專利名稱：一種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物有效成分提取領(lǐng)域，具體是一種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的工藝。
背景技術(shù)：
白藜蘆酉享(又名苗三酹),化學名為3，4, 5,-三輕基二苯乙烯(3，4, 5,-trihydrolystiIbene),是含有芪類結(jié)構(gòu)的非黃酮多 )類化合物。白藜蘆醇是植物在受到應激時自身合成的一種抗毒素，具有重要的順利活性，在抑制癌細胞、降低血脂、預防心血管疾病、抗氧化、延緩衰老等方面有較顯著的作用，被喻為繼紫杉醇之后又一新的綠色抗癌藥物。主要存在于虎杖、葡萄、花生等植物中，研究表明，虎杖中白藜蘆醇的含量最高。
查新發(fā)現(xiàn)，關(guān)于“從虎杖中提取白藜蘆醇”方面的文獻和專利已有報道。中國專利“從虎杖中制備高純度白藜蘆醇的工藝”(ZL201110125337)公開的是使用有機溶劑萃取，氧化鋁柱層析分離純化白藜蘆醇，中國專利“一種從虎杖中提取純化白藜蘆醇的新方法”(ZL200510019788. I)公開的是采用酸催化水解，大孔吸附樹脂分離純化白藜蘆醇，中國專利“虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法”(ZL200310112538. 3)公開的是采用聚酰胺層析法分離純化白藜蘆醇，中國專利“從虎杖中提取純化98%以上的白藜蘆醇的工藝”(ZL200810032067. 8)是將虎杖先提取后發(fā)酵，采用專用的絮凝劑絮凝沉淀，氧化鋁層析分離純化白藜蘆醇，目前采用堿水洗脫白藜蘆醇的文獻未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡單，成本低，快速制備白藜蘆醇的方法，其工藝步驟如下I)將虎杖藥材干燥并粉碎，得虎杖粉；2)加水浸潤虎杖粉，在浸潤后的虎杖粉中加入復合酶，恒溫發(fā)酵，使白藜蘆醇的類似物虎杖苷轉(zhuǎn)化成白藜蘆醇；3)用乙醇回流提取；4)將提取液合并、過濾，濃縮；加入純凈水沉淀，離心，取上清液；5)上清液上大孔吸附樹脂，開始用純凈水洗脫至無色，然后用堿水洗脫，收集堿水洗脫液，調(diào)pH=2. 5-3. 5，離心，取上清液；6)上清液繼續(xù)上大孔吸附樹脂，第一次用純凈水洗脫至無色，第二次用10%乙醇洗脫，棄去,第三次用50% 95%乙醇洗脫，收集洗脫液；7)將收集的洗脫液濃縮干燥。本發(fā)明的優(yōu)選方案為I)將虎杖藥材干燥并粉碎，得虎杖粉；2)加水浸潤虎杖粉，在浸潤后的虎杖粉中加入復合酶，置于溫度控制在35°C 60°C的容器內(nèi)，恒溫發(fā)酵24 72小時，使白藜蘆醇的類似物虎杖苷轉(zhuǎn)化成白藜蘆醇；
3)加入虎杖藥材重量6 12倍的40-95%乙醇，回流提取；4)將提取液合并、過濾，濃縮回收乙醇至無醇味，加入I 3倍水沉淀，離心，取上
清液；5)上清液上大孔吸附樹脂，開始用純凈水洗脫至無色，然后用O. 4% 1%的堿水洗脫，收集堿水洗脫液，用稀鹽酸調(diào)pH=2. 5-3. 5，離心，取上清液；6)上清液繼續(xù)上大孔吸附樹脂，第一次用純凈水洗脫至無色，第二次用10% 35%乙醇洗脫2 3BV，棄去，第三次用50% 95%乙醇洗脫，收集3 6BV洗脫液；7)將收集洗脫液濃縮干燥。本發(fā)明提供的更優(yōu)選技術(shù)方案為 (I)干燥虎杖藥材粉碎到通過80目篩> 90% ；·(2)加水浸潤虎杖粉；在復合酶中加入水，復合酶與水的比例為I (g) =150-250(ml)，調(diào)pH=3-5，然后加入到浸潤后的虎杖粉中，置于溫度控制在50°C 60°C的容器內(nèi)，恒溫發(fā)酵50 60小時，使白藜蘆醇的類似物虎杖苷轉(zhuǎn)化成白藜蘆醇；(3)加入虎杖藥材重量8 12倍的80%乙醇，回流提取兩次，每次I 2小時；(4)將兩次虎杖提取液合并、過濾，濃縮回收乙醇至基本無醇味，加入I 3倍水沉淀，離心，取上清液；(5)上清液上大孔吸附樹脂，開始用純凈水洗脫至基本無色，然后用O. 4% O. 5%的堿水洗脫，收集堿水洗脫液，用O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3，離心，取上清液；(6)上清液繼續(xù)上大孔吸附樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用20% 25%乙醇洗脫2 3BV，棄去，第三次用50% 60%乙醇洗脫，收集3 6BV洗脫液；(7)將收集的洗脫液濃縮干燥。