有大的差異。樹狀圖中涉及的菌株，全部屬于熱帶假絲酵母同一個種。由此推定菌株CCTCC M 2011495可能是熱帶假絲酵母的一個新變種。6.對酵母菌CCTCC M 2011495的解淀粉能力的驗證為了驗證所獲菌株的解淀粉能力，采用去掉溴甲酚紫的淀粉合成培養(yǎng)基(即不添加溴甲酚紫的培養(yǎng)基2)，并分別采用碳源為，可溶性淀粉、蔗糖(作為陽性對照)和滅菌水(作為陰性對照)，劃線接種后在好氧條件下于28°C培養(yǎng)，對所獲酵母菌進行淀粉利用能力的檢測。檢測 結(jié)果如圖6所示，可見在無碳陰性對照平板上沒有生長跡象；在淀粉平板和蔗糖(陽性對照)平板上均有生長。說明所分離的酵母菌CCTCC M 2011495可以利用可溶性淀粉作為唯一碳源和能源良好生長。7.對酵母菌CCTCC M 2011495的固氮能力的驗證為了驗證所獲菌株的自生固氮能力，以含有氯化銨的合成培養(yǎng)基(培養(yǎng)基4))做陽性對照，并去掉培養(yǎng)基4)當中的蔗糖作為無碳無氮培養(yǎng)基作為陰性對照，采用無氮合成培養(yǎng)基4)，將酵母菌洗滌后稀釋傾倒平板后在好氧條件下于28°C培養(yǎng)，對新型酵母菌進行固氮能力的測試。結(jié)果如圖7所示，可見在陰性對照平板上因為無碳源而沒有生長跡象；而在陽性對照(含銨鹽、蔗糖)和無氮培養(yǎng)基(含蔗糖無氮)上均有生長，說明酵母菌CCTCC M 2011495的確可以自生固氮，即可固定大氣氮作為其氮源進行生長繁殖。8.對酵母菌CCTCC M 2011495的產(chǎn)乳酸的鑒定依據(jù)乳酸脫氫酶和對羥基聯(lián)苯顯色兩種乳酸特異的定性反應(yīng)，對初篩所得解淀粉產(chǎn)酸酵母菌的產(chǎn)酸種類進行鑒定。8.1乳酸脫氫酶法鑒定胞外酸借用乳酸脫氫酶(LDH)催化乳酸和氧化型輔酶I(NAD+)生成的還原型輔酶I(NADH)在340nm處有特異吸收峰的特點，測定NADH的OD34tl隨時間的量變曲線，進而判斷體系中是否有乳酸存在。配制加富培養(yǎng)基3)，置于抽濾瓶中連接真空泵，搖晃脫氣除氧后分裝于三角瓶。接種CCTCC M 2011495，覆蓋一層滅菌液體石蠟達到厭氧狀態(tài)，28°C靜置發(fā)酵。以啤酒酵母作為體系陰性對照。發(fā)酵5-7天后，離心棄菌體，取上清液調(diào)節(jié)pH至豬心源L-乳酸脫氫酶(LDH)的最適pH8.8左右；再次離心棄沉淀，取上清液加入NAD+和少量LDH混勻，立即檢測并繪制“OD34tl-時間”關(guān)系曲線。CCTCC M 2011495厭氧發(fā)酵液的乳酸脫氫酶紫外檢測結(jié)果如圖8所示，從“0D34(1-時間”關(guān)系曲線可見，NADH的生成曲線表現(xiàn)為典型的酶促曲線，說明菌株的胞外發(fā)酵液在乳酸脫氫酶作用下產(chǎn)生了還原型NADH ;而對照菌株啤酒酵母則沒有NADH的生成。這表明啤酒酵母不產(chǎn)乳酸而CCTCC M2011495所產(chǎn)酸中含有乳酸。8.2對羥基聯(lián)苯法鑒定胞外乳酸
對羥基聯(lián)苯法對乳酸具有良好的反應(yīng)顯色特異性。在去除蛋白質(zhì)和糖類的溶液中，乳酸與濃硫酸共熱脫水變成乙醛，在銅離子的存在下乙醛與對羥基聯(lián)苯反應(yīng)生成紫紅色化合物。取CCTCC M 2011495的厭氧發(fā)酵液并離心棄去酵母細胞沉淀，取發(fā)酵上清液于潔凈干燥試管中，按照梁瓊等報道的方法(梁瓊等，對羥基聯(lián)苯法定量測定發(fā)酵液中的乳酸，食品科學，2008 (6):357-360)進行乳酸測定。自來水替換發(fā)酵液上清和指示劑做體系陰性對照，用啤酒酵母發(fā)酵液作為代謝物對照，以稀乳酸作為陽性對照。各反應(yīng)試管顏色變化如圖9所示，其中I為純水替代發(fā)酵液上清，2為純水替代對羥基聯(lián)苯試劑，3為啤酒酵母發(fā)酵液，4為CCTCC M 2011495發(fā)酵液上清，5為乳酸水溶液替代發(fā)酵液。與陰性對照1、2相比，啤酒酵母發(fā)酵液3無乳酸的產(chǎn)生所以未顯示，而CCTCC M2011495的發(fā)酵液上清4的顏色變?yōu)樽仙c乳酸水溶液5同樣變色，說明發(fā)酵液上清中有乳酸存在。此結(jié)論與乳酸脫氫酶法檢測的結(jié)論一致。