專利名稱：醛縮酶、編碼它們的核酸及制備和使用它們的方法
醛縮酶、編碼它們的核酸及制備和使用它們的方法本申請是分案申請，原申請的申請日為2007年3月7日、申請?zhí)枮?00780016408.6(PCT/US2007/063515)、發(fā)明名稱為“醛縮酶、編碼它們的核酸及制備和使用它們的方法”。相關(guān)申請的交叉參考本申請要求2006年3月7日提交的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/780，515的權(quán)益。發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及分子和細(xì)胞生物學(xué)及生物化學(xué)。更特別地，本發(fā)明涉及具有醛縮酶活性的多肽，編碼這些多肽的多核苷酸，以及制造和使用這些多核苷酸和多肽的方法。
背景技術(shù)：
Monatin是具有如下化學(xué)式的高強(qiáng)度甜味劑
權(quán)利要求
1.分離的，合成的或重組的核酸，其編碼具有醛縮酶活性的多肽，所述核酸為(a)SEQ ID NO: K SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:5、SEQ ID NO:SEQ ID NO:9、SEQ IDN0:11、SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:17、SEQ ID N0:19、SEQ ID N0:21、SEQ IDNO:23^SEQ ID NO:25^SEQ ID NO:27^SEQ ID NO:29^SEQ ID N0:31、SEQ ID NO:33^SEQ IDNO:35^SEQ ID NO:37^SEQ ID NO:39^SEQ ID N0:41、SEQ ID NO:43^SEQ ID NO:45^SEQ IDNO:47^SEQ ID NO:49^SEQ ID N0:51、SEQ ID NO:53^SEQ ID NO:55^SEQ ID NO:57^SEQ IDNO:59^SEQ ID N0:61、SEQ ID NO:63^SEQ ID NO:65^SEQ ID NO:67^SEQ ID NO:69^SEQ IDN0:71、SEQ ID N0:73、SEQ ID N0:75、SEQ ID N0:77、SEQ ID N0:79、SEQ ID N0:81、SEQID NO:83^SEQ ID NO:85^SEQ ID NO:87^SEQ ID NO:89^SEQ ID N0:91、SEQ ID NO:93^SEQID NO:95^SEQ ID NO:97^SEQ ID NO:99^SEQ ID NO:101、SEQ ID N0:103、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO: 107、SEQ IDN0:109、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 115、SEQ IDNO: 117、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 125、SEQ IDNO:127、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 137、SEQ IDNO:139、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:143、SEQ IDNO:145、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 159、SEQ IDNO:161、SEQ IDNO:163、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 179、SEQ IDNO:181、SEQ IDNO:183、SEQ ID NO:185^SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:189^SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 197、SEQ IDNO:199、SEQ ID N0:201、SEQ ID N0:203、SEQ IDNO:205^SEQ ID NO:207^SEQ ID NO:209^SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:215、SEQ IDNO:217、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:225、SEQ IDNO:227^SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:233、SEQ IDNO:235、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:239^SEQ ID NO:241、SEQ ID NO:243^SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:247^SEQ IDNO:249^SEQ ID NO:251、SEQ IDNO:253、SEQ ID NO:255^SEQ ID NO:257^SEQ ID NO:259^SEQID NO:261、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:267^SEQ ID NO:269^SEQ IDNO:27USEQ ID NO:273^SEQ ID N0:277、SEQ ID NO:279^SEQ ID N0:281、SEQ ID NO:283^SEQ IDNO:285^SEQ ID N0:287、SEQ ID NO:289^SEQ IDNO:29U SEQ ID NO:293^SEQ ID N0:295、SEQ ID NO:297、SEQ ID NO:299、SEQ ID NO:301、SEQ ID NO:303、SEQ ID NO:305、SEQ IDNO:307^SEQ IDNO:309^ SEQ ID N0:311、SEQ ID N0:313、SEQ ID N0:315、SEQ ID N0:317、SEQ ID N0:319、SEQ ID N0:321、SEQ ID N0:323、SEQ ID N0:325、SEQ IDN0:327、SEQ IDNO:329^SEQ ID N0:331、SEQ ID NO:333^SEQ ID N0:335、SEQ ID NO:336^SEQ ID NO:337或 SEQ ID NO :338 ；(b)編碼SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ IDN0:10、SEQID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ IDN0:20、SEQ ID NO:22、SEQID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ IDN0:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQID NO:36^SEQ ID NO:38^SEQ IDNO:40^SEQ ID NO:42^SEQ ID NO:44^SEQ ID NO:46^SEQID NO:48^SEQ IDN0:50、SEQ ID NO:52^SEQ ID NO:54^SEQ ID NO:56^SEQ ID NO:58^SEQIDNO:60^SEQ ID N0:62、SEQ ID NO:64^SEQ ID NO:66^SEQ ID NO:68^SEQ IDNO:70^SEQ IDNO:72^SEQ ID NO:74^SEQ ID NO:76^SEQ ID NO:78^SEQ IDNO:80^SEQ ID NO:82^SEQ IDNO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:90,SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ IDNO:96、SEQ ID NO:98、SEQ IDNO:100,SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:106、SEQID NO:108,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:112,SEQ ID NO:I14,SEQ ID NO:116,SEQ IDN0:118、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:128、SEQ IDNO:130、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:134、SEQ IDNO:136, SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:150、SEQ IDNO:152、SEQ IDNO:154, SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 170、SEQ IDN0:172、SEQ IDNO:174、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:184、SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 188、SEQ IDN0:190、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 194、SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:200、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:206、SEQ IDNO:208, SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:216、SEQ IDNO:218、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:224、SEQ IDNO:226,SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:230、SEQ ID NO:232、SEQ ID NO:234、SEQ ID NO:236、SEQ ID NO:238、SEQ IDNO:240、SEQ ID NO:242、SEQ IDNO:244、SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:250、SEQID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:260,SEQ IDNO:262,SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:272、SEQ IDNO:274、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ IDNO:282,SEQ ID NO:284、SEQ ID NO:286、SEQ ID NO:288、SEQ ID NO:290、SEQ ID NO:292、SEQ ID NO:294、SEQ ID NO:296、SEQ IDNO:298、SEQ IDNO:300,SEQ ID NO:302、SEQ ID NO:304、SEQ ID NO:306、SEQ ID NO:308、SEQ ID NO:310、SEQ ID NO:312、SEQ ID NO:314、SEQ ID NO:316、SEQ IDNO:318, SEQ IDNO:320、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324、SEQ ID NO:326、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:330、SEQ ID NO:332 或 SEQ ID NO:334 的序列的核酸； (c)與(a)或(b)互補(bǔ)的核酸序列。
2.權(quán)利要求I所述的核酸，其中所述醛縮酶活性是丙酮酸醛縮酶活性。
3.權(quán)利要求I所述的核酸，其中所述醛縮酶活性是HMG醛縮酶活性。
4.權(quán)利要求I所述的核酸，其中所述醛縮酶活性是KHG醛縮酶活性。
5.表達(dá)盒，其包括權(quán)利要求I中所述的序列。
6.權(quán)利要求5所述的表達(dá)盒，其中所述表達(dá)盒是載體。
7.權(quán)利要求6所述的表達(dá)盒，其中所述載體是克隆載體。
8.權(quán)利要求7所述的表達(dá)盒，其中所述克隆載體是病毒載體、質(zhì)粒或人工染色體。
9.權(quán)利要求8所述的表達(dá)盒，其中所述病毒載體是噬菌體。
10.權(quán)利要求9所述的表達(dá)盒，其中所述噬菌體是噬菌粒或細(xì)菌噬菌體。
11.權(quán)利要求8所述的表達(dá)盒,其中所述質(zhì)粒是粘粒。
12.權(quán)利要求11所述的表達(dá)盒，其中所述粘粒是F粘粒。
13.權(quán)利要求8所述的表達(dá)盒，其中所述病毒載體選自腺病毒載體或反轉(zhuǎn)錄病毒載體，或所述人工染色體包括細(xì)菌人工染色體、細(xì)菌噬菌體Pl-衍生的載體或哺乳動物人工染色體。
14.轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，其包括權(quán)利要求I中所述的序列，或包括權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)所述的表達(dá)盒，其中所述細(xì)胞選自細(xì)菌細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞、真菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞或植物細(xì)胞。