本發(fā)明提供的更優(yōu)選技術(shù)方案中，步驟(2)中的復合酶與水的用量比為復合酶水=1 (g) :200 (ml), PH值調(diào)至5 ;復合酶的加入量與虎杖粉的重量比為復合酶虎杖粉=1-3:80-100。最優(yōu)選復合酶的加入量與虎杖粉的重量比為復合酶虎杖粉=1:100。本發(fā)明中所述的堿優(yōu)選強堿。如氫氧化鈉、氫氧化鉀等。本發(fā)明具有以下優(yōu)點I、文獻只有堿水提取，本發(fā)明首次采用堿水洗脫，而且在一定的濃度下，目標成分針對性比較強，雜質(zhì)干擾少。2、樹脂可以是AB_8、D101等對白藜蘆醇有吸附的常規(guī)樹脂，使用范圍比較廣；3、整個工藝周期短，設(shè)備簡單，成本低，除了乙醇，沒有其它有機試劑。4、產(chǎn)品純度可達65%以上。


圖I是產(chǎn)品的高效液相色譜圖。
具體實施例方式圖I是產(chǎn)品的高效液相色譜圖實施例I :將虎杖藥材干燥粉碎成虎杖粉，過80目篩，取虎杖粉100g，加水浸潤；lg的復合酶加入200ml水中，調(diào)pH=5，然后拌入虎杖粉，50°C水浴上發(fā)酵48h。80%乙醇回流提取兩次，第一次12倍量，I. 5h，第二次8倍量，Ih,過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加入500ml水，離心，取上清液，上DlOl樹脂(天津市海光化工有限公司)，純凈水沖洗至基本無色，然后O. 5%NaOH水溶液洗脫，收集3BV，O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3，離心，取上清液，再上DlOl樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用25%乙醇洗脫3BV，第三次用60%乙醇洗脫，收集5BV60%乙醇洗脫液，洗脫液濃縮、干燥，HPLC測定，得純度60. 2%的白藜蘆醇。實施例2 將虎杖藥材干燥粉碎成虎杖粉，過80目篩，取虎杖粉100g，加水浸潤；Ig的復合酶加入200ml水中，調(diào)pH=5，然后拌入虎杖粉，50°C水浴上發(fā)酵52h。80%乙醇回流提取兩次，第一次12倍量，I. 5h，第二次10倍量，Ih,過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加入600ml水，離心，取上清液，上AB-8樹脂(西安藍曉科技有限公司)，純凈水沖洗至基本無色，然后O. 6%Na0H水溶液洗脫，收集3BV，O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3，離心，取上清液，再上AB-8樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用30%乙醇洗脫3BV，第三次用75%乙醇洗脫，收集5BV75%乙醇洗脫液，洗脫液濃縮、干燥，HPLC測定，得純度61. 1%的白藜蘆醇。·實施例3:將虎杖藥材干燥粉碎成虎杖粉，過80目篩，取虎杖粉100g，加水浸潤；lg的復合酶加入200ml水中，調(diào)pH=5，然后拌入虎杖粉，50°C水浴上發(fā)酵60h。80%乙醇回流提取兩次，第一次12倍量，I. 5h，第二次10倍量，Ih,過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加入600ml水，離心，取上清液，上AB-8樹脂，純凈水沖洗至基本無色，然后O. 5%Na0H水溶液洗脫，收集3BV, O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3，離心，取上清液，再上AB-8樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用25%乙醇洗脫3BV，第三次用60%乙醇洗脫，收集5BV60%乙醇洗脫液，洗脫液濃縮、干燥，HPLC測定，得純度65. 1%的白藜蘆醇。實施例4 將虎杖藥材干燥粉碎成虎杖粉，過80目篩，取虎杖粉80g，加水浸潤；Ig的復合酶加入150ml水中，調(diào)pH=3，然后拌入虎杖粉，60°C水浴上發(fā)酵50h。