對羥基聯(lián)苯與發(fā)酵液反應(yīng)顯色溶液的波長掃描曲線如圖10所示，可見顯色物在565nm附近具有最大吸收峰，這與對羥基聯(lián)苯與乳酸反應(yīng)產(chǎn)物的理論吸收峰特征一致，進一步支持上述結(jié)論。經(jīng)過2種不同方法的乳酸檢測，結(jié)果表明所分離的CCTCC M 2011495酵母菌在厭氧發(fā)酵條件下能夠向胞外分泌乳酸。綜上，通過菌落形態(tài)觀察、細胞個體形態(tài)觀察、假菌絲培養(yǎng)觀察和ITS-5.8S rDNA序列比對分析，結(jié)果表明，該CCTCC M 2011495為熱帶假絲酵母的一個新變種。而且該酵母能夠以淀粉為唯一碳源和能源培養(yǎng)，在厭氧條件下能夠向細胞外分泌乳酸，在好氧條件下可以固氮生長。基于以上特點，該酵母能夠應(yīng)用于如下三個方面，且比現(xiàn)有菌株更具有顯著的優(yōu)勢:首先，該菌株能利用可溶性淀粉作為唯一碳源和能源厭氧條件下發(fā)酵分泌乳酸，與現(xiàn)有的以低分子糖作為碳源的乳酸發(fā)酵菌株相比，可以省去發(fā)酵前對淀粉進行糖化的步驟，因此顯著地降低發(fā)酵成本。此外，如前述由于酵母菌在食用上的安全性和菌體蛋白的高含量和高營養(yǎng)效價，酵母菌成為單細胞蛋白生產(chǎn)的最主要的微生物菌種。本發(fā)明酵母菌也可作為單細胞蛋白生產(chǎn)的菌株。既然該酵母不需要專門添加有機氮或無機氮就可以良好生長，因此比起其他單細胞蛋白用酵母菌，將會因培養(yǎng)成本降低而具有更強的競爭優(yōu)勢。第三，基于該酵母具有固氮能力，其可作為固氮菌肥料中的自生固氮活性微生物。鑒于該酵母可以形成子囊孢子，具有耐熱耐干旱等抗逆境的能力，可以制成粉劑進行儲運，解決了原核固氮微生物不能耐高溫和干燥處理，在儲運上造成不便的困難。因此在生產(chǎn)中比原核自生固氮菌更有優(yōu)勢。綜上，本發(fā)明提供的產(chǎn)乳酸解淀粉固氮酵母菌，該酵母不僅產(chǎn)乳酸，而且可以分解淀粉作為碳源和能源， 同時可以固定大氣氮。可應(yīng)用于乳酸發(fā)酵和單細胞蛋白的生產(chǎn)而降低成本，或者可以作為微生物固氮菌肥的活體種源。該酵母具有廣闊的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一種產(chǎn)乳酸解淀粉固氮的酵母菌，其特征在于，該酵母菌屬于熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC M2011495。
2.如權(quán)利要求1所述的酵母菌，其特征在于，該酵母可以發(fā)酵糖類分泌胞外乳酸。
3.如權(quán)利要求1或2所述的酵母菌，其特征在于，該酵母可以可溶性淀粉作為唯一的碳源和能源生長。
4.如權(quán)利要求1或2所述的酵母菌，其特征在于，該酵母可自生固氮。
5.如權(quán)利要求1 4任何一項所述的酵母菌作為發(fā)酵生產(chǎn)乳酸的菌株的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求1 4任何一項所述的酵母菌作為固氮菌肥中的微生物活體種源的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求1 4任何一項所述的酵母菌作為單細胞蛋白生產(chǎn)菌株的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種解淀粉產(chǎn)乳酸固氮的酵母菌及其應(yīng)用，該酵母菌屬于熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC M 2011495。該酵母菌不僅可水解淀粉，還可分泌乳酸、自生固氮，成為目前報道的首例多功能型新型酵母菌株；可以應(yīng)用于乳酸發(fā)酵、單細胞蛋白生產(chǎn)，或作為微生物氮肥中的活性菌源；在食品工業(yè)、農(nóng)業(yè)、制藥等方面，具有極為廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號C12P7/56GK103103137SQ20121015418
公開日2013年5月15日 申請日期2012年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月17日
發(fā)明者楊水云, 王玲, 吳耀彬, 林杰, 黃敬亮, 龍建綱, 劉健康 申請人:西安交通大學