15.分離的、合成的或重組的多肽，其具有醛縮酶活性，所述多肽為下列氨基酸序列中所述的多肽(a)氨基酸序列SEQ ID NO: 2,SEQ ID NO:4,SEQ ID N0:6、SEQ ID NO:8,SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:46,SEQ ID NO:48,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:52,SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:66,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:70,SEQ ID NO:72,SEQ ID NO:74,SEQ ID NO:76,SEQ ID NO:78,SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:88,SEQ ID NO:90,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:94,SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ IDNO:106、SEQ IDNO:108, SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ IDNO:126, SEQ IDNO:128、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:138、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 142、SEQ IDNO:144, SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 148、SEQ IDNO:150、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:160、SEQ IDN0:162、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 170、SEQ IDNO:172、SEQ ID NO:174、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:178、SEQ IDN0:180、SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:184、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:192、SEQ IDNO:194,SEQ ID NO:196,SEQ IDNO:198,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:202,SEQ ID NO:204,SEQID NO:206,SEQ ID NO:208,SEQ ID NO:210,SEQ ID N0:212、SEQ ID N0:214、SEQ IDN0:216、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:226、SEQ IDNO:228、SEQ ID NO:230、SEQ ID NO:232、SEQ IDNO:234, SEQ ID NO:236、SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:240、SEQ ID NO:242、SEQ ID NO:244、SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:248、SEQ IDNO:250、SEQ IDNO:252, SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:260、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:268、SEQ IDNO:270, SEQ IDNO:272、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:284、SEQ ID NO:286、SEQ ID NO:288、SEQ IDNO:290, SEQ ID NO:292、SEQ ID NO:294、SEQ IDNO:296、SEQ ID NO:298、SEQ ID NO:300、SEQ ID NO:302、SEQ ID NO:304、SEQ ID NO:306、SEQ IDNO:308, SEQ ID NO:310、SEQ ID NO:312、SEQ ID NO:314、SEQ ID NO:316、SEQ IDNO:318、SEQ ID NO:320、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324、SEQ IDNO:326,SEQ ID NO:328、SEQ ID NO: 330、SEQ ID NO:332 和/或 SEQ ID NO:334 ； (b)由權(quán)利要求I所述核酸編碼的氨基酸序列。
16.權(quán)利要求15所述的分離的、合成的或重組的多肽，其中所述醛縮酶活性包括丙酮酸醛縮酶活性。
17.權(quán)利要求15所述的分離的、合成的或重組的多肽，其中所述醛縮酶活性包括HMG醛縮酶活性。
18.權(quán)利要求15所述的分離的、合成的或重組的多肽，其中所述醛縮酶活性包括KHG醛縮酶活性。
19.包含權(quán)利要求15中所述多肽的蛋白制劑，其中所述蛋白制劑是液體、固體或凝膠。
20.制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括 (a)向所述細(xì)胞中引入權(quán)利要求I的異源核酸序列，由此產(chǎn)生轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞； (b)從所述轉(zhuǎn)化的細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物， 其中任選地，步驟(a)進(jìn)ー步包括通過植物細(xì)胞原生質(zhì)體的電穿孔或顯微注射導(dǎo)入所述異源核酸序列， 并且任選地，步驟(a)包括通過DNA微粒轟擊或通過使用根瘤農(nóng)桿菌宿主將所述異源核酸序列直接導(dǎo)入植物組織中。
21.在植物細(xì)胞中表達(dá)異源核酸序列的方法，包括 (a)用可操作地連接到啟動子的權(quán)利要求I中所述的異源核酸序列轉(zhuǎn)化所述植物細(xì)胞； (b)在所述植物細(xì)胞表達(dá)所述異源核酸序列的條件下培養(yǎng)所述植物。
22.在組合物中切割碳-碳鍵的方法，包括以下步驟 (a)提供權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述具有醛縮酶活性的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽； (b)提供包含碳-碳鍵的組合物；和 (C)在所述醛縮酶切割所述組合物中所述碳-碳鍵的條件下，使步驟(a)所述的多肽與步驟(b)所述的組合物接觸， 其中任選地，所述多肽具有丙酮酸醛縮酶、HMG醛縮酶和/或KHG醛縮酶活性。