80%乙醇回流提取兩次，第一次8倍量，I. 5h，第二次12倍量，2h，過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加入500ml水，離心，取上清液，上AB-8樹脂，純凈水沖洗至基本無色，然后O. 4%NaOH水溶液洗脫，收集5BV，O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3，離心，取上清液，再上AB-8樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用20%乙醇洗脫2BV，第三次用50%乙醇洗脫，收集6BV50%乙醇洗脫液，洗脫液濃縮、干燥，HPLC測定，得純度62. 5%的白藜蘆醇。實施例5 將虎杖藥材干燥粉碎成虎杖粉，過80目篩，取虎杖粉100g，加水浸潤；3g的復合酶加入250ml水中，調(diào)pH=4，然后拌入虎杖粉，35°C水浴上發(fā)酵24h。40%乙醇回流提取兩次，第一次6倍量，I. 5h，第二次12倍量，2h，過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加入1500ml水，離心，取上清液，上AB-8樹脂，純凈水沖洗至基本無色，然后l%Na0H水溶液洗脫，收集4BV，0. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=2. 5，離心，取上清液，再上AB-8樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用10%乙醇洗脫3BV，第三次用95%乙醇洗脫，收集3BV95%乙醇洗脫液，洗脫液濃縮、干燥，HPLC測定，得純度61. 5%的白藜蘆醇。實施例6
將虎杖藥材干燥粉碎成虎杖粉，過80目篩，取虎杖粉80g，加水浸潤；3g的復合酶加入220ml水中，調(diào)pH=3. 5，然后拌入虎杖粉，45°C水浴上發(fā)酵48h。60%乙醇回流提取兩次，第一次8倍量，Ih,第二次10倍量，2h，過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加入800ml水，離心，取上清液，上AB-8樹脂，純凈水沖洗至基本無色，然后O. 5%Na0H水溶液洗脫，收集5BV，O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3. 5，離心，取上清液，再上AB-8樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用30%乙醇洗脫2BV，第三次用80%乙醇洗脫，收集6BV80%乙醇洗脫液，洗脫液濃縮、干燥，HPLC測定，得純度62. 5%的白藜蘆醇。顯然，本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而這些屬于本發(fā)明的精神所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍之中。·
權(quán)利要求
1.ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于，包括以下步驟 1)將虎杖藥材干燥并粉碎，得虎杖粉； 2)加水浸潤虎杖粉，在浸潤后的虎杖粉中加入復合酶，恒溫發(fā)酵，使白藜蘆醇的類似物虎杖苷轉(zhuǎn)化成白藜蘆醇； 3)用こ醇回流提取； 4)將提取液合并、過濾，濃縮；加入純凈水沉淀，離心，取上清液； 5)上清液上大孔吸附樹脂，開始用純凈水洗脫至無色，然后用堿水洗脫，收集堿水洗脫液，調(diào)pH=2. 5-3. 5，離心，取上清液； 6)上清液繼續(xù)上大孔吸附樹脂，第一次用純凈水洗脫至無色，第二次用10%こ醇洗脫，棄去,第三次用50% 95%こ醇洗脫，收集洗脫液； 7)將收集的洗脫液濃縮干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于，包括以下步驟 1)將虎杖藥材干燥并粉碎，得虎杖粉； 2)加水浸潤虎杖粉，在浸潤后的虎杖粉中加入復合酶，置于溫度控制在35°C 60°C的容器內(nèi)，恒溫發(fā)酵24 72小時，使白藜蘆醇的類似物虎杖苷轉(zhuǎn)化成白藜蘆醇； 3)加入虎杖藥材重量6 12倍的40-95%こ醇，回流提取； 4)將提取液合并、過濾，濃縮回收こ醇至無醇味，加入I 3倍水沉淀，離心，取上清液； 5)上清液上大孔吸附樹脂，開始用純凈水洗脫至無色，然后用O.4% 1%的堿水洗脫，收集堿水洗脫液，用稀鹽酸調(diào)pH=2. 5-3. 