專利名稱：細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑的制作方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
豆豉始創(chuàng)于中國(guó)，原名“幽菽”，據(jù)《中國(guó)化學(xué)史》解釋“幽菽”是大豆煮熟后，經(jīng)過(guò)幽 閉發(fā)酵而成的意思，后更名為豉。我國(guó)的豆豉可分為霉菌型豆豉和細(xì)菌型豆豉兩大類。細(xì) 菌型豆豉是利用枯草桿菌(Bacillussubtilis)在較高溫度下，繁殖于蒸熟大豆上，借助其 較強(qiáng)的蛋白酶生產(chǎn)出風(fēng)味獨(dú)特的食品，其最大特點(diǎn)是產(chǎn)生粘性物質(zhì)，并可拉絲。中國(guó)豆豉在 中醫(yī)藥學(xué)上是一味中藥，也是一種傳統(tǒng)的發(fā)酵大豆食品，被我國(guó)衛(wèi)生部定為第一批藥食兼 用品種。豆豉在發(fā)酵過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)素獲得了有效釋放，游離異黃酮、胨、多肽、氨基酸、礦物質(zhì) 和維生素等大大提高，較大豆更易被人體消化吸收。現(xiàn)代研究表明豆豉存在豆豉纖溶酶，對(duì) 纖維蛋白(原)、纖溶酶原、凝血酶、胰激肽釋放酶等凝血和纖溶因子具有激活、降解和失活 等多種作用，在體內(nèi)和體外均具有明顯的降解血栓纖維蛋白的能力，還可通過(guò)激活血纖維 蛋白酶原間接溶解纖維蛋白。與日本納豆相似，具有降血壓、防治糖尿病、心腦血管疾病等 多種保健作用。
豆豉以其特殊的風(fēng)味、豐富的品種、獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)保健作用，在國(guó)際市場(chǎng)上曾具有極 高的聲譽(yù)。然而，許多豆豉品種采用高鹽保藏，只能作為調(diào)味食用；而且傳統(tǒng)發(fā)酵采用自然 發(fā)酵，菌種不一，工藝繁瑣，豆豉品質(zhì)不穩(wěn)定，產(chǎn)品質(zhì)量難以保證，產(chǎn)品檔次較低，國(guó)際市場(chǎng) 競(jìng)爭(zhēng)力弱。因此進(jìn)行細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑研究，不僅可以實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化， 保證質(zhì)量，而且可以簡(jiǎn)化發(fā)酵工藝，滿足城鎮(zhèn)家庭自制鮮食的需求，防止功能性物質(zhì)的失 活，保證豆豉的保健作用，對(duì)推廣豆豉保健食品、提升群眾身體素質(zhì)具有重要的意義和良好 的社會(huì)效益。
發(fā)明人從取自廣西壯族自治區(qū)百色市樂(lè)業(yè)縣的傳統(tǒng)細(xì)菌型豆豉中分離篩選到 傳統(tǒng)細(xì)菌型豆豉的主要發(fā)酵微生物DC8，經(jīng)鑒定為枯草芽胞桿菌枯草亞種(Bacillus subtilis subsp subtilis),本發(fā)明旨在公開(kāi)一種以 Bacillus subtilis subsp subtilis 為菌種的細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑的制作方法，以期對(duì)我國(guó)細(xì)菌性豆豉進(jìn)行推廣和普 及。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑的制作方法，用于工業(yè)化 生產(chǎn)或家庭自制細(xì)菌型豆豉，實(shí)現(xiàn)我國(guó)傳統(tǒng)細(xì)菌型豆豉制作的標(biāo)準(zhǔn)化，簡(jiǎn)化發(fā)酵工藝，保證 質(zhì)量和安全。
本發(fā)明的技術(shù)方案是
一、通過(guò)以馬鈴薯液體培養(yǎng)基作為培養(yǎng)基，采用38°C 42°C、120r/min 140r/ min搖床培養(yǎng)或發(fā)酵罐通氣或攪拌培養(yǎng)，對(duì)枯草芽胞桿菌枯草亞種的生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)芽胞曲 線進(jìn)行測(cè)定，選擇芽胞總數(shù)最多的培養(yǎng)時(shí)間段72h 84h作為培養(yǎng)時(shí)間，制備枯草芽胞桿菌枯草亞種芽胞和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞混合菌懸液。
二、通過(guò)加入復(fù)合干燥保護(hù)劑，充分混勻，然后進(jìn)行噴霧干燥，實(shí)現(xiàn)枯草芽胞桿菌 枯草亞種芽胞和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的微膠囊化，采用鋁箔袋進(jìn)行真空包裝即可獲得細(xì)菌型豆豉直投 式發(fā)酵菌劑。
本發(fā)明的方法是