23.形成碳-碳鍵的方法，包括以下步驟 (a)提供權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述具有醛縮酶活性的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽； (b)提供供體和受體化合物；和 (C)在所述醛縮酶形成所述碳-碳鍵的條件下，使步驟(a)所述的多肽與步驟(b)所述的化合物接觸， 其中任選地，所述多肽具有丙酮酸醛縮酶、HMG醛縮酶和/或KHG醛縮酶活性。
24.面團(tuán)或面包產(chǎn)物，其包含權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽，其中任選地，所述多肽具有醛縮酶，如丙酮酸醛縮酶，如HMG和/或KHG醛縮酶活性。
25.面團(tuán)處理的方法，包括在足以處理所述面團(tuán)的條件下，使面團(tuán)或面包產(chǎn)物與權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的至少ー種多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽接觸。
26.飲料，其含有權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽，其中任選地，所述多肽具有丙酮酸醛縮酶，HMG醛縮酶和/或KHG醛縮酶活性。
27.飲料生產(chǎn)的方法，包括在足以降低所述飲料粘度的條件下，給予飲料或飲料前體至少ー種權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的多肽,或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽，其中任選地，所述飲料或飲料前體是麥芽汁或啤酒。
28.食品添加劑、飼料添加剤、飲料添加劑或營養(yǎng)補(bǔ)充劑，含有權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽，其中任選地，所述多肽具有醛縮酶，例如丙酮酸醛縮酶，例如HMG和/或KHG醛縮酶活性。
29.在動物膳食中利用醛縮酶作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑的方法，所述方法包括 制備包含醛縮酶的營養(yǎng)補(bǔ)充劑，所述醛縮酶包含權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽的至少30個(gè)連續(xù)氨基酸；和 給予動物所述營養(yǎng)補(bǔ)充劑， 其中任選地，所述動物是人類，或所述動物是反芻動物或單胃動物， 并且任選地，所述醛縮酶通過在選自細(xì)菌、酵母、植物、昆蟲、真菌和動物的生物體中表達(dá)編碼所述醛縮酶的多核苷酸而制備出來，以及任選地，所述生物體選自粟酒裂殖酵母、釀酒酵母、巴斯德畢赤酵母、大腸桿菌、鏈霉菌屬某種、桿菌屬某種和乳酸桿菌屬某種。
30.可食用酶輸送基質(zhì)或小丸，其包含熱穩(wěn)定重組醛縮酶，所述醛縮酶包括權(quán)利要求.15到18中任一項(xiàng)所述的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽，其中任選地，所述多肽具有醛縮酶，例如丙酮酸醛縮酶，例如HMG和/或KHG醛縮酶活性。
31.向動物輸送醛縮酶補(bǔ)充劑的方法，所述方法包括制備含有顆粒狀可食用載體和熱穩(wěn)定重組醛縮酶的可食用酶輸送基質(zhì)或小丸，其中所述的小丸容易將包含在其中的醛縮酶分散至含水介質(zhì)中，并且所述重組醛縮酶包括權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽；和給予所述動物所述可食用的酶輸送基質(zhì)或小丸， 其中任選地，所述顆粒狀可食用載體包括選自谷物胚芽、去油的谷物胚芽、干草、苜蓿、梯牧草、大豆売、向日葵籽粉和小麥粗粉的載體， 并且任選地，所述可食用載體包含去油的谷物胚芽， 并且任選地，所述醛縮酶被糖基化以在制丸的條件下提供熱穩(wěn)定性， 并且任選地，所述輸送基質(zhì)通過將含有谷物胚芽和醛縮酶的混合物制丸而形成， 并且任選地，所述制丸條件包括應(yīng)用蒸汽，以及可選地，所述制丸條件包括應(yīng)用超過大約80°C的溫度大約5分鐘，所述酶保留每毫克酶至少350至大約900単位的比活性。
32.食品或飼料，包含權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽，其中任選地，所述多肽具有包括醛縮酶，如丙酮酸醛縮酶，如HMG和/或KHG醛縮酶活性的活性。
33.制備食品或飼料的方法，包括使組合物與權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述的多肽，或由權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述核酸編碼的多肽接觸，所述組合物包括含有碳-碳鍵的化合物， 其中任選地，所述多肽具有包括醛縮酶，如丙酮酸醛縮酶，如HMG和/或KHG醛縮酶活性的活性。
34.包含多肽的組合物，所述多肽如權(quán)利要求15到18中任一項(xiàng)所述，或所述多肽由包含權(quán)利要求I到4中任一項(xiàng)所述序列的核酸編碼。
35.權(quán)利要求15所述的多肽，其沒有信號序列。
36.權(quán)利要求15所述的多肽，其進(jìn)ー步包含異源序列。
37.權(quán)利要求15所述的多肽，其中所述多肽是具有醛縮酶活性的片段。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有醛縮酶活性，包括丙酮酸醛縮酶，例如沒有限制地，HMG和/或KHG醛縮酶活性的多肽，編碼這些多肽的多核苷酸，和制備并使用這些多核苷酸及多肽的方法。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及具有醛縮酶活性，包括丙酮酸醛縮酶，例如沒有限制地，HMG和/或KHG醛縮酶活性，包括熱穩(wěn)定性和耐熱活性的多肽，編碼這些酶的多核苷酸，和制備并使用這些多核苷酸及多肽的方法。依據(jù)本發(fā)明的多肽可以被用于多種藥物、農(nóng)業(yè)和工業(yè)環(huán)境。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了多肽和生物合成途徑，它們被用于產(chǎn)生R-2-羥基2-(吲哚-3基甲基)-4-酮戊二酸(R-MP)和某些monatin立體異構(gòu)體，如R,R和S,R monatin及其鹽，以及monatin衍生物的某些立體異構(gòu)體，如R,R和S,R構(gòu)型及其鹽。
文檔編號C12N15/63GK102690833SQ201210175110
公開日2012年9月26日 申請日期2007年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月7日
發(fā)明者D·P·維那, E·伯克, L·趙, P·M·希克斯, P·盧京比爾, T·理查德森 申請人:維萊尼姆公司