專利名稱：一株降解高分子多環芳烴的菌株及其在污染土壤生物修復中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于環境工程和微生物工程技術領域，尤其涉及一株降解多環芳烴的根癌農根菌iAgrobacterium tumefaciens) tzym及其在污染土壤生物修復中的應用。
背景技術：
多環芳烴(PAHs)是一類持久性有機污染物(POPs)。固體廢舊金屬拆解當地的PAHs污染源主要來自于廢舊機器油、電器產品的潤滑油和來自廢舊金屬拆解中的木材、有機高分子化合物、紙張等含碳氫化合物的物質經不完全燃燒或在還原性氣氛中經熱分解而生成的。由于多環芳烴及其衍生物具有致癌性、致突變性和致畸性，以及急性毒性和亞致死作用，使得多環芳烴污染土壤的控制和修復迫在眉睫。·
多環芳烴(PAHs)污染土壤修復是當前環境修復中研究的熱點。生物降解是對PAHs污染土壤進行修復的重要途徑之一。對于多環芳烴污染，國內外進行了大量多環芳烴降解微生物的篩選工作。到目前為止，已分離出多個具有多環芳烴降解能力的菌株，如假單胞菌屬、分枝桿菌屬、芽孢桿菌屬等，并沒有根瘤菌科用于多環芳烴修復的報道。低分子量(2個或3個苯環)PAHs，如萘、菲、蒽，容易作為微生物生長所需的碳源而快速降解，而高分子量PAHs包含4個或以上的苯環，因其低水溶性和高穩定性，不易被微生物降解，成為消除PAHs污染的難點。

發明內容
本發明針對現有技術中高分子多環芳烴降解菌降解能力不足之處，提供一種降解高分子多環芳烴菌株，該菌株可以應用于治理高分子多環芳烴污染土壤。為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案得以實現的本發明提供的根癌農根菌(Agrobacterium iawe/aciefls),命名為tzym,于2012年6月24日保藏于“中國典型培養物保藏中心”，其保藏號CCTCC NO M 2012243。地址中國武漢武漢大學。所述菌株具有以多環芳烴為唯一碳源和能源進行生長的能力。所述降解多環芳烴的菌株在被多環芳烴污染的土壤的生物修復中的應用。所述多環芳烴選自花、苯并[a]蒽、苯并[b]突蒽、苯并[a]花、二苯并[a,b]蒽中的一種或多種的混合物。所述菌株的16SrDNA序列如SEQ NO. I所示。利用所述降解多環芳烴的菌株進行土壤生物修復的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成選取多環芳烴污染土壤100g，將根癌農根菌iAgrobacterium tumefaciens)tyzm按質量百分比3. 5%用量與土壤混合均勻，加水使土壤含水率保持在15%，放入恒溫振蕩器中，控制培養溫度在20°C的恒溫條件下,振蕩培養修復120小時。tzym是從浙江省臺州市固體廢棄物拆解場某污染土壤中分離并篩選得到。菌株可在15 35°C，pH值6. O 8. 5培養條件下較好生長；在LB固體平板上生長菌落形態為圓形，乳白色，微隆起，邊緣整齊，濕潤；細胞桿狀，革蘭氏染色陰性；無芽孢；有莢膜，有鞭毛。作為優選，本發明所述菌株能以高分子多環芳烴為唯一碳源和能源生長。上述高分子多環芳烴降解菌的篩選方法，可按如下步驟依次實施
(1)從固廢拆解場采集距地表下5 20cm處表層土壤樣品，作為菌源進行自然富集培養；所述富集培養基含有葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、MgSO4 ；
(2)取(I)中所述富集培養液接種于無機鹽選擇培養基中進行選擇培養，所無機鹽選擇培養基含有檸檬酸鈉、(NH4) 2S04,MgSO4, K2HPO4, KH2PO4 ;添加多環芳烴(高分子多環芳烴花、苯并[a]蒽、苯并[b]突蒽、苯并[a]花、二苯并[a,b]蒽的濃度均為150mg/L 250mg/L)；
(3)取(2)中所述選擇培養物稀釋涂布于固體無機鹽選擇培養基上，進行分離進行分離即得到多環芳烴降解菌tzym。上述高分子多環芳烴降解菌tzym可用于高分子多環芳烴土壤污染的生物修復。本發明tzym可在15 35°C, pH值6. O 8. 5培養條件下較好生長；菌株形態特征為菌株形態特征為桿狀，革蘭氏染色陰性；無芽孢；有莢膜，有鞭毛；在LB固體平板上生長菌落形態為圓形，乳白色，微隆起，邊緣整齊，濕潤。tzym在LB (胰蛋白胨I. 0%，酵母提取物O. 5g%，氯化鈉I. 0%)固體培養基培養24小時菌落特征為圓形，菌落直徑2 3mm，白色，表面光滑，邊緣整齊。tzym的生理生化特征,見表I。表ITzym的生理生化特征
權利要求
1.一株降解高分子多環芳烴的菌株，其特征在于，該菌株為根癌農根菌(Agrobacterium tumefaciens) tzym,在中國典型培養物保藏中心的保藏號為CCTCC NO M2012243，具備降解高分子多環芳烴的能力。
2.根據權利要求I所述降解高分子多環芳烴的菌株，其特征在于所述菌株具有以多環芳烴為唯一碳源和能源進行生長的能力。
3.根據權利要求I所述多環芳烴降解菌株，其特征在于所述菌株在多環芳烴污染土壤中具有良好的降解多環芳烴的能力。
4.根據權利要求I所述降解高分子多環芳烴的菌株，其特征在于所述多環芳烴選自芘、苯并[a]蒽、苯并[b]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a，b]蒽的一種或多種的混合物。
5.根據權利要求I所述降解高分子多環芳烴的菌株在多環芳烴污染的土壤的生物修復中的應用。
6.根據權利要求I所述降解高分子多環芳烴的菌株，其特征在于所述菌株的16SrDNA序列如SEQ NO. I所示。
7.利用權利要求I所述降解高分子多環芳烴的菌株進行土壤生物修復的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成選取多環芳烴污染土壤IOOg,將根癌農根菌(Agrobacteriuintumefaciens) Tyzm按質量百分比3. 5%用量與土壤混合均勻，加水使土壤含水率保持在15%,放入恒溫振蕩器中，控制培養溫度在20°C的恒溫條件下,振蕩培養修復120小時。
全文摘要
本發明屬于環境工程和微生物工程技術領域，尤其涉及一株降解多環芳烴的根癌農根菌(Agrobacteriumtumefaciens)tzym及其在污染土壤生物修復中的應用。本發明提供的根癌農根菌(Agrobacteriumtumefaciens)，命名為tzym，于2012年6月24日保藏于“中國典型培養物保藏中心”，其保藏號CCTCCNOM2012243。地址中國武漢武漢大學。該菌株可以應用于治理高分子多環芳烴污染土壤。
文檔編號C12N1/20GK102911898SQ20121038595
公開日2013年2月6日 申請日期2012年10月12日 優先權日2012年10月12日
發明者于紅艷, 張昕欣, 陳紅云 申請人:臺州職業技術學院