為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑制作方法為無(wú)菌操作 挑取4°C冰箱馬鈴薯斜面保藏的枯草芽胞桿菌枯草亞種菌苔I環(huán)，接入100mL/250mL三角瓶 的馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，于38°C 42°C、120r/min 140r/min搖床培養(yǎng)16h 24h作為初 級(jí)種子液，接入IL馬鈴薯液體培養(yǎng)基于38°C 42°C培養(yǎng)16h 24h作為次級(jí)種子液，按此 操作逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)作為種子液，然后接入馬鈴薯液體發(fā)酵培養(yǎng)基中于38°C 42°C通氣或 攪拌培養(yǎng)72h 84h，即可獲得芽胞數(shù)占總菌數(shù)達(dá)到85%以上的發(fā)酵液；以此發(fā)酵液直接作 為芽胞和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞混合菌懸液，加入終濃度為6 10%的由海藻糖糖粉和脫脂牛乳乳粉按 照I : I 5組成的復(fù)合干燥保護(hù)劑，攪拌溶解，然后利用噴霧干燥機(jī)在進(jìn)口溫度130°C 160°C、出口溫度為55°C 65°C的條件下進(jìn)行噴霧干燥，即可獲得活菌數(shù)在5. 2X109CFU/g 以上的微膠囊化枯草芽胞桿菌枯草亞種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑，采用鋁箔袋進(jìn)行真空 包裝即為成品。
所述的馬鈴薯液體培養(yǎng)基的配制方法為將馬鈴薯300g去皮切塊，加IOOOmL蒸餾 水，煮沸20min，用紗布過(guò)濾，將濾液補(bǔ)加蒸餾水至IOOOmL,然后加入終濃度為10g/L的蔗糖 或葡萄糖，溶解后調(diào)節(jié)pH為7. O 8. 0，于121°C、0. IMPa滅菌20min。
所述的馬鈴薯斜面培養(yǎng)基配制方法為在馬鈴薯液體培養(yǎng)基中加入15g/L的瓊脂 作為凝固劑。
有益效果本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
芽胞抗逆性強(qiáng)，耐高溫，本發(fā)明通過(guò)對(duì)枯草芽胞桿菌枯草亞種的生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)芽 胞曲線進(jìn)行測(cè)定，選擇芽胞總數(shù)最多的培養(yǎng)時(shí)間段72h 84h作為培養(yǎng)時(shí)間，獲得的發(fā)酵 液中枯草芽胞桿菌枯草亞種的芽胞數(shù)多，有利于通過(guò)噴霧干燥方法獲得活菌數(shù)高的發(fā)酵菌 劑；以海藻糖和脫脂牛乳配制的復(fù)合干燥保護(hù)劑，綜合了海藻糖和脫脂牛乳對(duì)生物細(xì)胞的 非特異性保護(hù)作用，并具有很好的微膠囊化效果，對(duì)芽胞和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞均具有良好的保護(hù)效 果，制備的菌劑殘活菌數(shù)多，常溫保藏時(shí)間長(zhǎng)，常溫保藏5年仍保持有90%的活菌；本發(fā)明 實(shí)現(xiàn)了采用噴霧干燥方法生產(chǎn)高活力發(fā)酵菌劑，較目前普遍采用的冷凍干燥的方法更利于 規(guī)模化生產(chǎn)，能耗更低。目前尚未見(jiàn)以枯草芽胞桿菌枯草亞種芽胞作為菌劑制備主體，以海 藻糖和脫脂牛乳作為復(fù)合干燥保護(hù)劑，通過(guò)噴霧干燥方法制備細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑 的報(bào)道，本發(fā)明具有很好的新穎性和創(chuàng)造性。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I :
無(wú)菌操作挑取4°C冰箱馬鈴薯斜面保藏的枯草芽胞桿菌枯草亞種菌苔I環(huán)，接入 100mL/250mL三角瓶的馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，于38°C 42°C、120r/min 140r/min搖床培 養(yǎng)16h 24h作為初級(jí)種子液，接入IL馬鈴薯液體培養(yǎng)基于38°C 42°C培養(yǎng)16h 24h 作為次級(jí)種子液，按此操作逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)作為種子液，然后接入馬鈴薯液體發(fā)酵培養(yǎng)基中于38°C 42°C通氣或攪拌培養(yǎng)72h 84h，獲得芽胞數(shù)占總菌數(shù)達(dá)到85%以上的發(fā)酵液， 在發(fā)酵液中加入終濃度為6 10%的由海藻糖糖粉和脫脂牛乳乳粉按照I : I 5組成的 復(fù)合干燥保護(hù)劑，攪拌溶解，然后利用噴霧干燥機(jī)在進(jìn)口溫度130°C 160°C、出口溫度為 55°C 65°C的條件下進(jìn)行噴霧干燥，即可獲得活菌數(shù)在5. 2X109CFU/g以上的微膠囊化枯 草芽胞桿菌枯草亞種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑，采用鋁箔袋進(jìn)行真空包裝即為成品。
所述的馬鈴薯液體培養(yǎng)基的配制方法為將馬鈴薯300g去皮切塊，加IOOOmL蒸餾 水，煮沸20min，用紗布過(guò)濾，將濾液補(bǔ)加蒸餾水至IOOOmL,然后加入終濃度為10g/L的蔗糖 或葡萄糖，溶解后調(diào)節(jié)pH為7. O 8. 0，于121°C、0. IMPa滅菌20min。
所述的馬鈴薯斜面培養(yǎng)基配制方法為在馬鈴薯液體培養(yǎng)基中加入15g/L的瓊脂 作為凝固劑配制而成。
實(shí)施例2:
無(wú)菌操作挑取4°C冰箱馬鈴薯斜面保藏的枯草芽胞桿菌枯草亞種菌苔I環(huán)，接入 100mL/250mL三角瓶的馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，于38°C 42°C、120r/min 140r/min搖床培 養(yǎng)16h 24h作為初級(jí)種子液，接入IL馬鈴薯液體培養(yǎng)基于38°C 42°C培養(yǎng)16h 24h作 為次級(jí)種子液，按此操作逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)作為種子液，然后接入馬鈴薯液體發(fā)酵培養(yǎng)基中于 38°C 42°C通氣或攪拌培養(yǎng)72h 84h，即可獲得芽胞數(shù)占總菌數(shù)達(dá)到85%以上的發(fā)酵液； 將發(fā)酵液于8000 X g、4°C離心20min，收集芽胞和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞菌泥沉淀，按每g菌泥加入IOmL 無(wú)菌生理鹽水的比例將菌泥制成細(xì)胞懸液，然后加入終濃度為6 10%的由海藻糖糖粉和 脫脂牛乳乳粉按照I : I 5組成的復(fù)合干燥保護(hù)劑，攪拌溶解，再采用利用噴霧干燥機(jī)在 進(jìn)口溫度130°C 160°C、出口溫度為55°C 65°C的條件下進(jìn)行噴霧干燥，即可獲得活菌數(shù) 在3. 8X 101(lCFU/g以上的微膠囊化枯草芽胞桿菌枯草亞種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑，采 用鋁箔袋進(jìn)行真空包裝即為成品。
所述的馬鈴薯液體培養(yǎng)基的配制方法為將馬鈴薯300g去皮切塊，加IOOOmL蒸餾 水，煮沸20min，用紗布過(guò)濾，將濾液補(bǔ)加蒸餾水至IOOOmL,然后加入終濃度為10g/L的蔗糖 或葡萄糖，溶解后調(diào)節(jié)pH為7. O 8. 0，于121°C、0. IMPa滅菌20min。
所述的馬鈴薯斜面培養(yǎng)基配制方法為在馬鈴薯液體培養(yǎng)基中加入15g/L的瓊脂 作為凝固劑配制而成。
權(quán)利要求
1.一種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑的制作方法，其特征為無(wú)菌操作挑取4°c冰箱馬鈴薯斜面保藏的枯草芽胞桿菌枯草亞種菌苔I環(huán)，接入100mL/250mL三角瓶的馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，于38°C 42°C、120r/min 140r/min搖床培養(yǎng)16h 24h作為初級(jí)種子液，接入IL馬鈴薯液體培養(yǎng)基于38°C 42°C培養(yǎng)16h 24h作為次級(jí)種子液，按此操作逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)作為種子液，然后接入馬鈴薯液體發(fā)酵培養(yǎng)基中于38°C 42°C通氣或攪拌培養(yǎng)72h 84h即為發(fā)酵液，在發(fā)酵液中加入終濃度為6 10%的由海藻糖糖粉和脫脂牛乳乳粉按照I : I 5組成的復(fù)合干燥保護(hù)劑，攪拌溶解，然后利用噴霧干燥機(jī)在進(jìn)ロ溫度130°C 160°C、出口溫度為55°C 65°C的條件下進(jìn)行噴霧干燥即為微膠囊化細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑，采用鋁箔袋進(jìn)行真空包裝即為成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑的制作方法，其特征為以海藻糖糖粉與脫脂牛乳乳粉按I:I 5組成的復(fù)合干燥保護(hù)劑。
全文摘要
本發(fā)明闡述了一種細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑的制作方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域；本發(fā)明是通過(guò)馬鈴薯液體培養(yǎng)基對(duì)枯草芽胞桿菌枯草亞種在38℃～42℃通氣或攪拌培養(yǎng)72h～84h制備富含芽胞的發(fā)酵液，再加入終濃度為6～10％的由海藻糖和脫脂牛乳組成的復(fù)合干燥保護(hù)劑，于進(jìn)口溫度130℃～160℃、出口溫度為55℃～65℃條件下進(jìn)行噴霧干燥，以鋁箔袋真空包裝，即可制成微膠囊化的細(xì)菌型豆豉直投式發(fā)酵菌劑；本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了以噴霧干燥方法生產(chǎn)高活力發(fā)酵菌劑，較冷凍干燥方法更利于規(guī)模化生產(chǎn)，能耗更低；菌劑活菌數(shù)多，常溫保藏5年仍保持90％活菌，可用于工業(yè)化生產(chǎn)或家庭自制細(xì)菌型豆豉，簡(jiǎn)化了發(fā)酵工藝，可實(shí)現(xiàn)傳統(tǒng)細(xì)菌型豆豉制作的標(biāo)準(zhǔn)化，保證其質(zhì)量和安全。
文檔編號(hào)A23L1/20GK102972701SQ20121044287
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月29日
發(fā)明者楊勝遠(yuǎn), 韋錦 申請(qǐng)人:韓山師范學(xué)院