5，離心，取上清液； 6)上清液繼續(xù)上大孔吸附樹脂，第一次用純凈水洗脫至無色，第二次用10% 35%こ醇洗脫2 3BV，棄去，第三次用50% 95%こ醇洗脫，收集3 6BV洗脫液； 7)將收集洗脫液濃縮干燥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于，包括以下步驟 (1)干燥虎杖藥材粉碎到通過80目篩>90% ； (2)加水浸潤虎杖粉；在復合酶中加入水，復合酶與水的重量體積比為I:150-250，調(diào)pH=3-5，然后加入到浸潤后的虎杖粉中，置于溫度控制在50°C 60°C的容器內(nèi)，恒溫發(fā)酵50 60小時，使白藜蘆醇的類似物虎杖苷轉(zhuǎn)化成白藜蘆醇； (3)加入虎杖藥材重量8 12倍的80%こ醇，回流提取兩次，每次I 2小時； (4)將兩次虎杖提取液合并、過濾，濃縮回收こ醇至基本無醇味，加入I 3倍水沉淀，離心，取上清液； (5)上清液上大孔吸附樹脂，開始用純凈水洗脫至基本無色，然后用O.4% O. 5%的堿水洗脫，收集堿水洗脫液，用O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3，離心，取上清液； (6)上清液繼續(xù)上大孔吸附樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用20% 25%こ醇洗脫2 3BV，棄去，第三次用50% 60%こ醇洗脫，收集3 6BV洗脫液； (7)將收集的洗脫液濃縮干燥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于步驟(2)中的復合酶與水的重量體積比為復合酶水=Ig 200ml,調(diào)PH值至5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任ー權(quán)利要求所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于步驟(2)中所述復合酶的加入量與虎杖粉的重量比為復合酶虎杖粉=1-3:80-100。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于步驟(2)中所述復合酶的加入量與虎杖粉的重量比為復合酶虎杖粉=1:100。
7.根據(jù)權(quán)利要求6中所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于所述的堿為強堿。
8.根據(jù)權(quán)利要求7中所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于所述的堿為如氫氧化鈉、氫氧化鉀。
9.根據(jù)權(quán)利要求8中所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于所述大孔吸附樹脂選自的DlOl樹脂或西安藍曉科技有限公司的AB-8樹脂。
10.根據(jù)權(quán)利要求9中所述的ー種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的エ藝，其特征在于包括如下步驟 取干燥虎杖粉末100g，Ig的復合酶加入200ml水中，調(diào)pH=5，然后拌入藥材，50°C水浴上發(fā)酵60h。80%こ醇回流提取兩次，第一次12倍量，I. 5h，第二次10倍量，lh，過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加入600ml水，離心，取上清液，上AB-8樹脂，純凈水沖洗至基本無色，然后O. 5%NaOH水溶液洗脫，收集3BV，O. 5mol/L稀鹽酸調(diào)pH=3，離心，取上清液，再上AB-8樹脂，第一次用純凈水洗脫至基本無色，第二次用25%こ醇洗脫3BV，第三次用60%こ醇洗脫，收集5BV60%こ醇洗脫液，洗脫液濃縮、干燥，得白藜蘆醇。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的工藝，它包括將干燥虎杖藥材粉碎過篩，加水浸潤后加入復合酶，在35℃～60℃下恒溫發(fā)酵24～72h；然后經(jīng)乙醇提取，洗脫，收集洗脫液，濃縮、干燥而得白藜蘆醇。本發(fā)明的工藝過程安全、經(jīng)濟、操作簡便，并且易于實現(xiàn)從含有虎杖苷和/或白藜蘆醇的植物和/或提取物中規(guī)模化生產(chǎn)制備高純度的白藜蘆醇。
文檔編號C12P7/22GK102838456SQ20121034409
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月17日
發(fā)明者鄧義德 申請人:湖南希爾天然藥業(yè)有限公司, 湖南希爾藥物研究有限公司